甲肝减毒活疫苗

<正> 甲肝是由甲肝病毒引起的急性传染病,感染对象以青少年及儿童为主。在各种病毒性肝炎感染中,甲肝的发病率居首位。我国是甲肝流行最为严重的国家之一。接种甲肝疫苗已成为预防甲肝的重要手段。

人肝细胞生长因子β链在E.coli中的表达、纯化及活性测定

目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转化大肠杆菌,筛选rhHGF-β的高效表达菌株。对rhHGF-β进行粗纯化,透析复性后MTT法检测生物活性。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组克隆的酶切结果与设计一致。目的 蛋白的表达量占全菌蛋白的30％,粗纯化后纯度达90％,复性产物能刺激大鼠肝细胞的增殖。结论 建立了rhHGF-β的表达体系,获得了具有生物活性的rhHGF-β,为进一步大量制备和研究HGF的生物学功能提供了重要的实验数据。

幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达及生物活性研究

目的 通过基因工程方法构建并表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)以基因形式的融合蛋白,并对其生物活性进行初步研究,为幽门螺杆菌疫苗的研究奠定基础。方法 用PCR方法从本室构建的融合基因克隆载体扩增出融合基因2 040bp的片段,将融合基因插入原核表达载体pET-11-c中。结果 经全自动测序仪测序,SDS-PAGE和免疫印迹以及N端氨基酸测序分析,证实融合蛋白已在BL21中表达,初步纯化后通过动物实验和酶联免疫吸附试验证实其相应的免疫原性和免疫反应性,以及其中LTB成分和GM1结合的特性。结论 融合蛋白表达方式为幽门螺杆菌分子内佐剂疫苗的研究奠定了基础。

CuZn-SOD乳酸-羟乙酸共聚物缓释微球的制备及体外、体内释放研究

目的 探讨CuZn-SOD包裹入乙酸-羟乙酸共聚物制备的药物微球的缓释效果。方法 采用复乳法制备CuZn-SOD乙酸-羟乙酸共聚物(PLGA)药物微球,分别用恒温摇瓶法和ELISA法检测体外和体内的释放效果。结果 有机相/分散相体积比、内水相体积、蛋白质浓度等因素影响微球的性质,由于聚合物的吸附作用,CuZn-SOD的体外释放呈明显的两段释放,释放不完全;体内释放显示微球制剂有一定的缓释效果。结论 该微球有比较好的缓释作用。

重组类人胶原蛋白的分离纯化

目的 建立重组类人胶原蛋白分离及纯化工艺。方法 将工程菌株E.coli BL21 3.1在L1523型12.8L自控发酵罐中培养14h,发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经DEAE-52和Sephadex G-100柱层析分离纯化。结果 发酵菌体干重达到71g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4％,最终产物纯度达98％,回收率为80.5％,纯化倍数为3.4。结论 纯化的类人胶原蛋白达电泳纯,相对分子质量为90 000,N端序列为NH_2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G,均与其因序列设计一致。

~(125)Ⅰ标记rLTB-UreB及口服BALB/c小鼠示踪实验研究

目的 观察~(125)Ⅰ标记基因重组融合蛋白LTB-UreB灌喂BALB/c小鼠后的体内分布。方法 采用氯胺T氧化法标记rLTB-UreB,Sephadex-G25凝胶过滤纯化,纸层析鉴定放射化学纯度及比活度。将BALB/c小鼠随机分为PBS口服空白对照组、Na~(125) Ⅰ口服对照组和~(125)Ⅰ-rLTB-UreB实验组,于不同时间采集标本,γ放射计数器检测CPM(每分钟计数值),SPSS分析结果。结果 纯化后的标记蛋白纯度>90％。实验组PP结和肠系膜淋巴结CPM升高,与对照组比较差异有非常显著意义。结论 ~(125)Ⅰ标记融合蛋白口服后可在肠道粘膜下淋巴组织沉积,为融合蛋白作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原提供重要实验依据。

导向性人干扰素α2a工程菌生物学特性的稳定性

目的 全面观察了解pBV220-IFNN/DH5α工程菌生物学特性的稳定性。方法 工程菌菌株连续传至50代后,进行质粒性状、扫描电镜观察、干扰素表达水平、革兰氏染色及各项生化反应检测。结果 pBV220-IF-NN/DH5α工程菌呈现典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义。结论 该菌种可作为生产用菌种。

