- 陈凌;郭盛;郝春莉;吴良霞;张建华;
目的在大肠杆菌(E.coli)中表达并纯化重组小鼠白细胞介素-17F(rmIL-17F),并鉴定其生物活性。方法经RT-PCR扩增mIL-17f基因片段,定向插入原核表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a/mIL-17f,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化rmIL-17F/His融合蛋白,Western blot鉴定其反应原性。以纯化复性的rmIL-17F滴鼻干预小鼠,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠外周血IL-17F、IL-4和IFNγ的水平。结果扩增的mIL-17f基因DNA序列与GenBank中登录的mIL-17f基因序列一致,所构建的重组表达质粒pET28a/mIL-17f构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为19000,主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度约为95%,具有良好的反应原性,经黏膜给药后,可促进小鼠肺组织中IL-6 mRNA的表达,并提高小鼠血清中IL-4和IFNγ的水平。结论已成功地在大肠杆菌中高效表达并纯化了具有生物学活性的rmIL-17F,为进一步研究IL-17F的功能奠定了基础。
2010年07期 v.23 673-677页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K] [下载次数：212 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 闫琛;凌康;刘子杰;翁亚光;
目的研究CENP-E变异体(CENP-EⅠ)在不同肿瘤细胞株及癌组织和相应的癌旁组织中的表达情况。方法应用巢式RT-PCR检测14个细胞株和17份癌组织及相应癌旁组织标本中CENP-EⅠmRNA(缺失第38个外显子)的表达情况,并比较变异体和野生型CENP-E(CENP-EWT) mRNA的表达差异;应用巢式PCR检测上述标本中CENP-E在DNA水平上的变异;并通过细胞增殖试验、细胞周期检测和染色体核型鉴定,分析CENP-EⅠ与细胞恶性程度的相关性。结果 RT-PCR结果显示,实验样本中CENP-E mRNA均有CENP-EWT和CENP-EⅠ两种形式同时存在于一种组织或细胞中,且在正常细胞株和癌旁组织中CENP-EWT表达量较高,在肿瘤细胞株和癌组织中CENP-EⅠ表达量较高,且差异有统计学意义(P<0.05);样本中CENP-E在DNA水平上不存在第38个外显子缺失,且细胞间CENP-E表达量的差异无统计学意义(P>0.05);CENP-EⅠ与细胞的恶性程度有一定的相关性。结论同一细胞内存在2种或2种以上形式的CENP-E mRNA,CENP-E变异体可能与肿瘤的发生有关。
2010年07期 v.23 678-682+691页 [查看摘要][在线阅读][下载 524K] [下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 韦三华;张海;董轲;林芳;王希;李斌;沈建军;张利军;张惠中;
目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性多表位基因的C1R-AAD细胞克隆。方法合成人泛素基因(Ub)和HCVHLA-A2限制性多表位基因(Mep),分别克隆入原核表达质粒pRSET-A,构建多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep。用BamHⅠ和HindⅢ双酶切质粒pRSET-Ub-Mep,得到复合多表位基因Ub-Mep,亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(-),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep,转染至C1R-AAD细胞,G418压力筛选后,通过有限稀释法获得稳定表达Ub-Mep融合蛋白的C1R-AAD细胞克隆,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中Ub-Mep基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Westernblot法检测Ub-Mep蛋白在稳定转染细胞中的表达。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep经酶切鉴定证明构建正确;在稳定转染的C1R-AAD细胞中可检测到Ub-MepmRNA和蛋白水平的表达。结论已建立了稳定表达HCVHLA-A2限制性多表位抗原的C1R-AAD细胞克隆,为进一步研究HLA-A2限制性多表位基因诱导的细胞免疫应答建立了靶细胞。
2010年07期 v.23 683-686页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 马艳娇;李鹏;周海峰;阮楠;宫鹏涛;李建华;欧阳红生;张西臣;
