- 明平刚;徐葛林;严家新;吴杰;明贺田;周敦金;肖奇友;杨晓明;
目的分析我国新分离的5株狂犬病病毒(RV)街毒株基因序列及分子流行病学状况。方法采用RT-PCR法从疑似狂犬的犬脑组织内获得N和G基因cDNA的全序列并进行测序,将所得结果与已发表的国内外代表性毒株相应基因进行核苷酸和推导氨基酸序列比较。结果5株均含有完整N基因序列,3株含有完整G基因序列。与国内外发表的部分毒株比较,5株街毒N基因的核苷酸同源性在98.1%～99.9%之间,推导氨基酸同源性在99.5%～100%之间。将5株街毒与人用疫苗株3aG、PV株的N基因进行比较,核苷酸同源性在86.2%～86.7%之间,氨基酸同源性在95.1%～95.5%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在89.4%～89.6%之间,氨基酸同源性在98.2%～98.6%之间。3株街毒G基因的核苷酸同源性在98.5%～99.4%之间,推导氨基酸同源性在99.6%～100%之间。将3株街毒与人用疫苗株aG、PV和兽用疫苗株ERA的G基因进行比较,核苷酸同源性在82.8%～83.1%之间,氨基酸同源性在88.0%～90.1%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在86.7%～87.1%之间,氨基酸同源性均为92.0%。结论新分离街毒株基因未发生较大变异,与CTN的同源性高于与aG株和PV株。
2007年08期 553-556页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K] [下载次数：147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 王丽哲;雷连成;韩文瑜;
目的构建噬菌体裂解基因E和核酸酶基因串联表达载体,制备高质量的大肠杆菌菌影。方法自行设计一对引物,PCR扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,将该基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建大肠杆菌菌影的表达载体pGEX-E。在E基因基础上与辅助基因葡萄球菌核酸酶A(SN)基因串联,并插入pGEX-6P-1载体,构建双基因串联高效表达载体pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,制备大肠杆菌菌影。结果裂解基因E单基因及串联基因已成功插入融合表达载体pGEX-6P-1,所构建的大肠杆菌菌影表达载体pGEX-E、pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,诱导后经透射电镜及活菌计数显示大肠杆菌已发生不同程度裂解,制成了大肠杆菌菌影。电镜下菌影形态完整,内容物已释放到胞外。结论已成功构建了噬菌体裂解基因E单基因及裂解基因和核酸酶基因串联基因表达载体,并制成了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗及佐剂形式奠定了基础。
2007年08期 557-561页 [查看摘要][在线阅读][下载 650K] [下载次数：603 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：22 ] |[阅读次数：0 ] - 王学理;王兴龙;李晓艳;任林柱;刘锴;
目的对新城疫病毒TL1株L基因进行克隆、序列分析及真核表达载体构建。方法根据GenBank登录的新城疫病毒L基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR对内蒙古分离株TL1的L基因进行整体扩增。将扩增产物提纯后,克隆入pGEM-Teasy载体,再亚克隆至真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR鉴定及测序进行验证。结果测序拼接得出L基因的全序列长度为6704bp,该基因的ORF总长为6615bp,编码2204个氨基酸。与GenBank登陆的12株参考毒株比较L基因编码区全核苷酸序列和氨基酸序列,发现TL1株与鹅源新城疫NA-1株、ZJ1株和SF02株的同源性极高,说明四者亲缘关系较近。结论已成功构建L基因真核表达载体,为对该株病毒进行反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定了基础。
2007年08期 562-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王冠;段广才;郗园林;张庶民;马霄;王咏红;杨永弘;沈叙庄;
