中国生物制品学杂志

2014, v.27(12) 1565-1568

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抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体的制备及鉴定
Preparation and identification of monoclonal antibody against MIC6 of Neospora caninum

田来明;杨滨僮;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;王伟丽;张西臣;

摘要(Abstract):

目的制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组蛋白p GEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类。采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度。结果最终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于Ig G1和Ig G2b亚类。纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×104和1.024×105,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应。结论制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础。

关键词(KeyWords): 新孢子虫;MIC6;单克隆抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): “国家重点基础研究发展计划(973计划)”(2015CB150300);; 国家质检公益性行业专项(201410061);; 吉林省科技发展计划项目(20100222)

作者(Author): 田来明;杨滨僮;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;王伟丽;张西臣;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000701

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