汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用

目的　获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法　采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 0 Z10trNP ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物经Glu tathioneSepharose 4B柱纯化 ,并进行抗原性及抗原特异性检测。结果　pGEX2 0 Z10trBP表达产物是相对分子质量约为 4 0 0 0 0的谷光甘肽转移酶 (GST)融合蛋白GST Z10trNP。经Westernblot分析 ,GST Z10trNP具有良好的抗原性。用纯化GST Z10trNP为抗原 ,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清 ,均能很好地区分阴性和阳性血清。结论　GST Z10trNP表达量高 ,易于纯化 ,并且具有良好的抗原性及抗原特异性 ,是一种安全、廉价的诊断抗原。

人白细胞介素18的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的　在大肠杆菌中高效表达IL 18。方法　从人外周血中提取RNA ,用RT -PCR方法得到IL 18的cDNA ,双酶切将其插入pET 2 3(b) + 载体中 ,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达。结果　所获得人IL 18克隆 ,经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS -PAGE显示在相对分子质量 2 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的分子量一致。结论　已成功获得了人IL 18克隆并在大肠杆菌中表达

可溶性重组蛋白EGF-Ang构建及体外细胞毒性检测

目的　构建人源化的免疫融合蛋白 ,以期获得具有较低免疫原性的靶向治疗药物。方法　利用基因工程技术将人表皮生长因子 (EGF)和人血管生成素 (Ang)基因连接起来 ,克隆到高效表达载体pET2 0b(+)中 ,构建重组表达质粒pET2 0 EA ,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白 (EGF Ang)。用MTT法检测可溶性蛋白的细胞毒性作用。结果　经SDS PAGE和薄层扫描分析表明 ,外源蛋白表达量占菌体裂解蛋白总量的 6 .4 %。细胞活性检测表明EGF Ang重组蛋白在体外对过度表达EGFR的Hep2 和SP2 / 0细胞具有明显杀伤作用。结论　人源化免疫融合蛋白EGF Ang的构建为进一步研制具有较低免疫原性的靶向抗癌药物奠定了基础

重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解

目的　研究重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解。方法　通过质谱和氨基酸序列分析确定水蛭素的 4种活性异构体 ,再用HPLC监测发酵过程中水蛭素的降解情况。结果　发酵过程中产生了 4种具有较高比活的水蛭素异构体 ,它们分别是目的产物水蛭素Hir6 5及Hir6 5的C 末端降解 1～ 3个氨基酸的产物。发酵时细胞干重达到 16 2g/L ,水蛭素的总活性一直在增加 ,最高为 2 .4 5× 10 4ATU/ml,相当于总产量1.8g/L。但Hir6 5在 4种水蛭素异构体总量中的比例一直在下降。Hir6 5的产量先升高再降低 ,最高为 2 80mg/L。结论　毕赤酵母发酵过程中水蛭素存在降解 ,Hir6 5降解产生了Hir6 2和Hir6 3。

含preS2免疫表位乙型肝炎表面抗原DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答

目的　探讨含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答。方法　质粒转染COS 7细胞 ,用ELISA法测定瞬时表达产物。质粒经碱裂解法大量提取 ,Sepharose 4FF柱层析纯化后 ,直接肌肉注射免疫NIH小鼠。检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答效果。结果　preS2表位多肽和HBsAg高效表达。免疫小鼠血清中检测到高滴度的抗 HBs和抗 preS2。淋转刺激指数SI和IL 2活性 ,质粒DNA疫苗与单纯主蛋白疫苗免疫对照组比较 ,差异有显著意义。结论　含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗能诱导NIH小鼠产生较强的体液免疫和一定强度的细胞免疫应答

