中国生物制品学杂志

2015, v.28(11) 1127-1131

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人星状病毒非结构蛋白nsP1a/3的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
Prokaryotic expression and purification of human astrovirus nonstructural protein nsP1a / 3 and preparation of its polyclonal antibody

李攀;张成;杨思达;崔成成;刘志成;曾韦锟;黄芬;井申荣;

摘要(Abstract):

目的原核表达、纯化人星状病毒(human astrovirus,HAstV)非结构蛋白nsP1a/3,并制备多克隆抗体。方法酶切质粒nsP1a/3-pCDNA3.1,获得nsP1a/3基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒nsP1a/3-pET-28a,转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,并优化表达条件。表达的重组蛋白经Ni2+亲和层析纯化后,经腹腔免疫SD大鼠,共4次,最后1次免疫7 d后,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测多抗效价,Western blot鉴定多抗的特异性。结果重组表达质粒nsP1a/3-pET-28a经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为22500,以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度为86.6%,浓度为1.26mg/ml;制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶30 000,且特异性较好。结论成功地原核表达、纯化了HAstV非结构蛋白nsP1a/3,并制备了特异性良好的鼠多克隆抗体,为进一步研究nsP1a/3蛋白在病毒侵染靶细胞时的作用机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): 人星状病毒;nsP1a/3;原核细胞;基因表达;纯化;多克隆抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31360619,31160193)

作者(Author): 李攀;张成;杨思达;崔成成;刘志成;曾韦锟;黄芬;井申荣;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001132

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