TF-CTP-OD2-HA融合蛋白的原核表达及纯化
肖恒，王海霞，陶崑，钟梁，黄世峰，祖白玲，冯文莉
摘要(Abstract)：
目的 构建pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒，在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白。方法 以前期构建的质粒p32a（+）CTP-OD-HA为模板，PCR扩增寡聚化结构域（Oligomerization domain，OD）中起关键作用的OD2基因序列，与胞浆转导肽（Cytoplasmic transduction peptide，CTP）和流感病毒血凝素抗原表位（Hemagglutinin，HA）连接后，克隆至pCold-TF-DNA质粒中，构建质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA，同时构建质粒pCold-TF-CTP-HA作为对照。将两种质粒分别转化E. coliBL21（DE3），IPTG诱导表达，表达的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后，进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果 质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA和pCold-TF-CTP-HA经PCR、双酶切和测序鉴定构建正确；表达的融合蛋白TF-CTP-OD2-HA和TF-CTP-HA相对分子质量分别约为63 000和58 000，两种融合蛋白均主要存在于破菌上清中，表达量分别约占菌体总蛋白的32%和25%，破菌沉淀中有少量表达；纯化的融合蛋白纯度均达95%以上，均可与鼠抗HA-tag多克隆抗体特异性结合。结论 成功构建了pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒，在大肠杆菌中表达并纯化了融合蛋白，为后续研究其在CML中的作用机制奠定了基础。
关键词(KeyWords)：
慢性粒细胞白血病；寡聚化结构域；融合蛋白；表达；纯化
基金项目(Foundation):
作者(Author):
肖恒，王海霞，陶崑，钟梁，黄世峰，祖白玲，冯文莉