中国生物制品学杂志

2021, v.34(02) 176-180+191

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MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体的制备、纯化及初步应用
Preparation,purification and preliminary application of polyclonal antibody against residual host cell protein of MDCK cells

尹金良;徐文;郭占龙;郭丹丹;姚为民;赵大鹏;张雪梅;常军亮;吴业红;

摘要(Abstract):

目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂乳化后经背部多点皮下免疫家兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,当抗体效价≥1×106时,经家兔颈动脉采血,获得含多克隆抗体的血清。血清先经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE-Sepharose Fast Flow和Protein A精纯,获得多克隆抗体,分析抗体蛋白回收率、纯度及抗原覆盖率。应用制备的多克隆抗体,Western blot法检测MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺各阶段样品的宿主细胞残留蛋白。结果采用不同方法裂解细胞与不同离心力制备的抗原无区别,免疫家兔后,血清抗体效价最高可达320 000;纯化后的多克隆抗体纯度> 94%,DEAE-sepharose Fast Flow柱纯化效果优于Protein A柱;MDCK细胞培养流感病毒纯化初期存在较多的宿主细胞蛋白,经多步骤纯化后,单价原液中未见残留蛋白,仅含流感病毒蛋白。结论成功制备了MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,可定性分析纯化各阶段样品的残留蛋白。

关键词(KeyWords): MDCK宿主细胞残留蛋白;多克隆抗体;纯化;DEAE-sepharose Fast Flow;Protein A

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“重大新药创制”科技重大专项(2015ZX09102016)

作者(Author): 尹金良;徐文;郭占龙;郭丹丹;姚为民;赵大鹏;张雪梅;常军亮;吴业红;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.003268

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