- 潘勇兵;张爱华;胡迪超;闭兰;杨晓明;
目的构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行瞬时表达。方法采用RT-PCR技术,设计针对信号肽的简并引物,钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因,以质粒PAG4622为模板,钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因,分别将重、轻链可变区基因与相应的恒定区基因进行拼接,将完整的重、轻链嵌合基因分别与真核表达载体pOptiVEC和pcDNA3.3连接,构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,将其通过脂质体法共转染至293T细胞中进行表达。通过RT-PCR法检测嵌合抗体基因的转录水平,ELISA法检测嵌合抗体的表达量,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合活性。结果抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒构建正确;RT-PCR显示嵌合抗体基因在293T细胞中成功转录;转染后48、72、96和120h,细胞培养上清中嵌合抗体的含量分别为7.47、11.72、8.02和18.28ng/ml;FCM检测其能特异性与IL-2Rα链结合。结论已成功构建了抗CD25人鼠嵌合抗体基因的真核表达质粒,并能在293T细胞中瞬时表达。
2010年02期 v.23 113-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 533K] [下载次数：414 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 徐宏山;俞永新;贾丽丽;黄莺;董关木;俞炜源;
目的原核表达乙型脑炎病毒(JEV)NS1和E蛋白,并初步探讨其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增JEVSA14-14-2株NS1和E蛋白基因片段,分别克隆入原核表达载体pET-30a(+)和pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-30NS1和pET-32Et,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达水平。两种蛋白经亲和层析纯化后,Western blot鉴定其反应原性。通过小鼠主动和被动保护力试验及豚鼠病毒血症试验,检测两种蛋白的免疫原性。结果酶切及测序证明重组表达质粒构建正确;表达的重组NS1和E蛋白的相对分子质量分别约为40000和47000,均以包涵体形式表达;纯化的重组NS1和E蛋白的浓度分别为160.7和380μg/ml,均具有良好的反应原性;小鼠主动和被动保护力试验表明两种蛋白均有保护活性;豚鼠病毒血症试验显示,NS1蛋白免疫豚鼠后能明显抑制病毒血症的产生。结论已成功表达并纯化了JEVSA14-14-2株NS1和E蛋白,两种蛋白均有较好的免疫保护活性。
2010年02期 v.23 118-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 733K] [下载次数：313 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 张驰;刘笑菊;赵雪;蔡露;李校堃;
目的探讨低剂量电离辐射(LDR)对链尿佐菌素(STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病(DM)小鼠血清中炎症因子表达的影响。方法取健康C57BL/6J小鼠,经腹腔注射STZ复制小鼠糖尿病模型,并设空白对照组。将糖尿病模型小鼠分为DM和DM/LDR组,空白对照组分为LDR组及对照组。DM/LDR组和LDR组给予25mGyLDR,隔日照射1次,共照射4周;DM组和对照组不经LDR照射。分别于照射后2、4、8、12及16周,采用ELISA法检测小鼠血清中不同炎症因子的表达水平。结果LDR照射前,4组小鼠血清中ICAM-1和IL-18的表达水平较为接近,而糖尿病小鼠血清中TNFα和MCP-1的表达水平显著高于非糖尿病小鼠;给予LDR照射后,在不同时间点DM/LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平与DM组相比,均显著降低,LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平较对照组明显增加。ICAM-1表达的变化与其他因子不同,LDR照射4周时,糖尿病小鼠显著高于非糖尿病小鼠,但在任何时间点,DM/LDR与DM组、LDR与对照组之间差异均无统计学意义。结论在糖尿病状态下,LDR能有效降低血清中IL-18、TNFα和MCP-1的表达水平,缓解糖尿病肾脏中的炎症反应强度;但在正常机体中表现为提高免疫力,促进免疫相关因子的释放。表明LDR针对机体所处的不同状态发挥着不同的生物调节功能。
2010年02期 v.23 124-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 440K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 李春莉;刘钉宾;袁颖;彭智;陶崑;史梦;曹唯希;冯文莉;
