- 贺庆;高濛;戚胜美;高华;王军志;
目的应用3种品系小鼠评价新型抗胃泌素疫苗的体液免疫原性,为该疫苗生物活性检测方法的建立提供参考。方法将疫苗(500μg/m L)肌肉注射免疫3种不同品系(BALB/c、NIH、C57BL/6)小鼠,0.1 m L/只,阴性对照给予等体积疫苗佐剂,每2周免疫1次,共免疫3次,分别于首次免疫后第2、4、6、8周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测血清特异性抗胃泌素Ig G抗体滴度。结果首次免疫后第2周,50%NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第4、6周,100%NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第8周67%NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第6、8周与其第4周抗体滴度差异无统计学意义(P>0.05);第4、6、8周,100%BALB/c和C57BL/6小鼠血清均可检测到抗体滴度,第6、8周分别与其第4周抗体滴度相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。首次免疫后第4周,NIH小鼠血清抗体滴度均显著高于BALB/c和C57BL/6小鼠(P<0.05),分别较其高356%和465%;首次免疫后第6周,NIH小鼠血清抗体滴度均显著高于BALB/c和C57BL/6小鼠(P<0.05),分别较其高506%和413%。结论 NIH小鼠对该疫苗的体液免疫反应活性较BALB/c、C57BL/6小鼠更敏感,可用NIH小鼠评价该疫苗的体液免疫原性。
2018年06期 v.31 569-572页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1178 ] - 朱喆;朱文勇;马磊;李映波;
目的探讨玛咖提取物作为流感疫苗佐剂的体液免疫效果及安全性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,玛咖提取物佐剂组:含血凝素1.8μg,玛咖提取物0.2 mg;氢氧化铝佐剂组:含血凝素1.8μg,氢氧化铝0.2 mg;无佐剂疫苗组:含血凝素1.8μg;生理盐水组:生理盐水。分别于0、21 d经小鼠腿部肌肉注射免疫2次,0.2 m L/(只·次)。初次免疫后,每隔7 d收集血清,测定小鼠血凝抑制抗体效价。初免后7 d内,每天称量1次小鼠体重,监测各组小鼠体重变化。结果 14、21、28、35、42、49和56 d时间点,玛咖提取物佐剂组小鼠血清血凝抑制抗体效价均显著高于无佐剂疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05);与氢氧化铝佐剂组比较,玛咖提取物佐剂组小鼠血清血凝抑制抗体效价7、14和21 d差异无统计学意义(P>0.05),28、35、42、49和56 d差异有统计学意义(P<0.05);组内不同时间点的血凝抑制抗体效价差异有统计学意义(P<0.05);各组小鼠体重变化差异无统计学意义(P>0.05),注射部位未见不良反应。结论玛咖提取物作为疫苗佐剂具有良好的安全性,且佐剂效果明显,有望成为流感灭活疫苗的新型免疫佐剂。
2018年06期 v.31 573-576页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1350 ]
- 单璞;邓霞;王志标;张钰;魏多前;徐静;
目的研究环化二核苷酸(cyclic dinucleotide,CDN)在小鼠体内对乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)免疫作用的影响,探讨其作为疫苗佐剂的可能性。方法以HBs Ag作为模式抗原,评价3种CDN[环二鸟苷酸(c-di-GMP)、环二腺苷酸(c-di-AMP)和环鸟苷酸-腺苷酸(c GAMP)]在小鼠中对HBs Ag免疫作用的影响。经肌肉注射时以铝佐剂作为对照,经黏膜免疫时以壳聚糖(chitosan,CTS)作为对照,ELISA法测定各组小鼠血清中的乙型肝炎病毒表面抗体(HBs Ab)水平。同时将c-di-GMP与CTS联合进行黏膜免疫,ELISA法测定各组小鼠血清中的HBs Ab水平,ELISPOT法检测小鼠脾细胞特异性细胞因子分泌水平。结果 3种CDN+HBs Ag经肌肉免疫诱导产生的HBs Ab水平均明显高于HBs Ag单独免疫组(P<0.001),且3组CDN+HBs Ag组与铝佐剂+HBs Ag组差异无统计学意义(P>0.05)。c-di-GMP+HBs Ag经黏膜免疫诱导HBs Ab水平明显高于HBs Ag单独免疫组,且与CTS+HBs Ag组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。c-di-GMP与CTS联合黏膜免疫诱导的HBs Ab水平与c-di-GMP+HBs Ag组及CTS+HBs Ag组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种CDN均具有一定的免疫增强作用,肌肉注射效果与铝佐剂相当;c-di-GMP黏膜免疫效果与CTS相当,c-di-GMP与CTS联合黏膜免疫未显示有协同免疫增强作用。提示CDN具有进一步开发成疫苗佐剂的潜力。
