中国生物制品学杂志

2018, v.31(06) 656-661

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人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒PCR检测方法的建立及验证
Development and verification of a PCR assay for Torque teno sus virus in cells and trypsin for preparation of vaccine for human use as well as final product of the vaccine

任芳芳;钱兴丽;宋彩花;陈巍;赵勇;刘信毅;洪超;杨晓蕾;

摘要(Abstract):

目的建立人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据Gen Bank中登录的TTSu V1(JN688927)及TTSu V2(AY823991)的序列,合成TTSu V1及TTSu V2基因组部分DNA序列,连接于PUC57质粒上,制备重组质粒,以重组阳性质粒DNA为模板,PCR扩增316 bp的TTSu V1片段及252 bp的TTSu V2片段,同时验证方法的灵敏度和特异性。并采用该方法对2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗[3批Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strain,SIPV)收获液、1批SIPV成品、1批冻干甲型肝炎减毒活疫苗[hepatitis A(live)vaccine,freezedried,f HAV]成品、1批肠道病毒71型(enterovivus type 71,EV71)灭活疫苗成品]进行检测。结果建立的PCR法最低分别可检出10 fg/μL TTSu V1和0.01 fg/μL TTSu V2的目的基因;该方法可特异性扩增出TTSu V1和TTSu V2的目的基因条带。2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗均未检出TTSu V1及TTSu V2。结论成功建立了疫苗生产用原材料、细胞、疫苗收获液及成品中TTSu V的PCR检测方法,且该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于本所疫苗生产中对TTSu V的检测。

关键词(KeyWords): 猪细环病毒;细胞;胰酶;减毒活疫苗;灭活疫苗;聚合酶链式反应

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 任芳芳;钱兴丽;宋彩花;陈巍;赵勇;刘信毅;洪超;杨晓蕾;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002207

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