中国生物制品学杂志

2007, (02) 81-86

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白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达
Construction of Multiple Copy Expression Cassette for Expression of Human Interleukin-10 in Pichia pastoris

井申荣;邹全明;洪愉;郭刚;毛旭虎;

摘要(Abstract):

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。

关键词(KeyWords): 白细胞介素-10;毕赤酵母;多拷贝表达盒

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 井申荣;邹全明;洪愉;郭刚;毛旭虎;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2007.02.14.jingshr.003

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