中国生物制品学杂志

2014, v.27(12) 1579-1587+1594

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荧光定量PCR方法在脊髓灰质炎病毒突变分析中的应用
Application of fluorescent quantitative PCR method to analysis of poliovirus revertant

王潇潇;刘宇;温智恒;杨永娟;李懿;张中洋;李秀玲;

摘要(Abstract):

目的建立检测脊髓灰质炎病毒突变比例的荧光定量PCR方法,并进行验证及初步应用。方法分别建立检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法,并进行特异性、重复性和灵敏度验证。通过Ct值计算样品的突变比例(revertant proportion,RP),并进行准确性和重复性验证。采用建立的荧光定量PCR方法检测脊髓灰质炎病毒减毒株的突变比例。结果建立的检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法能够特异性扩增相应基因片段;重复性试验Ct值的变异系数(CV)为0.085%~5.564%;灵敏度为1×10-7~1×10-6ng,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型非突变荧光定量PCR可分别检测到含量约0.084 3、0.029 2和0.266 7 CCID50的病毒。荧光定量PCR测定RP的方法经验证发现,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型混合质粒对照的RP检测值与理论值的差异较小,分别为0.040 9±0.037 4、0.008 8±0.034 3和-0.029 6±0.026 8。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒株的RP分别为0.001 0、0.002 0和0.001 7。结论荧光定量PCR分析脊髓灰质炎病毒突变比例的方法,特异性、重复性及准确性均较好,并具有较高的灵敏度,可用于实验室内部对脊髓灰质炎病毒的突变比例测定,并可能成为脊髓灰质炎病毒体内或体外神经毒力评价的替代方法。

关键词(KeyWords): 脊髓灰质炎病毒;疫苗;荧光定量PCR;突变比例

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 科技部863计划(2012AA02A401);; 国药新产品基金(2013SW22);; 重大新药创制(2013ZX09402302);; 北京市科委基金资助基金项目:(Z131100006513007)

作者(Author): 王潇潇;刘宇;温智恒;杨永娟;李懿;张中洋;李秀玲;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000704

参考文献(References):

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