目的探讨热休克蛋白Apg-2过表达对小鼠pMIGR1空载体感染细胞BaF3-MIGR1和BCR/ABL转化细胞BaF3-P210(简称BP210)增殖的影响。方法构建pIERS2-EGFP-Apg-2真核表达质粒,电穿孔转染BaF3-MIGR1和BP210细胞,经G418筛选稳定表达细胞株,分别用RT-PCR和Western blot鉴定Apg-2的表达。采用Am-Blue法和流式细胞仪(FCM)检测Apg-2过表达对BaF3-MIGR1和BP210细胞增殖的影响,光镜观察细胞形态变化。结果pIERS2-EGFP-Apg-2真核表达质粒构建正确,转染细胞后筛选到稳定过表达Apg-2的BaF3-MIGR1-Apg-2和BP210-Apg-2细胞株,BaF3-MIGR1-Apg-2细胞的增殖速度明显低于BaF3-MIGR1细胞,BP210-Apg-2细胞比BP210细胞增殖加快。光镜下可见Apg-2过表达的两种细胞形态发生变化,瑞氏染色可见细胞核增多。结论Apg-2能够促进BCR/ABL阳性细胞的增殖,可能与慢性粒细胞白血病的发生发展相关。
2010年02期 v.23 129-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 706K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 江丽娜;韩文瑜;雷连成;赵瑞利;欧阳萍;
目的在毕赤酵母中表达抗菌肽Catesbeiania-1,并检测其体外生物活性。方法将从牛蛙皮肤上新分离的一条抗菌肽基因Catesbeiania-1克隆至真核表达载体pPICZaA,构建重组真核表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1。在毕赤酵母GS115中表达重组Catesbeiania-1蛋白,并进行体外生物活性测定。结果所构建的重组表达质粒pPICZaA-Catesbeiania-1序列完整,经Tricine-SDS-PAGE分析,表达的重组Catesbeiania-1蛋白相对分子质量约为5800,分泌性蛋白的表达量为36.3mg/ml。重组蛋白对几种常见的革兰阳性菌和阴性菌均具有较好的抑菌活性,无胰蛋白酶水解活性和抑制剂活性,具有很强的抗氧化能力。结论已成功表达了抗菌肽Catesbeiania-1,表达的重组蛋白具有一定的抑菌活性。
2010年02期 v.23 134-137+145页 [查看摘要][在线阅读][下载 650K] [下载次数：221 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 刘梦瑶;韩钰;蔡富强;何玲;王艳林;
目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重叠PCR法扩增出692bp的OAZ1功能基因,重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,重组蛋白可在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。纯化的重组蛋白纯度可达79.96%,且可与抗His标签抗体特异性结合。结论已成功克隆了小鼠OAZ1功能基因,原核表达并纯化了重组OAZ1蛋白。
2010年02期 v.23 138-141+149页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王文;戚中田;
目的克隆表达小鼠截短型可溶性腺苷酸环化酶(mtsAC)基因,并检测其活性,为后续研究提供技术平台。方法Trizol法提取小鼠睾丸组织总RNA,RT-PCR法扩增mtsAC基因,经测序正确后,克隆至真核表达载体pcDNA4-V5,转染HEK293T细胞,Western blot及免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达,并检测HEK293T细胞中cAMP的水平。结果所构建的重组表达质粒pcDNA4-V5-mtsAC经酶切和测序证明构建正确,插入的mtsAC基因长度为1549bp;表达的重组mtsAC蛋白相对分子质量为48000,在胞浆及胞核中呈均一性表达;转染质粒pcDNA4-V5-mtsAC的HEK293T细胞中cAMP的水平较未转染的HEK293T细胞升高约17倍,并可被NaHCO3和CaCl2激活。结论已成功克隆了mtsAC基因,并在HEK293T细胞中表达了具有活性的重组mtsAC蛋白,建立了可用于mtsAC特性研究及男性不育药物筛选的技术平台。
2010年02期 v.23 142-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 343K] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘淼;朱海玉;彭强;徐广文;王盈;沈际佳;
目的构建编码日本血吸虫表膜蛋白SjTsp2与Sj29融合基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白。方法利用基因SOEing PCR技术得到SjTsp2与Sj29融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果序列分析显示,融合基因与两个目的基因的同源性达100%;SDS-PAGE显示表达的重组蛋白相对分子质量为43000,表达量占菌体总蛋白的20%以上;Western blot显示其分别能与SjTsp2和Sj29蛋白的单克隆抗体结合。结论已成功构建了SjTsp2与Sj29融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为研制血吸虫病疫苗提供了材料。
2010年02期 v.23 146-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 533K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 刘涛;石艳艳;袁成福;张琴;卜友泉;易发平;刘革力;宋方洲;