目的探讨Kozak序列对基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因在人乳腺癌细胞MCF-7中表达的影响。方法构建pcDNA3.1-TIMP1和pcDNA3.1-TIMP1-K(含有Kozak序列)重组真核表达质粒,用FugeneHD转染试剂将重组表达质粒转染MCF-7细胞,采用荧光定量PCR和Western blot检测pcDNA3.1-TIMP1和pcDNA3.1-TIMP1-K在MCF-7细胞中表达的差异。结果重组真核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。质粒pcDNA3.1-TIMP1-K转染细胞比空白对照细胞TIMP1基因mRNA表达量高约0.95倍,蛋白表达量高0.43倍;而质粒pcDNA3.1-TIMP1转染细胞比空白对照细胞mRNA表达量高0.37倍,蛋白表达量高0.25倍。结论质粒pcDNA3.1-TIMP1-K与pcDNA3.1-TIMP1在MCF-7细胞中mRNA和蛋白表达水平均存在差异,Kozak序列提高了TIMP1基因的表达。
2010年07期 v.23 687-691页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K] [下载次数：247 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 邱红梅;王明丰;吴芹;蒋青松;
目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对高糖高胰岛素(High glucose and insulin,HGI)诱导心肌细胞肥大的抑制作用。方法体外培养乳鼠心肌细胞,将细胞分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、模型组(HGI组,给予25.5mmol/L葡萄糖与0.1μmol/L胰岛素)、L-Arg低、中、高剂量组(给予HGI组药物,并分别加入0.01、0.1和1.0mmol/L的L-Arg)和L-Arg+L-NAME组[给予HGI组药物,并加入0.1mmol/LL-Arg和一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)特异性抑制剂L-NAME],以细胞表面积、蛋白质含量和心房利钠因子(Atrial natriuretic factor,ANF)mRNA表达为反映心肌肥大的指标,观察L-Arg对HGI致心肌细胞肥大作用的影响;采用Real-timePCR法检测内皮型一氧化氮合酶(Endothelial NOS,eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(Inducible NOS,iNOS)mRNA的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养液中NOS的活性和NO的含量。结果 L-Arg呈浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞肥大;并上调eNOS mRNA的表达及NOS的活性,增加NO的浓度。NOS抑制剂L-NAME可完全阻断L-Arg的上述作用。结论 L-Arg可通过激活eNOS表达,促进NO释放,产生抗HGI诱导心肌肥大的作用。
2010年07期 v.23 692-695页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 邓婷;张俊文;
目的探讨缺氧状态下及缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)RNA干扰后,HIF-1α的表达及其与胃癌细胞黏附、游走、侵袭能力的相关性。方法将HIF-1α shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-HIF-1α-2484转染胃癌细胞SGC-7901,构建靶向干扰HIF-1α表达的SGC-7901稳定转染细胞株;采用Western blot法检测缺氧及HIF-1αRNA干扰对SGC-7901细胞HIF-1α表达的影响;MTT法检测缺氧及HIF-1αRNA干扰对SGC-7901细胞黏附能力的影响;采用Boyden Chamber膜侵袭系统,观察缺氧及HIF-1αRNA干扰对SGC-7901细胞游走及侵袭能力的影响。结果 SGC-7901细胞在缺氧培养4、8和16h时,HIF-1α均呈阳性表达,并随时间的延长而显著增加;细胞粘贴率、游走和侵袭穿膜细胞数分别随时间延长而显著增加,与HIF-1α表达呈显著正相关。HIF-1αRNA干扰后,缺氧SGC-7901细胞HIF-1α表达显著下降,细胞粘贴率、游走和侵袭穿膜细胞数均显著下降。结论 HIF-1α的过度表达导致胃癌细胞黏附、游走及侵袭能力增强,可能是胃癌局部侵袭和远处转移的重要原因之一。
2010年07期 v.23 696-699页 [查看摘要][在线阅读][下载 243K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 石艳;王陆飞;罗萍;孙波;李相军;董德录;任立群;