2018年06期 v.31 577-580+586页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] [下载次数：155 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1334 ] - 田刚;金坚;
目的构建重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,并探讨其对胃癌细胞的杀伤作用及可能的机制。方法利用同源重组的方法在痘苗病毒VG9的TK区插入锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)基因,构建重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,经筛选及纯化后,测定病毒滴度。将重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD及痘苗病毒VG9分别按不同的MOI(0.01、0.1、1、10)及转染时间(12、24、36、48 h)转染至人胃癌细胞株7901,MTT法检测病毒对胃癌细胞的杀伤作用。按MOI=1将重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD及VG9分别转染人胃癌细胞株7901 48 h,同时以PBS作为对照,Western blot法检测胃癌细胞中Mn SOD的表达,流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果经筛选及纯化后,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD滴度为2×108 pfu/m L。MOI为1和10时,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD对胃癌细胞的杀伤作用明显优于VG9(P<0.05);转染24和36 h,重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD对胃癌细胞的杀伤效果明显强于VG9(P<0.05)。转染后,Mn SOD蛋白可在胃癌细胞中呈高表达,且VG9-Mn SOD组胃癌细胞的凋亡率明显高于VG9组及对照组(P<0.05)。结论成功构建了重组溶瘤痘苗病毒VG9-Mn SOD,其对胃癌细胞具有明显的杀伤作用,该作用可能是通过促进胃癌细胞凋亡产生的。
2018年06期 v.31 581-586页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K] [下载次数：244 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1230 ] - 高艳军;王世博;邢志伟;邸红芹;张建武;孙红梅;
目的检测GINS2基因过表达对K562细胞增殖的影响。方法将Ad-GINS2感染K562细胞,扩增腺病毒,同时设空载体转染的空载组和未感染病毒的未处理组,PCR及Western blot法检测细胞中GINS2的转录及表达水平,MTT法检测细胞增殖水平。结果与空载组和未处理组相比,Ad-GINS2感染组细胞GINS2基因转录水平及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Ad-GINS2能明显促进细胞增殖(P<0.05)。结论 GINS2基因的重组腺病毒载体成功感染K562细胞并可促进K562细胞增殖,为进一步明确GINS2基因在白血病中的作用奠定了基础。
2018年06期 v.31 587-590页 [查看摘要][在线阅读][下载 336K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1165 ] - 李明阳;马春霞;吴翰欣;吴小海;俞建昆;马千里;
目的通过生物信息学方法预测在m6A去甲基化酶FTO敲低处理后,存在m6A修饰并显著下调的mi RNA(hsa-mi R-22-3p和hsa-mi R-671-5p)的靶标基因,并分析它们与癌症患者生存率的相关性。方法利用在线数据库寻找目标mi RNAs的靶基因,并通过基因功能(gene ontology,GO)和信号通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)对这些靶基因的分子功能(molecular function,MF)、生物过程(biological processes,BP)、细胞组分(cell component,CC)定位以及参与的信号通路进行分析;通过蛋白质互作网络(protein-protein interaction,PPI)筛选出核心基因,并分析它们与癌症患者生存率之间的相关性。结果 hsa-mi R-22-3p和hsa-mi R-671-5p共有198个相同的靶标基因;GO分析结果表明,这些靶基因在生物过程中显著丰富,包括肌动蛋白细胞骨架组织、神经元干细胞群维持、对尼古丁的行为反应;对于分子功能,这些靶点富含锌离子结合、蛋白质结构域特异性结合、核心启动子序列特异性DNA结合;细胞成分定位分析还显示,这些靶标在高尔基体的早期内体,细胞连接和整体成分中显著丰富;KEGG通路分析显示,这些交叉基因靶点在非小细胞肺癌、癌症中的胆碱代谢和粘蛋白型聚糖生物合成途径中富集;基于网络的工具分析显示,hsa-mi R-22-3p和hsa-mi