目的探讨特异性抑制人Makorin环指蛋白1(MKRN1)基因的表达对HEK293细胞的影响。方法用脂质体将前期筛选出的含最有效干扰序列的人MKRN1基因shRNA真核表达质粒,转染至HEK293细胞中,观察其对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因mRNA转录水平、蛋白表达水平及细胞增殖的影响。结果人MKRN1基因shRNA真核表达质粒转染HEK293细胞后,在mRNA和蛋白水平均能明显上调细胞hTERT基因的表达,且细胞明显增殖。结论抑制HEK293细胞中人MKRN1基因的表达,可导致hTERT基因mRNA转录水平和蛋白表达水平上调,并促进细胞增殖。
2010年02期 v.23 150-153页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王维民;刘延庆;戴小军;
目的观察南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在体外诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法制备南蛇藤乙酸乙酯和正丁醇提取物,采用MTT法检测二者对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响;应用FITC-AnnexinⅤ及碘化丙锭(PI)双标法,通过流式细胞仪(FCM)观察SGC-7901细胞的凋亡率及P53蛋白的表达。结果不同浓度的南蛇藤乙酸乙酯和正丁醇提取物(15、30、60、120μg/ml)对SGC-7901细胞的增殖均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性。两种南蛇藤提取物(60、120、240、480μg/ml)可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡,且随着浓度的升高,SGC-7901细胞P53蛋白的表达也增加,浓度为240和480μg/ml的提取物组与对照组相比,差异有统计学意义。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在体外可诱导SGC-7901细胞凋亡,上调细胞中P53基因的表达可能是其抗肿瘤作用的分子机制之一。
2010年02期 v.23 154-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K] [下载次数：352 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：33 ] |[阅读次数：0 ] - 朱艳平;王玉;徐慧;郭霄峰;
目的克隆猪血清白蛋白(PSA)基因,并在毕赤酵母中分泌表达。方法Trizol法提取新鲜猪肝组织总RNA,经RT-PCR扩增PSA全长cDNA,克隆至酵母分泌型表达载体pPICZaC,构建重组表达质粒pPICZaC-PSA,电转化至毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组表达质粒pPICZaC-PSA经双酶切及测序鉴定正确,表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约69500处可见特异条带,表达量为菌体总蛋白的29.5%,紫外吸收法测定蛋白含量为0.06mg/ml,并可与PSA多抗发生特异性反应。结论已成功克隆了PSA基因,并在毕赤酵母中获得表达。
2010年02期 v.23 157-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K] [下载次数：209 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王海燕;苏冠方;徐春玲;齐首楠;陈玉丙;
目的探讨乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的神经分化情况,以期为视网膜退行性疾病提供治疗方案。方法体外分离培养Wistar大鼠乳鼠BMSCs,观察BMSCs的增殖情况并进行鉴定;制备乳鼠视网膜细胞条件分化液,以其诱导BMSCs,观察BMSCs的神经分化情况,并行免疫组化鉴定。结果体外培养获得了较纯的BMSCs;在乳鼠视网膜细胞条件分化液的环境中,诱导后72h,BMSCs胞体收缩成锥形或球形,细胞突起变细、变长,呈神经细胞的典型形态;免疫组化结果显示,部分细胞呈神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)和Thy1.1阳性反应。结论乳鼠视网膜细胞条件分化液可诱导BMSCs分化成视网膜神经节样细胞。
2010年02期 v.23 161-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 2000K] [下载次数：212 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 姚树智;杨有庚;陈玉丙;左浩;刘丽萍;
目的观察静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)在脊髓损伤模型大鼠体内向神经样细胞转化的情况。方法体外扩增培养MSCs,流式细胞仪检测表面标志CD34和CD44的表达;采用击打法制备大鼠脊髓损伤模型;Brdu标记的MSCs经尾静脉移植入脊髓损伤模型大鼠体内,输注后21d,取脊髓组织进行免疫组化染色,检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果体外扩增的MSCs经流式细胞仪检测不表达CD34,表达CD44;激光共聚焦显微镜下观察可见,移植Brdu标记的MSCs组在大鼠损伤的脊髓组织中可同时表达Brdu和NSE。结论移植的MSCs可迁移到损伤的脊髓组织,并可转化为神经样细胞。
2010年02期 v.23 165-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 736K] [下载次数：206 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 王晓虎;靳玉珠;范秀波;刘晔;张守峰;丁壮;扈荣良;