视网膜色素上皮细胞培养及其超微结构的观察

目的 体外培养视网膜色索上皮(retinal pigment epithelium RPE)细胞并对其进行超微结构观察,为RPE细胞在细胞和分子水平研究奠定基础。方法 采用酶消化法对RPE细胞进行取材和培养,利用光镜和电镜进行观察及分析。结果 培养的细胞贴壁生长,融合后呈单层、镶嵌式排列;电镜下可见到细胞表面绒毛、细胞之间复合体、细胞间质少及细胞排列紧密等上皮组织的特征性结构,细胞内可直接观察到大量黑色素颗粒。结论 为各种损伤致RPE细胞形态学改变的研究奠定了基础。

重组嗜热脂肪酶工程菌发酵工艺的研究

目的 研究重组嗜热脂肪酶表达菌株E.coli BL21(DE3)的生长条件及产物表达规律。方法 在发酵过程中,采用补加葡萄糖和蛋白胨,控制pH、溶氧值和温度的方法。结果 最终发酵液在600nm的光密度值达到54,发酵液细菌湿重达96g/L,脂肪酶活性达到6.8×10~5 U/L。结论 确定了工程菌培养的最佳条件,提高了目的蛋白和菌体的收获量。

血浆制品中Triton X-100残留量测定方法的建立

目的 建立血浆(SD法病毒灭活)中Triton X-100残留量测定方法。方法 采用新型Oasis固相提取小柱进行样品预处理,用反相SymmetryShield RP18色谱柱的HPLC方法检测SD灭活法血浆中Triton X-100残留量,并对该方法进行讨论。结果 用固相提取方法可获得良好的回收率(99.2％),检测限达到1.0ppm,检测精度CV值为3.04％。结论 该方法快速、简便、准确,重现性好,可作为实验室SD病毒灭活血浆中Triton X-100检测方法。

重组(CHO细胞)乙肝疫苗纯化工艺的改进

目的增加重组(CHO细胞)乙肝疫苗生产投量,提高纯化收率。方法 增加每批细胞收液的投量,改进纯化工艺及调制样品方法。结果 提高了HBsAg最终收率,并缩短了纯化时间,减少了设备用量。结论 改进后的工艺成本较低,效益提高,适于规模化生产。

应用化学发光免疫分析法测定CA125

目的 评价化学发光免疫分析法测定CA125辅助诊断卵巢癌的临床应用价值。方法 分别用Lumiassay~(TM)与ACS:180试剂测定卵巢癌61例,非卵巢癌21例。正常对照67例,并与RlA进行对照。结果 Lumiassay~(TM)、ACS:180与RIA测定CA125的灵敏度分别为86.9％、86.9％和80.3％;特异度分别为95.5％、97.0％和92.5％;阳性预测值分别为94.6％、96.4％和90.7％;阴性预测值分别为88.9％、89.0％和83.9％;准确度分别为91.4％、92.2％和86.7％。Lumiassay~(TM)与ACS:180有高度的一致性和相关性;Lumiassay~(TM)、ACS:180与RIA一致性与相关性略低。结论 化学发光免疫分析法测定CA125辅助诊断卵巢癌具有较高的灵敏度、特异度与临床价值,在3种方法的对比中,Lumiassay~(TM)ACS:180有着高度的相关性,优于RIA。

乙型肝炎免疫实施方案及效果考核

目的 评价乙型肝炎疫苗免疫实施方案和远期效果。方法 考核乙肝疫苗接种率、及时率、孕妇HBV筛检率和阳性率,并对1986年出生时接种乙肝疫苗的对象随访采血,检测HBsAg、抗-肿s、抗-HBc。并设免前本区及邻区乙肝疫苗未免疫者为内、外对照。结果 免后14年HBsAg阳性率在1％以下,与内、外对照相比下降幅度达90％,远期保护效果为81.23％。结论 免后14年仍无需加免。

生物制品冻干技术的进展

<正> 冷冻干燥是将含水物质先冻结成固态,而后使其中的水分从固态升华到气态,以除去水分而保存物质的方法。优点是保持成分不变性,抑制生长和酶的作用,保持体积和形状,保护易氧化物质,去除水分,保存期长。

长春生物制品研究所主要产品