目的探讨庆大霉素(Gentamycin,GM)诱导急性肾损伤大鼠模型肾损伤分子-1(Kidney injury molecule-1,KIM-1)的表达。方法建立GM诱导大鼠急性肾损伤模型;检测各组大鼠血、尿各项生化指标;取大鼠肾组织,进行病理组织学观察;ELISA法检测各组大鼠尿液中KIM-1的分泌;RT-PCR法检测各组大鼠肾组织KIM-1mRNA的表达;免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾组织KIM-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血、尿各项生化指标及病理组织学观察均出现不同程度的病变;ELISA检测显示,大鼠尿液中KIM-1的含量显著增高(P<0.05);RT-PCR检测显示,肾组织KIM-1mRNA表达上调(P<0.05),且呈时间依赖性;免疫组化法检测显示,KIM-1表达量随肾损伤加重而显著升高,且呈时间依赖性。结论 KIM-1具有良好的敏感性和特异性,可作为GM所致肾小管损伤的早期诊断标志物。
2010年07期 v.23 700-703页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K] [下载次数：622 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 刘俊乐;魏敬双;程立均;杜威世;张世雄;王志明;贾茜;
目的分析不同pH诱导重组人血白蛋白(Recombinant human serum albumin,rHSA)和血源人血白蛋白(Plasma-derived human serum albumin,pHSA)的构象变化。方法在不同pH值条件下,分别经紫外和荧光光谱扫描分析rHSA与pHSA及3批rHSA的二阶导数谱及275nm和295nm激发波长下的荧光光谱。结果 rHSA与pHSA的最大吸收波长均为278nm,二阶导数谱和荧光光谱均随pH值发生变化,趋势基本一致;3批rHSA的紫外和荧光光谱间无显著差异。结论 rHSA在不同pH值条件下的构象变化与pHSA基本一致,3批rHSA的构象具有良好的批间一致性。
2010年07期 v.23 704-707页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张政;彭惠民;徐晓明;何晓燕;
目的构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达。方法人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21。使用脂质体Lipofectamine2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测miR-21的表达。结果经酶切鉴定和测序证实,合成的miR-21基因序列完全正确,并已成功克隆到真核表达质粒pGenesil-1上。重组真核表达质粒转染小鼠肾小球系膜细胞后,筛选出的阳性克隆可稳定高表达miR-21。结论已成功构建miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中高效表达,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了基础。
2010年07期 v.23 708-710页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K] [下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 林维平;刘晓影;武敬亮;高志芹;孙同毅;
目的构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株,提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量。方法利用依赖于DpnⅠ酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b(+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性。结果 PCR扩增产物可见约7000bp的Trp OperonM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍。结论已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。
2010年07期 v.23 711-713页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：542 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 徐闯;张日和;夏成;张洪友;王哲;
目的检测不同浓度β-羟丁酸(β-hydroxy butyrate,BHBA)对体外培养牛肝细胞肉碱脂酰基转移酶Ⅰ(Carnitine palmityl transferase-Ⅰ,CPT-Ⅰ)转录及翻译水平的影响。方法分别采用荧光定量PCR法和ELISA法,检测不同浓度BHBA(0、0.3、0.6、1.2、2.4、4.8mmol/L)对体外培养牛肝细胞CPT-I基因和蛋白表达的影响。结果随着BHBA浓度的增加,肝细胞CPT-Ⅰ的转录和翻译水平均下降。当BHBA浓度大于1.2mmol/L时,肝细胞CPT-I的转录和翻译水平下降更显著。结论高浓度的BHBA可显著抑制体外培养牛肝细胞CPT-I的表达,可能减少肝细胞脂肪酸氧化代谢。
