中国生物制品学杂志

2003, (03) 161-164

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蛇毒类凝血酶基因真核表达载体的构建
Construction of Eukaryotic Expression Vector for Gloshedobin

张红梅,文姝,许晓楠,安利佳

摘要(Abstract):

目的 构建大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin,GSB)基因真核表达载体,试图借助IL-2的分泌通路,使GSB分泌至胞外而达到溶栓和防栓的目的。方法 应用PCR重组技术,将GSB的5’端和3’端分别与IL-2基因的信号肽和poly A尾相连接,将此重组基因克隆入逆转录病毒载体 pLNCX,以脂质体介导转染人外用血淋巴细胞,并以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因检测转染效率、确定DNA和脂质体的比例。转染24h后从mR-NA、DNA和蛋白质水平检测GSB的表达情况。结果 mRNA和DNA水平均有外源基因GSB的表达;SDS-PAGE显示在相对分子质量 30 000左右出现一条带,且转染上清具有精氨酸酯酶活性。结论 构建的真核表达载体可表达具有活性的GSB,为GSB基因治疗血栓的体内研究打下基础。

关键词(KeyWords): 基因治疗;大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶;血栓;淋巴细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 张红梅,文姝,许晓楠,安利佳

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DOI: 10.13200/j.cjb.2003.03.36.zhanghm.012

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