中国生物制品学杂志

2007, (02) 110-113

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治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究
Pilot Fermentation Procedure of Recombinant E. coli Strain Containing Two Plasmids as Therapeutic HBV DNA Vaccine

饶桂荣;黄英;王鹏;何晓嫱;杨富强;莫国玉;陈光明;

摘要(Abstract):

目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方式,确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵,同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在连续传代30次后,质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养,梯度恒速流加方式补料,培养时间为10h。通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌58.0~71.8g/L,质粒含量可达到1.11~1.58mg/g菌,超螺旋质粒DNA的比例达93%以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。

关键词(KeyWords): 治疗性HBV DNA疫苗;工程菌;发酵

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“863”课题基金资助项目(2002AA2Z3317)

作者(Author): 饶桂荣;黄英;王鹏;何晓嫱;杨富强;莫国玉;陈光明;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2007.02.43.raogr.012

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