- 黄翠颖;张健;王虎强;孙大泉;王耀楠;蔡媛;潘志明;焦新安;耿士忠;
目的评价鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)的致病性。方法采用鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspi C[1×10~7、1×10~9 CFU/(0. 1 mL·只)]及鸡白痢沙门菌S06004(Nal~R)[1×10~7 CFU/(0. 1 mL·只)],分别经肌肉注射和口服感染小鼠,同时设空白对照组(未感染)。观察小鼠的临床症状、病理、体重、脏器内菌体载量、粪便排菌及脾脏细胞因子水平,分析鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株对小鼠的致病性。结果与空白对照组比较,各组小鼠均未出现任何临床症状,肝脏、脾脏、盲肠病理观察均未见任何病变,体重变化差异无统计学意义(P> 0. 05)。与鸡白痢沙门菌S06004(Nal R)感染组比较,减毒活疫苗候选株感染组小鼠肝脏、脾脏、盲肠内及小鼠粪便载菌量均降低。各感染组小鼠脾脏中炎性因子IL-1β、IFNγ、IL-12、IL-6表达量均较低,仅引起小鼠轻微短暂的炎症反应。结论鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株SKLZΔspiC对非靶动物(鼠)无致病性,符合公共卫生安全要求。
2019年05期 v.32 489-495页 [查看摘要][在线阅读][下载 616K] [下载次数：155 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1406 ] - 许文婷;罗剑;郑眉;王石磊;段鹏;李梅;周锋;
目的比较甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗经3种免疫途径免疫小鼠的长期保护效果。方法采用不同剂量(0. 15和1. 5μg)的甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗及裂解疫苗单独免疫或辅以Al(OH)_3佐剂共同免疫,分别经腹腔、肌肉及皮下注射免疫小鼠1次,免疫后不同时间点(3～360 d)收集血清,通过ELISA法检测血清IgG抗体水平。免疫后365 d,用含10×LD_(50)致死量的甲型H7N9流感病毒同源鼠肺适应株A/Shanghai/2/2013(H7N9)经滴鼻攻毒,20μL/只,攻毒3 d,检测小鼠肺洗液的病毒滴度,攻毒21 d,观察小鼠存活和体重丢失情况。结果甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗接种1次均可诱导小鼠产生较高水平的血清IgG抗体,全病毒灭活疫苗比裂解疫苗IgG抗体滴度峰值高2～8倍,且Al(OH)_3佐剂可有效提高两种疫苗诱导的血清IgG抗体水平。免疫后365 d,全病毒灭活疫苗及含佐剂裂解疫苗免疫均可保护小鼠抵抗同源流感病毒的致死量攻击,且Al(OH)_3佐剂可有效提高H7N9裂解疫苗的保护效果。3种免疫途径中腹腔注射和肌肉注射较皮下注射产生的IgG抗体维持时间更长,免疫剂量相同时,肌肉免疫途径对小鼠的保护效果略优于腹腔和皮下免疫途径。结论 3种途径1次免疫甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗或辅以Al(OH)_3佐剂的裂解疫苗,在小鼠模型中可提供至少365 d的保护,腹腔和肌肉免疫途径血清抗体持续时间较皮下途径更长,肌肉免疫途径保护效果略优于另两种途径。
2019年05期 v.32 496-502页 [查看摘要][在线阅读][下载 400K] [下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1324 ] - 杨燕羽;陆伟;刘馨;张胜祥;林建祥;吴凯;马波;
目的分析Walvax-2细胞基质培养甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)YN5株的遗传稳定性。方法将HAV YN5株在Walvax-2细胞中于35℃连续适应培养,取P24、P27、P29、P35和P40代病毒,提取RNA,以其为模板进行RT-PCR扩增,并测序。采用生物信息学软件DNAMAN、Vector NTI、BioEdit等进行序列分析,与GenBank中登录的标准株HM175(M14707)进行同源性比较。结果 5代病毒全基因组间的核苷酸序列同源性为100%。与标准株HM175比较,5代病毒基因组5′-NCR(101～200 bp)片段的124和152位发生突变,且存在134～137 bp缺失;2A(3 012～3 210 bp)片段的3 025和3 196位发生突变,其中,3 025位点A变为T,与标准株HM175 VP1/2A(3 024～3 191 bp)的差异小于7. 5%,基因亚型与其相同,均为IB型;2C(3 986～4 960 bp)片段的4 043、4 087、4 185、4 222、4 563、4 802、4 880位点发生突变。5代病毒与标准株HM175氨基酸序列同源性为99. 4%,共有29个氨基酸发生突变,主要抗原位点与标准株HM175完全一致。结论 Walvax-2细胞基质培养HAV YN5株可保持良好的遗传稳定性,有望用于甲肝疫苗的研发及生产。
2019年05期 v.32 503-507+511页 [查看摘要][在线阅读][下载 530K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1376 ] - 郭雪;陈海平;姜崴;石煊雯;肖艳慧;丁丽丽;赵淑洁;罗林云;
目的比较国产甲型肝炎减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法选择出生后未接种过甲型肝炎疫苗的18～24月龄儿童,按照随机、对照的原则分为实验组和对照组,每组接种不同的国产甲型肝炎减毒活疫苗。观察接种后30 d局部及全身反应;免疫后30 d采血,分离血清,检测抗体滴度。结果 306名受试者共观察到109例不良反应,实验组及对照组不良反应发生率分别为34. 4%和36. 8%,差异无统计学意义(P> 0. 05);实验组及对照组免疫后甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗体阳性率分别为99. 3%和99. 4%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为211. 3和224. 6 mIU/mL,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论两种国产甲型肝炎减毒活疫苗均具有良好的安全性及免疫原性。