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)VP1、VP4基因核酸疫苗质粒,并研究其免疫原性。方法通过RT-PCR获得FMDVVP1、VP4基因,以真核表达载体pIRESneo为基础,构建VP1单表达以及VP1、VP4融合表达和共表达质粒。转染BHK-21细胞后,Western blot检测目的蛋白的表达。将上述3种基因核酸疫苗、VP1单表达与VP4单表达联合疫苗、灭活疫苗和空载体对照免疫豚鼠,检测血清特异性抗体及中和抗体水平,并进行保护力试验。结果VP1单表达,VP1、VP4融合表达及共表达质粒经PCR及酶切鉴定,证明构建正确。各组核酸疫苗质粒均能诱导产生中和抗体,且具有一定的保护效力。VP1单表达组和联合组保护率均为28.6%;共表达组和融合表达组保护率均为42.9%;灭活疫苗组保护率为100%;空载体组保护率为0。结论口蹄疫病毒VP1与VP4共存时能发挥更好的免疫原性。
2010年02期 v.23 168-171+175页 [查看摘要][在线阅读][下载 443K] [下载次数：367 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 曹蕾;刘美娜;殷国荣;孟晓丽;刘转转;刘阳;
目的评价重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)联合弗氏佐剂皮下免疫小鼠的抗弓形虫感染作用。方法BALB/c小鼠70只,随机分为7组,分别为PBS组、A组(佐剂+PBS)、20PA组(20μg rTgHSP70+佐剂)、40P组(40μgrTgH-SP70)、40PA组(40μg rTgHSP70+佐剂)、60PA组(60μg rTgHSP70+佐剂)及80PA组(80μg rTgHSP70+佐剂),皮下免疫,间隔2周,加强免疫2次,共免疫3次。末次免疫后14d,用2×104个RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击各组小鼠,攻击后30d处死,ELISA检测血清IgG和肠液sIgA;分离脑组织内弓形虫速殖子,并计数。结果在添加佐剂组中,血清IgG水平随rTgHSP70剂量的增加而升高,与PBS组和A组比较,差异有统计学意义;肠液sIgA水平60PA组最高,与20PA和40PA组比较,差异有统计学意义;与PBS组相比,A、20PA、40P、40PA、60PA和80PA组的脑组织内速殖子数分别减少了56.87%、56.46%、61.90%、48.74%、62.87%和70.44%。结论rTgHSP70联合弗氏佐剂皮下免疫小鼠可诱导一定的抗弓形虫感染作用,80μgrTgHSP70为较佳剂量。
2010年02期 v.23 172-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K] [下载次数：230 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 魏宪义;陈光清;魏红;王海燕;干科;
目的制备抗乙型脑炎病毒阳性血清抗体效价参考品。方法评估乙脑病毒IgG酶联免疫试剂盒定量检测不同浓度阳性血清抗体的线性范围、准确性、精密性及特异性,并以正常血清及其他免疫球蛋白产品为对照,对该参考品抗体效价定位进行适用性比较。结果不同浓度阳性血清的线性范围为0.625～10IU/ml,抗体效价回收率为91.2%～112.8%,试验内变异系数≤7.8%,正常血清与阳性血清的乙脑抗体效价相差15倍。试验用的阳性血清乙脑病毒抗体效价设为10U/ml时,在特定的疫苗免疫程序下,效价峰值期能够实现合格血浆≥50%的收获率。结论兼顾原料血浆的可获取性与产品临床效果的难以替代性,特定阳性血清定位为10U/ml。
2010年02期 v.23 176-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 任妍;陈昕;杜丽娜;赵晓东;
目的比较几种人偏肺病毒(hMPV)的检测方法,为临床选择适当的检测方法提供依据。方法不同稀释度的hMPV分别感染Vero-E6细胞,出现细胞病变(CPE)后,分别用RT-PCR、Real-time PCR和IFA进行检测,比较3种方法的灵敏度;10倍系列稀释滴度为105.2TCID50/ml的hMPV,分别用RT-PCR及Real-time PCR进行检测,定量比较两种方法的灵敏度;分别用Real-time PCR和IFA检测523份急性呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物。结果IFA、RT-PCR和Real-time PCR分别可检出10-4、10-5、10-7稀释度孔中的病毒;RT-PCR和Real-time PCR检测的灵敏度分别为1.0×103和1TCID50/ml;在523份鼻咽分泌物标本中,IFA检测阳性率为9.18%,Real-time PCR检测阳性率为31.55%。结论Real-time PCR检测鼻咽分泌物标本中hMPV为儿科临床早期诊断的最佳方法;IFA可作为基层医院及hMPV相关严重呼吸道感染的检测方法。
2010年02期 v.23 187-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 1716K] [下载次数：267 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 臧娜;王莉佳;陈伟超;谢晓虹;邓昱;刘恩梅;
目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计数。建立空斑法测定RSV滴度的标准曲线,并验证空斑法的准确性及精密性,应用建立的空斑法检测RSV感染BALB/c小鼠肺组织中的RSV滴度。结果RSVA2株感染的Hep-2细胞出现典型的空斑,直径约1～3mm,形态呈圆形或类圆形。空斑法的最低检测限为3.4×101PFU/ml,线性关系良好,相关系数r=0.999996,准确性及精密性均良好。RSV感染的BALB/c小鼠肺组织标本均出现数量不等的空斑。结论所建立的RSV空斑测定方法敏感、准确,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究RSV的感染性和免疫原性奠定了基础。
