中国生物制品学杂志

2015, v.28(10) 1028-1032

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可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在E.coil中的表达、纯化及其生物学活性
Expression of soluble tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in E. coli as well as purification and biological activity of expressed product

王少华;郑海锋;王宇涛;杨利军;杨涛;

摘要(Abstract):

目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用E.coli中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(4、6和8 h)和诱导剂IPTG的浓度(0.06、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)。表达产物经Ni亲和层析和离子交换层析纯化后,采用MTT法测定不同浓度TRAIL(终浓度分别为100、200、400 ng/ml)的活性,并检测亲和层析过程中两种洗脱方式(洗脱液4℃留柱过夜后进行洗脱和洗脱液进柱后直接收集流出液)及纯化过程中两次透析的时间(均为24和48 h)对TRAIL活性的影响。结果最佳诱导时间为6 h,最佳IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L。表达产物的表达量占菌体总蛋白的20%,相对分子质量为20 000,可与兔抗人TRAIL单克隆抗体发生特异性结合。TRAIL终浓度为100、200和400 ng/ml的实验组的抑制率分别约为36%、53%和73%。亲和层析的两种洗脱方式的TRAIL活性差异无统计学意义(P>0.05),透析48 h比透析24 h获得的TRAIL活性显著降低(P<0.05)。结论 TRAIL蛋白成功在E.coli中表达,具有抑制肿瘤细胞生长的作用,优化后的TRAIL诱导条件和纯化方法可进一步大量生产高TRAIL蛋白的活性,满足了TRAIL的基础及临床相关研究的要求。

关键词(KeyWords): 可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体;大肠埃希菌;基因表达;纯化;生物学活性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山西省自然科学基金(2012011041-5);; 国家自然科学基金青年基金(81101895);; 山西省高等学校优秀青年学术带头人支持计划[晋教科(2012)10号];; 国家科技部重大新药创制计划(2012ZX09103301-010)

作者(Author): 王少华;郑海锋;王宇涛;杨利军;杨涛;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001083

参考文献(References):

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