中国生物制品学杂志

2002, (01) 24-26

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重组人IL- 18的高效表达、纯化及诱导KG—1细胞产生高水平IFN-γ
High Expression and Purification of Recombinant Human IL-18 and Bioassay of IFN-γ Secreted with KG-1 Cells Under Induction of Expressed Product

冮宏映,马雁冰,谢天宏,刘勇,杜瑞娟,戴长柏,孙茂盛

摘要(Abstract):

目的 研究IL-18在大肠杆菌中高效表达及纯化工艺,并诱导KG-1 细胞产生IFN-γ。 方法利用RT-nPCR从正常人胎肝组织中扩增获得人IL-18基因,克隆于pThiohisA载体,转化宿主菌BL-21,1mmol/LIPTG;诱导,表达产物以包涵体形式存在,经2%Triton X-100洗涤,在 8mol/L尿素下变性阴离子柱层析,透析复性后再经凝胶过滤纯化,通过纯化产物诱导入骨髓瘤单核细胞 KG-l(ATCC CCL-246)产生 IFN-γ,并检测其生物学活性。结果 获得了在大肠杆菌中的稳定高效表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的25%左右,纯化后纯度可达95%以上,具有显著的刺激细胞产生IFN-γ的活性。结论 制备具有生物学活性高纯度的rhIL-18方法的建立,为基础研究与临床应用开发奠定了基础。

关键词(KeyWords): IL- 18;IFN-γ;KG-l

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 云南省面上项目基金资助课题(1999C0096M)

作者(Author): 冮宏映,马雁冰,谢天宏,刘勇,杜瑞娟,戴长柏,孙茂盛

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DOI: 10.13200/j.cjb.2002.01.26.ganghy.008

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