中国生物制品学杂志

2005, (05)

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羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因的构建及在毕赤酵母中的表达
Construction of Hepatitis B Surface Antigen Chimeric Gene Carrying Pre-S2 Epitope at C-Terminus and Expression of The Gene in Pichia pastoris

谭昌耀,蒋丽明,葛永红,袁进,金瓯

摘要(Abstract):

目的构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达。方法用PCR方法,从含乙肝病毒全长基因的质粒中扩增出S和pre-S2(Met1-Gly26)2个基因片段,并将S2融合于S基因的3′端,构建SS2嵌合基因。将上述片段克隆到pBluescriptⅡSK(+)载体中,测序后亚克隆到毕赤酵母表达载体pAO815,构建重组表达质粒。用电转化法将重组质粒导入Pichia GS115细胞,构建重组表达菌株GS115-SS2。重组菌株经甲醇诱导后制备抗原初提液,进行ELISA和Western blot分析。结果表达产物经ELISA检测具有S和前S2抗原性。Western blot分析表明,该融合抗原既能与S抗体结合,也能与前S2抗体结合,其相对分子质量约为27000,与理论值相符。抗原初提物的反向血凝(RPHA)效价达1∶1024,约相当于16μg/ml。结论已成功构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母中得到有效表达。

关键词(KeyWords): 乙肝表面抗原;前S2;嵌合基因;毕赤酵母

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 四川省科技攻关计划项目(04SG0248).

作者(Author): 谭昌耀,蒋丽明,葛永红,袁进,金瓯

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DOI: 10.13200/j.cjb.2005.05.23.tanchy.006

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