R-671-5p已经它们的核心靶标基因RHOU和UNC5B与肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)、肝癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)、肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)、低级胶质瘤(low-grade gliomas,LGG)、胃癌(stomach adenocarcinoma,STAD)、卵巢癌(ovarian serous cystadenocarcinoma,OV)、肉瘤(sarcoma,SARC)、膀胱癌(bladder urothelial carcinoma,BLCA)、皮肤癌(skin cutaneous melanoma,SKCM)、乳头状肾细胞癌(kidney renal papillary cell carcinoma,KIRP)和乳腺癌(breast invasive carcinoma,BRCA)等11种癌症有关。结论当去甲基化酶FTO被敲低或处于低活动水平时,一些mi RNA和基因可能在癌症中发挥不同的作用,也有可能成为治疗癌症的新的核酸靶点。
2018年06期 v.31 591-597页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] [下载次数：290 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1354 ] - 邓玮;赵世巧;陈潇;刘斌;吕玉宇;
目的探讨沉默肝激酶B1/丝氨酸-苏氨酸激酶11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1/STK11),基因对前列腺癌细胞株RWPE-1中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的调控作用。方法构建3个sh RNA LKB1重组载体,转染至高表达LKB1的前列腺癌细胞株RWPE-1中,RT-PCR、Western blot法分别检测LKB1及TGF-β1 m RNA及蛋白表达水平;ELISA法检测细胞培养液上清中TGF-β1的分泌水平。结果构建获得的3种sh RNA LKB1表达载体,均能抑制LKB1基因的表达,其中以LKB1-sh RNA1沉默效果最强,其对LKB1 m RNA水平的抑制率为74.20%,对蛋白水平的抑制率为71.66%;转染重组质粒LKB1-sh RNA1后,TGF-β1的m RNA、蛋白表达及分泌水平均明显增加(P﹤0.05)。结论 LKB1基因沉默后,TGF-β1的表达明显增高,LKB1参与调节前列腺癌细胞中TGF-β1的表达,提示LKB1基因可作为研究前列腺癌发生发展的分子机制的新靶点。
2018年06期 v.31 598-602页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K] [下载次数：133 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1398 ] - 王晓明;杨巍;
目的探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制。方法在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pc DNA3.0及空载体pc DNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用q PCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;q PCR和Western blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1(forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因m RNA和蛋白的表达。结果与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的m RNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P<0.001),形成克隆数明显减少(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的m RNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的m RNA和蛋白表达水平降低。结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关。
2018年06期 v.31 603-606+612页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K] [下载次数：59 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1373 ]
- 赵宇;祝瑜;吴浪;孟青;刘明忠;