2010年07期 v.23 714-716页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 孟小丹;孙洋;于昉;刘海岩;柳忠辉;葛敬岩;
目的研究激活素A(Activin A)对体外培养小鼠胎鼠大脑皮层神经元存活的促进作用。方法原代培养孕期17d小鼠胎鼠脑神经细胞,免疫细胞化学染色观察激活素受体(ActRIIA)在神经细胞中的表达;将原代培养神经细胞分为阴性对照组(5%胎牛血清-DMEM/F12培养基)、阳性对照组(4ng/ml神经生长因子)和激活素A(5ng/ml)组,分别于培养第1、3、5、7和9天,采用台酚蓝染色法检测神经元存活情况。结果培养的小鼠胎鼠脑神经细胞可表达ActRIIA;阴性对照组存活神经元呈时间依赖性减少,在培养第9天已检测不到存活的神经元;而阳性对照组和激活素A组在培养第9天仍有部分神经元存活。结论激活素A具有维持小鼠胎鼠大脑皮层神经元长期存活的作用。
2010年07期 v.23 717-719页 [查看摘要][在线阅读][下载 380K] [下载次数：187 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 初金鑫;蔡文娣;韩宝芹;刘万顺;杜长青;谭永林;
目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。
2010年07期 v.23 720-723页 [查看摘要][在线阅读][下载 305K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 付世新;齐长学;罗春海;张丽;王瑶;
目的原核表达并初步纯化牛乳溶菌酶(Bos taurus lysozyme1,LYZ1)。方法人工设计并合成LYZ1基因CDS序列,将其克隆至表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a-LYZ1,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌株,经IPTG诱导,初步纯化表达产物,并对其进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果所构建的重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示,目的蛋白相对分子质量约为32000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的70%以上,切胶纯化后纯度达95%;Western blot分析显示,重组融合蛋白可与小鼠Anti-HisTag单抗特异结合。结论已成功原核表达并初步纯化了LYZ1,为后续研究与应用奠定了基础。
2010年07期 v.23 724-726页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 王欲晓;周丽君;张海荣;曲佳;乔媛媛;赵晓航;高荣凯;
目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗银环蛇毒素的人源单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法以银环蛇毒素为靶抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性抗体,采用ELISA法检测其结合活性;与抗蛇毒素马血清进行竞争抑制ELISA,检测其中和活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经4轮筛选,获得了5株对银环蛇毒素具有结合活性的阳性克隆;其中1株结合活性高的单克隆抗体中和活性抑制率可达8.5%;DNA指纹图谱显示为3个不同的ScFv基因,序列分析表明其重链可变区均属于VHⅠ型,轻链可变区分别为VκⅡ、VκⅢ和VλⅡ。结论利用噬菌体抗体库技术获得了具有中和活性的抗银环蛇毒素人源单链抗体。
2010年07期 v.23 734-736页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：173 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 连海;刘志俊;高丰;金洪涛;王泽;张中洋;夏志平;
目的观察猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)多克隆抗体用于防治PRRS的效果。方法用PRRSV灭活疫苗2次基础免疫,PRRSV(NVDC-JXA1株)强毒C05代加强免疫长白仔猪,制备PRRSV多克隆抗体。以不同剂量的多抗免疫仔猪后,通过仔猪存活率、血清ELISA抗体效价及血清、肺、脑组织PRRSV基因评价多克隆抗体对PRRSV感染的预防和治疗作用。结果仔猪按0.5ml/kg体重接种多抗进行预防,再经PRRSV(NVDC-JXA1)株强毒(3×105.5TCID50)攻击,具有一定的预防作用,存活率为5/7;经NVDC-JXA1株强毒(3×105.5TCID50)感染后,分别按0.8ml/kg和1.0ml/kg剂量,连续注射3次进行治疗,存活率分别为5/7和7/7,但在注射1.0ml/kg的猪中,仍有部分猪血清(4/7)和肺(2/7)PRRSV基因阳性。结论高剂量的多克隆抗体(ELISAS/P>3,0.5ml/kg以上)对仔猪抵抗PRRSV感染具有一定的预防和治疗作用,经多克隆抗体预防或治疗后无临床症状的猪仍可能带毒。
