中国生物制品学杂志

2019, v.32(02) 134-138

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代谢型谷氨酸受体4胞内段的原核表达及纯化
Prokaryotic expression and purification of metabotropic glutamate receptor 4 intracellular

李建勋;肖斌;孙朝晖;王露霞;陈丽丹;曹玲;王丽志;李林海;

摘要(Abstract):

目的原核表达代谢型谷氨酸受体4胞内段(metabolic glutamate receptor 4 intracellular,GRM4 intracellular,GRM4 intra),并用Ni柱进行纯化。方法采用PAS(PCR-based accurate synthesis)法合成GRM4 intra基因序列,将目的片段和质粒p Czn1双酶切后,经连接,构建重组质粒pCzn1-GRM4 intra;将重组质粒转化至Rosseta菌株,IPTG诱导GRM4 intra蛋白的表达,表达的蛋白利用Ni柱亲和层析法纯化。结果经测序和双酶切鉴定证明质粒pCzn1-GRM4 intra构建正确;在IPTG诱导下,质粒能够在Rosseta菌株中高效表达,表达的蛋白相对分子质量约18 400,主要以可溶性性形式存在,纯度> 90%。结论成功获得了原核表达的GRM4 intra蛋白,为利用体外pull down方法鉴定GRM4的相互作用蛋白提供了参考。

关键词(KeyWords): 代谢型谷氨酸受体4;相互作用;原核表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 2015年广州市科创委项目(201604040003)

作者(Author): 李建勋;肖斌;孙朝晖;王露霞;陈丽丹;曹玲;王丽志;李林海;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002460

参考文献(References):

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