目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人肝癌细胞Hep G2增殖及自噬作用的影响,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法用不同浓度的Res作用Hep G2细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测Res对细胞增殖的影响,丹酰尸胺(monodancyldadverine,MDC)染色法检测Res对Hep G2细胞自噬体形成的影响;用20μmol/L Res和20μmol/L Res+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用Hep G2细胞24 h,Western blot法检测自噬相关基因Beclin 1、LC3和P62的表达情况,同时检测PI3K/Akt/m TOR通路中,PI3K、p-Akt(Akt)和p-m TOR(m ROR)的表达情况。结果 Res作用Hep G2细胞后,能够明显抑制细胞增殖,呈剂量-时间依赖性;可促进Hep G2细胞内自噬体的形成。Western blot结果显示,Res作用Hep G2细胞后,可提高LC3Ⅱ/Ⅰ的比值,促进Beclin 1的表达,降低作用底物P62的表达,而3-MA作用细胞后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin 1的表达水平均下降,P62的表达水平上调;Res还可显著降低细胞中PI3K、p-Akt和p-m TOR的表达。结论 Res可诱导自噬抑制Hep G2细胞的增殖,其机制可能与Res抑制PI3K/Akt/m TOR通路,进而上调自噬相关Beclin 1和LC3的表达以及下调P62的表达有关。
2018年06期 v.31 607-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 474K] [下载次数：327 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：1308 ] - 刘效森;王仕凯;王依楠;张鸣镝;陈艳;王作昭;潘风光;
目的研究补充生物活性肽QRPR(Gln-Arg-Pro-AH)对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的作用。方法用不同浓度的LPS刺激RAW264.7细胞不同时间,ELISA法测定细胞培养上清中细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的浓度,确定LPS刺激RAW264.7细胞的最适浓度和时间,建立RAW264.7细胞抵御LPS刺激模型。采用ELISA法测定QRPR肽对RAW264.7细胞抵御LPS刺激时IL-6和TNF-α表达量的影响。MTS法检测QRPR肽对RAW264.7细胞的毒性作用。结果100 ng/m L LPS诱导16 h为刺激RAW264.7细胞验证QRPR肽调节作用的最佳浓度和时间。QRPR肽可以抑制RAW264.7细胞受LPS刺激后IL-6和TNF-α的产生,QRPR肽浓度为250μmol/L时,其降低LPS刺激产生IL-6和TNF-α的能力最强。QRPR肽本身对RAW264.7细胞的生长既无促进作用,也无毒性和抑制作用。结论补充活性肽QRPR对巨噬细胞RAW264.7抵御LPS刺激具有积极的调节作用。
2018年06期 v.31 613-616页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K] [下载次数：200 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1280 ]
- 孙开青;李文华;周冬梅;徐军;孙文正;杨彬;
目的建立单克隆抗体药物消光系数测定方法,用于单克隆抗体药物的鉴别和紫外分光光度法的定量分析,并对其进行初步评价。方法使用6 mol/L盐酸胍对抗体进行变性处理,打开抗体折叠的高级结构,将其当作是色氨酸、酪氨酸和"S-S"键的三元体系,通过检测相同浓度下折叠和非折叠抗体在紫外280 nm波长处的吸光值,计算抗体的消光系数,并进行方法的精密度验证。结果两种单克隆抗体m Ab1和m Ab2在280 nm波长处的消光系数平均值分别为1.702和1.387 m L/(mg·cm);两位实验员检测的消光系数各自相对标准偏差分别为0.48%和0.87%,总相对标准偏差为0.69%,均小于1%,表明方法精密度良好。结论建立的方法操作简单,不依赖于抗体浓度,不破坏其二硫键结构,结果准确,可用于单克隆抗体药物消光系数的测定。
2018年06期 v.31 633-637页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K] [下载次数：542 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1300 ] - 秦海艳;熊颖;陈继军;乔玉玲;安晨;张影;陈军;宋兰兰;王炎超;赵祖波;庄超;毛晓燕;
目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测方法,并对其进行验证。方法将系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体加入已接种表达CD52抗原的人淋巴瘤靶细胞中,再加入人血浆冻干补体后,采用ATP显色法定量检测靶细胞的活细胞数目。对试验条件进行优化,并对方法进行专属性、准确性、精密度、线性验证。结果重组人源化抗CD52单克隆抗体在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法经过优化后,确定人淋巴瘤RAMOS细胞为靶细胞,抗体稀释初浓度为120μg/m L,稀释倍数为1∶1.4。不同浓度的无关抗体均对靶细胞无细胞毒性,方法专属性良好。