中国生物制品学杂志

2006, (01) 21-23+27

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人内毒素结合肽基因的突变及突变体蛋白表达
Mutation and Expression of Human Endotoxin Binding Peptide Gene

孙亚丽;刘友生;王长松;

摘要(Abstract):

目的分析亲代人内毒素结合肽一级结构,选择可能影响其生物学活性的氨基酸对应碱基位点进行突变,克隆基因突变体mEBP基因并研究其蛋白表达。方法以亲代EBP基因为基础,结合DNASIS软件理化性质分析确定突变碱基,应用PCR定点诱变技术进行第5、18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变。并将其克隆至原核融合表达载体pinpointXa-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行表达,经Western blot鉴定。结果突变EBP基因13及52位核苷酸由C突变为A,构建的阳性重组子经酶切及测序鉴定证实与设计序列完全一致,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达生物素化的融合蛋白,Western blot鉴定显示能与抗生物素单克隆抗体结合。结论已成功获得EBP基因突变体,并在大肠杆菌以融合蛋白的形式进行表达。

关键词(KeyWords): 内毒素结合肽;突变;蛋白表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(No·30271342)

作者(Author): 孙亚丽;刘友生;王长松;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2006.01.26.sunyl.006

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