目的研究大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63和CpG-ODN鼻内免疫对抗原的佐剂效应。方法选用破伤风类毒素(TT)和小牛血清白蛋白(BSA)为抗原,mLT63和CpG-ODN为佐剂,经鼻内免疫BALB/c小鼠。ELISA间接法检测免疫小鼠血清和肺、直肠及阴道组织萃取液的特异性抗TT、BSA的IgA、IgG水平。结果mLT63和CpG-ODN均能协助TT和BSA抗原在血清、肺、阴道、直肠组织中诱导出高滴度的IgG抗体。在血清中IgA抗体滴度均比较低,而TT-IgA在肺和阴道组织中滴度较高,BSA-IgA在肺组织中滴度较高。各佐剂组之间IgG和IgA抗体水平相比,差异均无显著意义。不同剂量的mLT63诱导的BSA-IgA抗体水平差异无显著意义。结论mLT63和CpG-ODN经鼻内免疫对TT和BSA抗原均有良好的佐剂作用。
2007年08期 566-569+574页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 朱光泽;刘铁梅;孙中锋;屈勇刚;王铁峰;金宁一;
目的分析戊型肝炎病毒(HEV)在长春地区动物群中的感染情况及戊型肝炎病毒系统进化关系。方法用抗-HEV抗体试剂盒检测长春地区猪、牛、羊、鹿、鸡和马血清中的抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEVRNA,并对PCR阳性产物进行克隆测序及序列分析。结果493份猪血清中有427份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为86.61%;有5份为HEVRNA阳性,5株克隆的核苷酸序列的同源性为91.2%～99.1%,该5株克隆的序列在ORF2区348bp与1～4型间核苷酸同源性分别为77.8%～82.3%、77.2%～78.1%、77.2%～99.1%和85.2%～95.2%;266份牛血清中有122份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为45.86%;93份羊血清中有7份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为7.53%;798份鹿血清中有348份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为43.61%;369份鸡血清中有18份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为4.88%;197份马血清中有31份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为15.74%。结论HEV在多种动物群中均有流行,但在猪群中的流行率明显高于其他动物群。猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的基因4型同源性最高。进化关系表明,在长春地区猪与人HEV应划为一个分支。
2007年08期 570-574页 [查看摘要][在线阅读][下载 329K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 何礼洋;韩文瑜;贾艳;雷连成;杨洋;
目的对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛类型的鉴定。方法首先利用传统的D-甘露糖血凝特性(MSHA/MRHA)试验对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛分型,同时以该菌Ⅰ型和Ⅲ型菌毛的主要结构亚单位(fimA/mrkA)基因序列为靶序列,分别设计一对引物,利用PCR扩增的方法对该5株菌进行菌毛分型。结果MSHA/MRHA方法鉴定其中的4株菌具有Ⅲ型菌毛,另外1株无法鉴别,而PCR方法鉴定5株菌均具有Ⅲ型菌毛。结论该5株鸡源肺炎克雷伯菌均具有Ⅲ型菌毛。MSHA/MRHA具有方便、快速的特点,但不敏感;PCR则具有快速、敏感、准确的优点。研究结果对于肺炎克雷伯菌的流行病学调查及该菌的临床诊断具有指导意义。
2007年08期 575-577页 [查看摘要][在线阅读][下载 209K] [下载次数：155 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 金元昌;李景鹏;李娅;
目的研究质粒pEGFP-C1-GnRH/TRS在HeLa细胞中的遗传稳定性。方法取0代及传至第10、20、30和40代的工程细胞,在有选择压力(加G418)的条件下,测定pEGFP-C1-GnRH/TRS质粒丢失率。分别提取各代次工程细胞质粒DNA进行双酶切鉴定。将经酶切鉴定正确的第40代工程细胞质粒测序,并将各代次工程细胞加压筛选后,于荧光显微镜下观察。结果连续传10、20、30和40代后,质粒丢失率均不超过2%。不同代次的工程细胞质粒DNA经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切,酶切图谱相同。第40代质粒的GnRH/TRS序列与原代质粒相同。第40代细胞荧光分析与原代细胞相似。结论质粒pEGFP-C1-GnRH/TRS在HeLa细胞中有较好的遗传稳定性。