2010年07期 v.23 737-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 王小霞;张英起;颜真;薛晓畅;王增禄;张衍国;余春艳;
目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。
2010年07期 v.23 741-743页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张雪平;李小娟;何星;
目的纯化B型肉毒神经毒素,并比较未激活和用胰蛋白酶激活的B型肉毒神经毒素的分子特性,分析在酸性和碱性条件下B型肉毒毒素复合物的完整性。方法取未激活、胰蛋白酶激活和热处理激活的B型肉毒毒素复合物,采用阴离子交换柱层析纯化神经毒素(分别为A、B和C组)。在酸性条件下溶解激活的B型肉毒毒素复合物(D组)。对各组进行纯度(特异毒性)测定和SDS-PAGE分析。结果柱层析后,神经毒素纯度均比复合物的纯度高,激活的神经毒素比未激活的高2～3倍;在非还原和还原条件下,A组的SDS-PAGE显示神经毒素、重链和轻链3条带;B组显示重链和轻链2条带;C组在非还原条件下显示重链和轻链2条带,在还原条件下只显示轻链1条带。在酸性条件下,B型肉毒毒素复合物由神经毒素与非毒性成分构成,在碱性条件下,神经毒素与非毒性成分分离。结论已成功纯化了B型肉毒神经毒素,经胰蛋白酶处理后,单链裂解为双链,比活性提高。
2010年07期 v.23 744-747页 [查看摘要][在线阅读][下载 365K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孙丽丽;郑颖;高虹;王宏;汪晓春;王宏东;白兰;金惠;
目的探讨多西紫杉醇(Docetaxel,TXT)对人喉癌细胞Hep-2增殖的抑制作用。方法分别用不同浓度的TXT(0、10、20、40、80、100和200ng/ml)作用Hep-2细胞不同时间(0、0.5、1、2和4h),MTT法检测细胞的增殖活性,并与阿霉素(Adriamycin,ADM)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)和长春新碱(Vincristine,VCR)等抗肿瘤药物的抑制效果进行比较。采用流式细胞术检测TXT对Hep-2细胞凋亡的影响。结果与ADM、5-Fu和VCR等抗肿瘤药物相比,TXT对Hep-2细胞具有较高的抑制活性,其抑制效果在一定范围内呈量效和时效关系;TXT能够有效诱导Hep-2细胞凋亡。结论 TXT可显著抑制Hep-2细胞增殖,是一种具有广阔应用前景的喉癌治疗临床药物。
2010年07期 v.23 748-750页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K] [下载次数：184 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 王曦;杨旭琴;刘英薇;许宁;马锐;张德有;程晔;李彩梅;李津;
目的建立快速检测表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)重组汉逊酵母细胞破碎率的方法。方法分别以显微镜计数法和染色后毛细管离心法检测表达HBsAg的重组汉逊酵母细胞破碎率,并采用Lowry法检测细胞破碎前后上清液中蛋白质含量,以间接评价细胞破碎率。3种方法均以表达HBsAg的重组酿酒酵母细胞作为对照。结果显微镜计数法可直接计算出细胞的破碎率,结果可靠,但不同人员检测数据存在差异;毛细管离心法检测细胞破碎率结果与显微镜计数法接近,且较显微镜计数法稳定,汉逊酵母细胞破碎悬液经考马斯亮蓝染色效果较好;Lowry法检测细胞破碎后的蛋白释出度与细胞破碎率呈对应性。结论 3种实验方法均可评价细胞破碎率,毛细管离心法快速简便,在实际生产过程中较为实用。
2010年07期 v.23 758-761页 [查看摘要][在线阅读][下载 417K] [下载次数：450 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 刘梅影;陈敬;刘钰;李冶珊;林海涛;张燕斌;王平;王雪薇;焦小玲;王义萍;
目的优化Y群脑膜炎球菌多糖活化工艺,为A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗的研制奠定基础。方法分别以多糖衍化率和游离多糖含量为指标,按照三因素三水平正交试验,以不同的pH值、活化时间和活化剂加量对多糖进行活化后,与破伤风类毒素(TT)偶联,并经Sepharose4FF层析纯化后,对多糖-TT结合物进行各项生化检定、免疫原性检测及稳定性观察,确定最佳活化工艺,并对优化的工艺进行验证。结果以多糖衍化率为指标,可确定pH值和活化剂加量二因素对Y群脑膜炎球菌多糖的活化有显著影响(P<0.05),而以游离多糖为指标时,无法确定三因素对多糖的活化有显著影响(P>0.05),结合各项指标检测及稳定性观察结果 ,确定多糖活化最佳工艺为:在pH12条件下,向每mg多糖中加入等量活化剂,反应10min。采用优化的多糖活化工艺制备3批Y群脑膜炎球菌多糖-TT结合物,各项指标均符合多糖结合疫苗的常规质控标准。结论优化的多糖活化工艺可制备出游离多糖含量低、免疫原性高的Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物,结果具有重复性。