2010年02期 v.23 192-195页 [查看摘要][在线阅读][下载 853K] [下载次数：850 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 刘尊杰;姚开虎;袁林;高薇;俞桑洁;杨永弘;
目的制备6C型肺炎链球菌抗血清,并进行鉴定。方法将经美国单克隆抗体方法鉴定为6C型的肺炎链球菌制成菌体抗原免疫家兔,制备抗血清;将抗血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌进行荚膜肿胀和凝集试验;用6A、6B及6A和6B型肺炎链球菌吸附血清后,再次检测其与各型肺炎链球菌的凝集效价。结果免疫前的兔血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌均未出现荚膜肿胀及凝集反应。免疫后的血清与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶64、1∶32和1∶64;经6A或6A和6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为(-)、(-)和1∶8;经6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶16、(-)和1∶16。结论6C型为新的肺炎链球菌血清型,已成功制备出6C型抗血清,可用于血清分型研究。
2010年02期 v.23 196-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何鹏;邱少辉;郭玉芬;饶洪冲;朱征宇;金于兰;秦洁;潘海龙;洪小栩;胡忠玉;梁争论;
目的比较原子吸收分光光度法(简称仪器法)与滴定法测定生物制品中硫柳汞含量的精密性和准确性,为仪器法列入《中国药典》(2010版)提供依据。方法由不同实验室分别采用仪器法与滴定法测定不同硫柳汞含量的样品,并进行精密性和准确性比较。结果不同实验室在测定硫柳汞含量为65.8、25.0及1.5μg/ml的样品时,仪器法的变异系数均小于滴定法,回收率较滴定法更接近100%;在测定硫柳汞含量为100μg/ml的样品时,两种方法回收率均不理想,但仪器法优于滴定法。结论仪器法测定生物制品中硫柳汞含量的精密性和准确性均优于滴定法,但仍需进一步完善。
2010年02期 v.23 199-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K] [下载次数：535 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 牛海滨;蔡苏兰;阎浩林;刘婷婷;
目的以大孔树脂D380为载体,戊二醛为交联剂,进行硫酸软骨素裂解酶(ChSase)的固定化,并考察固定化酶的酶学性质。方法分别考察加酶量、吸附温度、吸附时间、吸附pH值、戊二醛交联浓度、交联时间及交联温度对ChSase固定化效果的影响,并分析该固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值、米氏常数(Km)及其操作稳定性。结果ChSase的最佳固定化条件为:加酶量150U/g树脂,吸附温度15℃,吸附时间6h,吸附pH值7.0,戊二醛交联浓度0.01%,交联时间3h,交联温度4℃。以此条件制备的固定化酶,其酶结合效率可达79.1%。该固定化ChSase的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;Km达1.46×10-1g/L,较游离酶高;具有较好的操作稳定性。结论以大孔树脂D380为载体固定化ChSase是可行的,所得固定化酶有较高的使用效率和稳定性,适合于工业化生产。
2010年02期 v.23 203-206+210页 [查看摘要][在线阅读][下载 554K] [下载次数：291 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 苏洁;王斌;鲁晓晴;赵巍;闫志勇;钱冬萌;丁守怡;宋旭霞;杨丽;刘海燕;
目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。
2010年02期 v.23 207-210页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈英;徐燕华;
目的对单克隆抗体制品中残余SP2/0细胞蛋白含量ELISA检测试剂盒进行验证。方法对Cygnus Technologies公司制备的SP2/0Host Cell Protein(sHCPs)ELISA试剂盒进行灵敏度、精密性验证及基质干扰试验和样品稀释回收试验,并采用该试剂盒对本公司制备的10批单抗制品原液及冻干品进行检测。结果标准蛋白含量的对数与相应的光吸收值的对数,在2～200ng/ml范围内呈线性关系;该试剂盒检测限可达0.6ng/ml,定量限可达2ng/ml,灵敏度符合要求;检测低、中、高3个浓度的SP2/0HCPs样品试验内及试验间变异系数分别为15.4%、3.0%、2.1%及12.0%、3.3%、1.5%;样品基质对检测无明显干扰;单抗样品检测不存在Hook效应;检测本公司10批单抗制品原液和冻干品中SP2/0细胞蛋白残留率均小于0.01%。结论该试剂盒灵敏度高,精密性好,可用于单抗制品中残余SP2/0细胞蛋白含量的测定。
2010年02期 v.23 211-213页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K] [下载次数：273 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]