中国生物制品学杂志

2011, v.24(12) 1381-1384

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肺炎球菌表面蛋白A的原核表达及其作为多糖结合疫苗载体的可行性
Prokaryotic Expression of Pneumococcal Surface Protein A(PspA) and Its Feasibility as a Carrier of Polysaccharide Conjugate Vaccine

李启明;唐玉龙;张学峰;靳玉琴;马智静;张靖;

摘要(Abstract):

目的原核表达肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA),并探讨其作为多糖结合疫苗候选载体的可行性。方法合成PspA基因,定向克隆至pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pET-30a-rPspA,转化E.coli Sta(rDE3)菌株,IPTG诱导表达。表达产物经Ni离子亲和层析纯化后,经Western blot鉴定。取破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及纯化的rPspA,分别与A群脑膜炎球菌多糖(Group A meningococcal capsular polysaccharide,GAMP)通过溴化氰活化法进行偶联,获得rPspA-GAMP与TT-GAMP多糖蛋白结合物,对其进行纯化及检定。多糖结合物分别以滴鼻和肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,评价其诱发的体液免疫和黏膜免疫水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定构建正确;表达产物主要以可溶形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%,经纯化后纯度可达90%,可与His单抗特异性结合;肌肉注射途径显示,两种蛋白载体的结合物均能诱发较高水平的体液免疫,不同载体间差异无统计学意义(P>0.05);滴鼻途径显示,载体蛋白rPspA的结合物刺激产生sIgA的能力优于传统载体TT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原核表达并纯化了rPspA,其具有新型多糖蛋白载体的潜力,也可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选载体。

关键词(KeyWords): 肺炎球菌表面蛋白A;多糖结合疫苗;载体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家十一五科技支撑计划资助项目(2008BAI66B03)

作者(Author): 李启明;唐玉龙;张学峰;靳玉琴;马智静;张靖;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2011.12.6.liqm.016

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