中国生物制品学杂志

2017, v.30(04) 377-380

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真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN的构建及其在HEK 293-6E细胞中的表达
Construction of recombinant eukaryotic expression vector pTT5-CTP-PTEN and its expression in HEK 293-6E cells

喻备;黄媛;胡海峰;易炜;王云汉;陈林;杨进;

摘要(Abstract):

目的构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达。方法合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下,将鉴定正确的重组表达质粒转染至HEK 293-6E细胞,Western blot法检测细胞中融合蛋白CTP-PTEN的表达。结果经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒pTT5-CTPPTEN构建正确。转染48 h后,HEK 293-6E细胞中可见相对分子质量约49 700的CTP-PTEN融合蛋白条带。结论成功构建了重组质粒pTT5-CTP-PTEN,并于HEK 293-6E细胞中表达了CTP-PTEN融合蛋白。

关键词(KeyWords): PTEN基因;胞浆转导肽;基因表达;真核细胞;HEK 293-6E细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 成都市医学科研课题(2014001);; 成都学院校青年基金项目(2014XJZ08);; 成都大学附属医院院内课题(2014016)

作者(Author): 喻备;黄媛;胡海峰;易炜;王云汉;陈林;杨进;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001708

参考文献(References):

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