理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样测定的相对CDC活性分别为(51.33±4.36)%、(75.80±6.31)%、(97.7±7.45)%、(133.27±10.7)%和(158.77±14.13)%,回收率均在80%~120%范围内,相对CDC活性和回收率的RSD均小于10%,方法准确性良好。将100%相对CDC活性试样重复测定6次,6次测定的相对CDC活性为(101.18±8.90)%,RSD小于10%,样品重复性良好。3个不同日期中同一实验员分别检测5个理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样的相对CDC活性的RSD均在10%以内,时间精密度良好。同一日期中2名不同实验员分别检测5个理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样的相对CDC活性的RSD均在10%以内,人员精密度良好。线性方程为y=1.065 6 x-4.026,r2=0.983 7,线性良好。结论成功建立了重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC检测方法,该方法具有良好的专属性、准确性、重复性、中间精密度和线性,可作为重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC活性的常规检测方法。
2018年06期 v.31 638-643页 [查看摘要][在线阅读][下载 302K] [下载次数：617 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1464 ] - 丁文婷;张永辉;耿兴良;李卓凡;刘泽;廖国阳;
目的分析不同试剂和方法制备脊髓灰质炎假病毒的包装效果,并比较不同检测方法的有效性。方法比较转染试剂(PEI、polyfect、jet PRIME、Effectene)、骨架质粒转染形式(pc DNA3.1-P1与Replicon共转染;pc DNA3.1-P1转染表达24 h后,转染Replicon;pc DNA3.1-P1与线性化的p Repluc共转染;pc DNA3.1-P1转染表达24 h后,转染线性化的p Repluc)、衣壳蛋白质粒与骨架质粒的质量(μg)比(分别为1∶1、1∶2、1∶3、2∶1、2∶2和2∶3)对制备假病毒效率的影响。获得的假病毒颗粒分别用报告基因荧光素酶活性检测法、荧光定量RT-PCR法、ELISA方法检测效价,并进行相关性分析。结果单独转染衣壳蛋白质粒或骨架质粒时,转染效果最佳试剂分别为jet PRIME和Effectene,当转染体系为共转染,转染试剂以Effectene为准;骨架质粒以RNA形式在衣壳蛋白转录后24 h转染,或以线性化质粒形式与衣壳蛋白共转染,效果差异无统计学意义(P>0.05);衣壳蛋白质粒与骨架质粒的比值为1∶2和1∶3时均可得到效价较高的假病毒。检测假病毒效价时,报告基因萤光素酶活性与核酸拷贝数具有一致性,病毒的核酸拷贝数与效价在0.01水平上显著相关,病毒颗粒的D抗原含量与效价在0.05水平上显著相关。结论建立了制备Sabin株假病毒的方法,并验证了荧光素酶检测假病毒效价的有效性。
2018年06期 v.31 644-650页 [查看摘要][在线阅读][下载 352K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1359 ] - 畅丽芳;李霄培;于文影;刘慧;夏强;陈维金;雷连成;
目的对破伤风抗毒素絮状单位测定法(体外法)进行方法验证,并与小鼠中和试验法(体内法)进行比较。方法对用于破伤风抗毒素效价检测的絮状单位测定法进行准确度、精密度、专属性及耐用性验证。采用絮状单位测定法及小鼠中和试验法分别检测破伤风抗毒素原料血浆、原液及成品,并分析两种方法的相关性。结果对破伤风抗毒素国家标准品6次絮状测定回收率均为100%;重复性验证的变异系数(CV)均<2%;对破伤风抗毒素效价检测具有良好的专属性,供试品中防腐剂对其检测无干扰;不同温度下检测结果的CV值<2%。两种方法对原料血浆、原液及成品测定结果的相关系数分别为0.825、0.937及0.955,P均<0.001,呈正相关,且相关性显著。结论破伤风抗毒素絮状单位测定法(体外法)操作简便,具有良好的准确性、精密性、专属性及耐用性,且与体内法具有显著相关性,可作为企业内控的一种辅助快速检测手段。
2018年06期 v.31 651-655页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：229 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1450 ] - 任芳芳;钱兴丽;宋彩花;陈巍;赵勇;刘信毅;洪超;杨晓蕾;
