中国生物制品学杂志

2008, (01) 30-32

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大肠杆菌色氨酸操纵子基因的克隆与表达
Cloning and Expression of Trp Operon Gene of E.coli

林维平;郭长江;张绪梅;徐琪寿;

摘要(Abstract):

目的克隆并表达大肠杆菌色氨酸操纵子基因,提高其酶活性。方法利用PCR方法,从大肠杆菌31884基因组中直接克隆出色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pET-22b(+)中,构建重组质粒pET-22b(+)-Trpoperon,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析,并测定酶活性。结果凝胶电泳可见PCR扩增产物大小约为7000bp,SDS-PAGE鉴定目的蛋白分别得到了表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了2.7和3.2倍。结论已成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-Trpoperon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性在大肠杆菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。

关键词(KeyWords): 色氨酸操纵子;克隆;表达;酶活性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(30300010);; 天津市科技攻关项目(033182711)

作者(Author): 林维平;郭长江;张绪梅;徐琪寿;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2008.01.35.linwp.005

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