2019年05期 v.32 508-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：247 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1263 ]
- 全柳霞;吴立然;李晶;
目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P <0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P <0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。
2019年05期 v.32 512-516+520页 [查看摘要][在线阅读][下载 325K] [下载次数：517 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1163 ] - 查成喜;漆亚亚;柳渊洁;邢福军;
目的探讨内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用。方法通过基因工程技术构建内脂素转基因和基因敲除小鼠,同时以野生小鼠作为对照,3组小鼠均以高脂高糖饮食饲养1个月后,于空腹12 h、进食30 min及1、2和3 h用血糖检测仪检测血糖水平;小鼠禁食10 h用生化分析仪检测甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平;Western blot法检测小鼠体内内脂素表达水平;相应试剂盒检测小鼠体内胰岛素受体及胰岛素水平。结果除空腹12 h组外,进食30 min及1、2和3 h转基因组小鼠血糖水平明显低于基因敲除组和野生组(P <0. 05),野生组小鼠血糖水平显著低于基因敲除组(P <0. 01);转基因组小鼠甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平显著低于基因敲除组(P <0. 05);基因敲除组小鼠内脂素表达水平明显低于转基因组和野生组(P <0. 001),转基因组小鼠明显高于野生组(P <0. 001);转基因小鼠胰岛素受体水平显著高于基因敲除小鼠和野生型小鼠(P <0. 01),野生型组明显高于基因敲除组(P <0. 05),3组间胰岛素水平差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论内脂素通过与胰岛素非竞争性结合胰岛素受体而发挥降低糖尿病小鼠血糖作用,且在脂代谢中具有促进脂肪积累的功能。
2019年05期 v.32 517-520页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K] [下载次数：316 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1156 ] - 徐颖;付加芳;唐超;韩金祥;王世立;
目的构建重组表达质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及p EF1-rTNSALP-FcD10,获得能够稳定表达rTNSALP-FcD10蛋白的CHO-K1细胞株。方法去除重组人非组织特异碱性磷酸酶(tissue-nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)多钛链C端氨基酸连接IgG1的Fc片段及10个天冬氨酸,构建目的基因rhALP-FcD10,将基因分别克隆至pcDNA3. 1及p EF1/Myc-His B载体上,均转化E. coli DH5α细胞;将签定正确的两组重组质粒均转染CHO-K1细胞,进行G418压力筛选,建立稳定转染的CHO-K1细胞系,采用RT-qPCR及Western blot方法检测细胞中rTNSALPFcD10 mRNA转录水平及蛋白表达量。结果重组质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及pEF1-rTNSALP-FcD10经双酶切鉴定证明构建正确;G418最低致死浓度确定为800μg/m L;CHO-K1细胞中rTNSALP-FcD10 m RNA转录及蛋白水平均高于空白对照组,差异均有统计学意义(P <0. 01);转染p EF1-rTNSALP-FcD10组的蛋白表达量较转染pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10组高。结论成功构建了rTNSALP-FcD10的重组表达质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及pEF1-rTNSALP-FcD10,获得了稳定转染的CHO-K1细胞系,成功表达目的蛋白rTNSALP-FcD10,为蛋白进一步纯化奠定了良好的实验基础。
2019年05期 v.32 521-526页 [查看摘要][在线阅读][下载 365K] [下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1288 ] - 赵璧忱;胡海燕;武志敏;郑程远;林宏甲;张梦龙;邹晓;罗春海;付世新;
目的分析胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)奶牛母体胎盘组织中有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK,MEK)及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK,p42/44 MAPK)的异常表达。方法选取年龄、胎次、体况相近的产后胎衣正常排出和RFM奶牛各3头,分别为N和R组。产后用子宫内膜采样器采集两组奶牛胎盘样本,Western blot法检测样本中MEK、p42/44 MAPK、P-p42/44MAPK蛋白表达水平,RT-qPCR法检测样本中MEK、p42/44 MAPK基因mRNA转录水平。结果与N组比较,R组奶牛胎盘组织中MEK蛋白表达水平显著下调(P <0. 01),p42/44 MAPK蛋白表达水平下调,但差异无统计学意义(P> 0. 05),P-p42/44 MAPK蛋白表达水平显著上调(P <0. 001);R组奶牛胎盘组织中MEK及p42/44 MAPK基因mRNA转录水平均显著下调(P <0. 01)。结论 RFM奶牛母体胎盘组织中MEK与p42/44 MAPK蛋白及m RNA转录水平均明显下调,可能是奶牛RFM发生机制中的关键。