目的建立人用疫苗生产用细胞、胰酶及疫苗成品中猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据Gen Bank中登录的TTSu V1(JN688927)及TTSu V2(AY823991)的序列,合成TTSu V1及TTSu V2基因组部分DNA序列,连接于PUC57质粒上,制备重组质粒,以重组阳性质粒DNA为模板,PCR扩增316 bp的TTSu V1片段及252 bp的TTSu V2片段,同时验证方法的灵敏度和特异性。并采用该方法对2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗[3批Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strain,SIPV)收获液、1批SIPV成品、1批冻干甲型肝炎减毒活疫苗[hepatitis A(live)vaccine,freezedried,f HAV]成品、1批肠道病毒71型(enterovivus type 71,EV71)灭活疫苗成品]进行检测。结果建立的PCR法最低分别可检出10 fg/μL TTSu V1和0.01 fg/μL TTSu V2的目的基因;该方法可特异性扩增出TTSu V1和TTSu V2的目的基因条带。2批0.1%胰酶、Vero、KMB17、MRC5、Hep2、BT细胞及6批疫苗均未检出TTSu V1及TTSu V2。结论成功建立了疫苗生产用原材料、细胞、疫苗收获液及成品中TTSu V的PCR检测方法,且该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于本所疫苗生产中对TTSu V的检测。
2018年06期 v.31 656-661页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1361 ] - 高菁霞;宋绍辉;王东宝;杨伟;欧阳圣洁;代小虎;马磊;廖国阳;李卫东;
目的分析截留相对分子质量不同的超滤膜浓缩对流感病毒纯化效果的影响,以获得杂质含量低的高浓度病毒液。方法将H1N1、H3N2、Bv和By 4个型别流感病毒分别接种9~11日龄鸡胚,经(34±1)℃培养72 h后,收获尿囊液,经连续流离心获得澄清的病毒液后,再进行截留相对分子质量1 000 000、300 000的超滤膜及其两种超滤膜组合的超滤浓缩,测定超滤前后的总蛋白含量、卵清蛋白含量和血凝滴度。结果截留相对分子质量1 000 000的超滤膜超滤后,杂质去除率高,均在80%以上,截留相对分子质量300 000的超滤膜超滤后杂质去除率相对低,但后者病毒回收率较高,二者组合既能降低杂蛋白含量,又可提高病毒回收率。结论流感病毒鸡胚尿囊液采用截留相对分子质量1 000 000+300 000超滤膜组合超滤浓缩,病毒纯化效果较好。
2018年06期 v.31 662-666页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：437 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1392 ] - 侯慧丽;王艺诺;汤晓闯;梁明征;马杉姗;韩成权;
目的建立特异的重组人凝血因子Ⅷ产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用磁珠分离法提取样品中残留的CHO细胞DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行Q-PCR检测,根据标准曲线进行DNA残留量分析。对建立的方法进行专属性、准确性、重复性及中间精密度验证,并对重组人凝血因子Ⅷ原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果该方法 DNA浓度在0.003~300 pg/μL范围内,线性关系良好,R2为0.999,灵敏度可达0.003 pg/μL;对大肠埃希菌DNA无特异性扩增曲线,专属性良好;检测高、中、低浓度DNA加标量样品的回收率分别为82.68%、71.75%和72.67%,准确性良好;重复性检测的RSD为7.02%,中间精密度检测的RSD为9.31%,重复性及精密度良好。用该方法检测的3批重组人凝血因子Ⅷ原液的DNA残留量均远低于100 pg/剂量。结论成功建立了特异的CHO细胞DNA残留量的检测方法,该方法专属性好,准确性及精密度高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。
2018年06期 v.31 667-670页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数：385 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1232 ] - 余进;尉小平;沈积慧;程露;
目的建立检测冻干人凝血酶(Thrombin,TB)中三羟甲基氨基甲烷(Tris)含量的离子色谱-脉冲安培法,并进行方法验证。方法以戴安Ionpac CS16为阳离子交换色谱柱,40 mmol/L甲基磺酸(Methylsulfonic acid,MAS)溶液为淋洗液,流速为1.0 m L/min;采用500 mmol/L氢氧化钠溶液进行柱后衍生,流速:0.3 m L/min;柱温:30℃;进样体积:25μL;经脉冲安培检测器进行检测。同时对该方法进行专属性、精密度、准确性验证,并确定方法的线性范围、检测限和定量限。结果该方法可特异性检测Tris含量,供试品中甘氨酸、枸橼酸离子、钠离子等物质对Tris的测定无干扰;精密度RSD为0.18%;加标样品的平均回收率为98.1%,RSD≤5%;Tris对照品在0.01~0.08 mmol/L的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=1 755.3 X+1.838,R2=0.999 8;检测限和定量限分别为0.004和0.012 mg/L。结论成功建立了冻干TB中Tris含量的离子色谱-脉冲安培检测法,且方法具有良好的特异性、精密度及准确性。
2018年06期 v.31 671-673+681页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1136 ]