中国生物制品学杂志

2015, v.28(07) 741-745

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用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化
Culture of influenza H5N1 virus in serum-free medium adapted Vero cells

马磊;耿兴良;苏杨起;杨家方;常亚军;段男;邹俊如;刘圆圆;刘婧;戴宗祥;李卫东;廖国阳;

摘要(Abstract):

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。

关键词(KeyWords): 无血清培养;Vero细胞;H5N1型流感病毒

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 重大传染病专项(2013ZX10004003003);; 科技部对俄合作专项(2011DFR30420);; 国家863(2012AA02A404任务7)

作者(Author): 马磊;耿兴良;苏杨起;杨家方;常亚军;段男;邹俊如;刘圆圆;刘婧;戴宗祥;李卫东;廖国阳;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000964

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