梅花鹿免疫细胞活性因子对乙醇型胃粘膜损伤模型鼠的保护作用

目的　观察梅花鹿免疫细胞活性因子 (SIAF)对小鼠乙醇型胃粘膜损伤的保护作用。方法　制备小鼠乙醇型胃粘膜损伤模型 ,测定溃疡指数 ,观察胃的出血情况 ,免疫组化染色检测胃粘膜EGFR的表达 ,用酶法测定血清中NO的含量。结果　SIAF组的溃疡指数、胃出血情况与模型组相比 ,差异均有显著意义。SIAF组小鼠损伤周围胃粘膜EGFR表达与模型组相比明显增强。该组小鼠血清NO含量与模型组相比也明显增高。结论　SIAF具有显著的保护此种胃粘膜损伤的作用

海藻糖对重组人铜锌SOD酶的保护作用

目的　考察不同工艺处理过程中不同糖类对rhCuZn SOD活性的影响。方法　酶液与不同保护介质均匀混合后 ,研究冷藏、反复冻融、真空干燥、冷冻干燥和保存等工艺过程前后酶活性的变化。结果　与其他糖类相比 ,海藻糖具有最好的抗冷冻、抗脱水能力。保护作用与工艺过程具有一定的相关性。海藻糖的最适添加量为 5 %～ 10 % (w/v)。结论　为设计最佳的生物活性保护体系提供依据。

应用环糊精代替血清培养幽门螺杆菌

目的　应用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物培养幽门螺杆菌。方法　将同样菌量的细菌接种于 2种布氏培养基中 (分别含 0 .1%环糊精和 7%小牛血清 ) ,培养 3d和 6d后 ,分别检测其A值 ,计算细菌浓度。将取自患者的胃粘膜标本接种于上述培养基上 ,6d后观察其分离培养效果。结果　含 0 .1%环糊精培养基的细菌生长浓度略高于其他配方的培养基。 2 4个胃粘膜标本在 2种培养基上的分离效果完全相同。结论　用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物 ,能够用于从胃粘膜中分离培养和大量培养幽门螺杆菌

喉癌组织中P53与微血管密度相关性

目的　探讨P5 3蛋白在喉癌中的表达及其与血管生成和转移的相关性。方法　通过免疫组化SP法检测 4 2份喉癌患者标本中P5 3蛋白表达及微血管密度 (microve -ssedensity ,MVD)。结果　喉癌组织中P5 3蛋白阳性表达率为 4 7 6 2 % ,MVD平均为 35 .79,标准差为 9.4 9。淋巴结转移的肿瘤中P5 3阳性表达及MVD明显高于非转移组 ,P5 3蛋白阳性表达标本中MVD值较高的现象多于有颈淋巴结转移的喉癌。结论　突变型P5 3基因的表达对喉癌肿瘤微血管生成及肿瘤颈淋巴结转移可能具有协同作用。

甲型肝炎减毒活疫苗加强免疫的效果

目的　观察国产甲肝减毒活疫苗不同免疫程序的加强免疫效果 ,以探求适宜的甲肝减毒活疫苗加强免疫程序。方法　在河北省正定县对 1～ 7岁的儿童采血检测抗 -HAV ,筛选甲肝易感者 ,按出生月份的单双数随机分为疫苗组和对照组 ,疫苗组接种 1针 ,观察免疫效果。在 1针法的基础上 ,随机抽取部分观察对象 ,分别按0、12月和 0、2、6月程序进行加强免疫 ,并于免疫后 1、2、3、6、7、12、13和 2 4个月采血清 ,观察免疫后的抗体动态。结果　接种 1针疫苗后 2～ 3个月抗体阳转率和几何平均效价均达高峰 ,分别为 92 .2 %～ 94 .9%和 12 6 .2～ 131.3mIU/ml,以后开始下降 ,12个月时降至 79.8%和 79.6mIU/ml。加强免疫后 ,抗体阳转率均达 10 0 % ,抗体水平成倍上升 ,其中以 0、12月程序免疫后抗体几何均值最高 ,为 32 94 .5mIU/ml。结论　甲型肝炎减毒疫苗具有良好的免疫记忆反应 ,采用 0、12月程序免疫效果更佳

CD40与CD40L研究