2010年07期 v.23 762-766页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：244 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 方强;夏惠;陈兴智;徐家森;王雪梅;齐文娟;孙新;沈继龙;
目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。
2010年07期 v.23 767-769页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K] [下载次数：352 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 邵铭;李娟;宋颖丽;崔晓雨;袁力勇;方捍华;李长贵;李凤祥;王军志;
目的建立测定流感疫苗血凝素(Haemagglutinin,HA)含量的替代方法 ,并进行验证,以解决大流行流感发生初期疫苗原液中HA定量的难题。方法优化糖苷酶处理条件,将流感疫苗原液经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE方法分离样品,以灰度扫描法确定HA蛋白百分比,结合样品总蛋白数值,计算样品中HA含量。以该方法和传统的单向免疫扩散(SRID)法分别测定7批流感疫苗原液中HA含量,并进行比较。结果优化的糖苷酶处理条件为:总蛋白400μg/ml,PNGaseF加入比例为1:50。样品经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE法可以清晰区分各蛋白条带,经测序后确定HA两个亚基,与预期相对分子质量一致。该方法测定7批流感疫苗原液中HA含量的结果与SRID法测定结果的符合率在87.90%~122.20%之间。结论初步建立了测定流感疫苗中HA含量的替代方法 ,在WHO参考品供应不到位时,可用于大流感发生时疫苗原液中HA之定量。
2010年07期 v.23 770-773页 [查看摘要][在线阅读][下载 335K] [下载次数：403 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 闫文星;王洪艳;刘丽萍;邓丽;张红梅;陈玉丙;
目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离培养及鉴定的方法 ,为MSCs的系列研究奠定基础。方法采用全骨髓直接贴壁筛选法分离培养MSCs并传代,倒置相差显微镜下观察细胞形态,以MTT法检测细胞增殖水平并绘制生长曲线。取第3代MSCs,流式细胞术检测细胞周期和细胞表型,应用成骨细胞诱导液和脂肪样细胞诱导液诱导MSCs定向分化,鉴定其分化能力。结果全骨髓细胞培养5d,镜下可见贴壁细胞增殖明显,细胞形态较均一,大部分呈梭形,7d左右可传代,经2～3次传代后细胞呈单一梭形的成纤维样细胞,即MSCs;细胞生长曲线呈S形;经流式细胞仪检测,MSCs细胞76.01%处于G0/G1期,7.13%处于G2/M期,16.86%处于S期;MSCs表面不表达CD34;在特定诱导液作用下,MSCs可分别向成骨样细胞及脂肪样细胞分化。结论已成功建立了分离培养及鉴定MSCs的方法 ,可用来评价体外培养的MSCs。
2010年07期 v.23 774-777页 [查看摘要][在线阅读][下载 319K] [下载次数：365 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 李志刚;李晶;高强;宋莉莉;
目的应用顶空气相色谱法测定甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量。方法采用毛细管色谱柱DB-WAX(30m×0.53mm×0.50μm),ECD检测器,以氮气为载气,顶空进样。以不同基质稀释的三氯甲烷工作液绘制标准曲线,并对方法进行适用性及专属性、线性关系、精密度、定量限、检出限和准确性验证。结果通过绘制的2条标准曲线可见,存在基质效应的影响。甲肝疫苗中三氯甲烷与其他杂质峰的分离度为2.58;三氯甲烷在20～100ng/ml的浓度范围内线性关系良好(R2=0.9993);精密性良好,检测结果的RSD均小于5%;最低检出限为1.2ng/ml,最低定量限为4.8ng/ml;检测高、中、低3种浓度样品的加标回收率分别为(95.6±1.8)%、(95.5±3.1)%和(101.9±2.1)%。结论顶空气相色谱法简便灵敏,结果准确可靠,适用于甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量的测定。
2010年07期 v.23 778-780页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]