中国生物制品学杂志

2018, v.31(09) 936-940

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基孔肯雅病毒E2蛋白的原核表达及纯化
Prokaryotic expression and purification of E2 protein of Chikungunya virus

郭丹丹;曹亮;田明尧;鲁会军;孙文超;张涵;汪伟;刘云霞;金宁一;郭焱;

摘要(Abstract):

目的原核表达并纯化基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)E2主要结构蛋白,为预防CHIKV感染及亚单位疫苗的研究奠定基础。方法根据Gen Bank上公布的CHIKV基因序列合成E2基因,并进行密码子优化,以提高原核表达效率。设计引物并以合成的E2基因为模板,PCR扩增CHIKV E2,连接到原核表达载体p ET-28a上,构建重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后进行纯化。结果重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2经双酶切鉴定构建正确,测序结果与原序列一致。表达的CHIKV E2融合蛋白相对分子质量约为47 000,可与His标签抗体特异性结合,纯化后纯度达95%以上。结论成功在大肠埃希菌中表达了CHIKV E2蛋白,纯化后蛋白纯度较高,为CHIKV亚单位疫苗的免疫试验奠定了基础。

关键词(KeyWords): 基孔肯雅病毒;原核表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点研发计划项目(重要新发突发病原体防治、处置技术与产品研究,2016YFC1200900)

作者(Author): 郭丹丹;曹亮;田明尧;鲁会军;孙文超;张涵;汪伟;刘云霞;金宁一;郭焱;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002273

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