2007年08期 578-579+583页 [查看摘要][在线阅读][下载 448K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 詹骞;邹昌勇;杜厚明;冷武军;雷继军;杨明;端义坤;孙可芳;侯胜桐;齐建新;王志友;董之昌;
目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。
2007年08期 593-595+599页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K] [下载次数：380 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 苏凯;邓继业;童军;杨文冲;栾勇;李勇;
目的研制用于ABO、RHD血型检测试剂的红细胞瞬间磁化试剂。方法采用共沉淀法制备磁性粒子,并检测其主要成分及粒径大小,用此磁性粒子制备红细胞瞬间磁化试剂,并分别进行各项检测。结果磁性粒子的主要成分为四氧化三铁,粒径100nm左右。该试剂的外观及特异性均合格,磁响应时间不超过30s,重复性较好,敏感性为98.20%,与试管法检测结果比较,差异无显著意义。结论红细胞瞬间磁化试剂可用于红细胞系统的血型检测。
2007年08期 596-599页 [查看摘要][在线阅读][下载 472K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 吴海珍;张惠展;梁娜;顾振霆;叶江;张元兴;
目的建立高效的鳗弧菌电转化系统。方法分别从感受态细胞制备的洗涤缓冲液与浓度、复苏培养基、二级细胞收获时间、电转化的电压与脉冲时间等方面,对鳗弧菌的电转化条件进行优化。结果获得的鳗弧菌最佳转化条件为二级培养3h左右收获细胞,用272mmol/L蔗糖洗涤缓冲液制备电转化细胞,在2.0kV3ms的脉冲条件下,pUC18的转化率达106个转化子/μgDNA。结论采用优化的电转化方法,可获得较高的转化率,为鳗弧菌中的常规遗传操作奠定了良好的基础。
2007年08期 600-602+608页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] [下载次数：295 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 范行良;盛慧英;田新贵;陈翊;
目的建立人呼吸道合胞病毒(hRSV)荧光PCR(FQ-PCR)检测方法,并确定其最低检出限。方法针对hRSVN基因相对高度保守的序列,采用引物和探针设计软件PrimerExpressv2.0,设计1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,组装成荧光PCR检测试剂。以此试剂检测345份咽拭子样品,与ELISA法检测hRSVIgM抗体比较,确定最低检出限。结果该方法的最低检出限是传统的病毒滴度测定的104.79倍。与IgM抗体检测法相比,对于感染早期患者具有更高的检出率。结论建立的hRSVFQ-PCR检测方法具有简便、快捷的特点,适用于hRSV感染的早期诊断。
2007年08期 603-605页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：209 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 唐宗生;汪承亚;赵唯信;
目的探讨血小板污染对凝聚胺抗体筛检和交叉配血试验的干扰。方法应用自然沉降和离心方法去除血液标本中的血小板,用凝聚胺方法进行血小板去除前后抗体筛检和交叉配血试验。瑞氏染色显微镜下观察血小板聚集。结果自然沉降的标本有大量的絮状团块,镜下可见血小板聚集,而非红细胞凝块。不同离心力去除血小板污染的程度不同,离心力越大,血小板聚集越少,离心力达2200g,可完全去除血小板污染,对凝聚胺抗体筛检和交叉配血试验的干扰消失。结论血浆标本中血小板污染可对凝聚胺抗体筛检和交叉配血试验产生干扰,但可以采用离心法去除。
2007年08期 606-608页 [查看摘要][在线阅读][下载 99K] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 尉小平;冉铁成;王坚;赵家宏;
目的测定冻干人纤维蛋白原制品中盐酸精氨酸和甘氨酸的含量。方法采用反相高效液相色谱法,以2,4-二硝基氟苯为柱前衍生剂,在色谱柱内层析,以紫外检测器在360nm波长处检测,用外标法计算含量。结果当盐酸精氨酸和甘氨酸衍生化的取样范围为0.25～2.00mg/ml时,线性相关系数分别为0.99998和0.99999。盐酸精氨酸和甘氨酸的平均加标回收率分别为96.6%和95.4%。结论此方法检测结果准确,可用于冻干人纤维蛋白原中盐酸精氨酸和甘氨酸的含量检测。
2007年08期 609-611页 [查看摘要][在线阅读][下载 68K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ]