中国生物制品学杂志

2015, v.28(10) 1033-1038

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多价EZH2肿瘤相关抗原肽的制备及其抗原性
Preparation and antigenicity of polyvalent EZH2 tumor associated antigen peptide

杨文;马小猛;李倩;吕亚丰;杨建林;王艳林;

摘要(Abstract):

目的人工设计制备多价EZH2肿瘤相关抗原肽,并鉴定其抗原特性。方法设计合成编码多价EZH2肿瘤相关抗原肽的DNA序列,克隆入原核表达载体p ET-30a(+)中,构建含4个EZH2肿瘤相关抗原肽段(Aa120-128、Aa165-174、Aa291-299、Aa735-742)的重组多价抗原肽原核表达质粒p ET-30a(+)-EZH2-antigen,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA树脂在变性条件下对重组多肽进行亲和层析纯化,Western blot分析重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽的抗原特性。用重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA法检测血清中抗体效价,Western bolt分析多抗的特异性。结果重组原核表达质粒p ET-30a(+)-EZH2-antigen经酶切及测序证实构建正确;表达的重组多价EZH2肿瘤相关抗原肽表观相对分子质量约4 300,主要以包涵体形式存在;纯化的多肽纯度不低于90%,浓度为0.5 mg/ml,且能被兔抗EZH2多抗和兔抗His标签多抗有效识别和结合;纯化的多价EZH2肿瘤相关抗原肽能在动物体内高效诱导抗体生成,抗血清效价为1∶64×104,且能特异性识别和结合PC3人前列腺癌细胞中表达的EZH2蛋白。结论成功制备了一种多价EZH2肿瘤相关抗原肽,该多价抗原肽相对分子质量虽小,但抗原肽密度高,可能具有更强的肿瘤相关抗原的活性,具有重要的应用前景。

关键词(KeyWords): EZH2;抗原肽;肿瘤;免疫治疗

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(81372265);; 湖北省高等学校优秀中青年创新团队计划项目(T201203)

作者(Author): 杨文;马小猛;李倩;吕亚丰;杨建林;王艳林;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001054

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