2019年05期 v.32 527-530页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1174 ] - 云青青;陈竞霞;白瑞霞;赵鹏伟;
目的探讨Ghrelin对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其作用机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞的培养基中添加不同浓度的Ghrelin(400、500、600、700、800 ng/mL),采用MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法检测miR-7的表达量,Western blot法检测细胞中Cyclin D1及p27的表达水平。结果 600～800 ng/mL的Ghrelin可显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖(P <0. 01)。随着600 ng/mL Ghrelin作用时间的延长,miR-7的表达量显著增加(P <0. 01);人胃癌SGC-7901细胞中Cyclin D1的表达显著下调(P <0. 01),p27的表达显著上调(P <0. 05)。结论 Ghrelin可显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,可能是通过调控Cyclin D1、p27及miR-7的表达来实现的。
2019年05期 v.32 531-534页 [查看摘要][在线阅读][下载 178K] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1233 ]
- 于宝龙;李瑞峰;李文选;
目的探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TⅡA)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后星形胶质细胞增殖的MAPK通路的影响。方法建立大鼠SCI模型,获得星形胶质细胞,培养14 d后,采用免疫荧光法检测星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达;MTT法选择TⅡA抑制星形胶质细胞生长的最适浓度和时间;Western blot法检测MAPK通路各蛋白的磷酸化情况。结果星形胶质细胞中有GFAP特异性表达;TⅡA抑制星形胶质细胞生长的最适浓度为15μg/mL,最适作用时间为36 h;15μg/m L TⅡA作用0和4 h,星形胶质细胞中p-JNK高于8和12 h,ERK1/2和p38无变化。结论 TⅡA主要通过JNK依赖性途径对星形胶质细胞的生长进行调控。
2019年05期 v.32 535-537页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1152 ] - 张瑞霞;黄应蜂;邵喆;谭凯;王征;喇玉娟;张杰;
目的比较国产抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)人鼠嵌合单克隆抗体CDP1与进口抗EGFR单抗(以下简称进口单抗)临床前安全性的相似性。方法将50只食蟹猴随机分为溶媒对照组、CDP1低剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)和进口单抗对照组(50 mg/kg),每组10只,雌雄各半。每周静脉给药1次,共5次,恢复期6周。定期对动物进行一般观察,监测体重、摄食量、体温、眼检、尿检、血液生化和血液学指标,并检测心电图、血压、呼吸等安全药理学指标,于给药后不同时间点进行血样采集,进行毒代动力学和血清抗药抗体(anti-drug antibody,ADA)分析,给药结束后和恢复期末进行大体解剖和组织病理学检查。结果CDP1(5～100 mg/kg)连续5周给药,CDP1各剂量组均耐受良好,无明显可见毒性剂量为5 mg/kg,毒性剂量为50 mg/kg;CDP1和进口单抗毒性靶器官(靶部位)毒性反应和组织病理学变化相似,毒性靶器官均为消化系统(肝脏、胃肠道)、血液系统(红细胞、白细胞)和皮肤,毒性作用可逆或部分有可逆趋势,皮肤和胃肠道毒性与药物作用机制有关;CDP1中剂量组和进口单抗对照组主要毒代参数差异无统计学意义(P> 0. 05);ADA发生率相同。结论 CDP1不同剂量组均耐受良好,同等剂量下,CDP1和进口单抗在临床前安全性相似,为该药作为生物类似药进行临床试验提供了初步的安全性数据。
2019年05期 v.32 538-543+548页 [查看摘要][在线阅读][下载 523K] [下载次数：188 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1585 ]
- 龚锐;姚云清;鲁文辉;游文一;吴秀娟;
目的评价慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)合并原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)水平及血清中白介素-21(interleukin-21,IL-21)的表达。方法收集18例CHB合并原发性HCC患者(HCC组)、22例CHB患者(CHB组)及20例健康对照者(C组)的外周血,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CXCR5+ICOS+T细胞的水平;外周血经肝素抗凝,分离血清后,采用ELISA法检测血清中IL-21的表达水平。结果 HCC组外周血Tfh细胞绝对计数明显低于CHB组及C组(P <0. 05),CHB组外周血Tfh细胞绝对计数高于C组(P <0. 05)。HCC组与CHB组血清中IL-21的表达水平均高于C组(P <0. 05),HCC组血清中IL-21的表达水平与CHB组差异无统计学意义(P>0. 05)。结论 Tfh细胞在CHB进展至原发性HCC的过程中可能发挥着重要作用,本实验为预防原发性HCC提供了新的思路。
2019年05期 v.32 549-552+556页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1247 ] - 赵春艳;张西臣;张洪波;宫鹏涛;李建华;杨举;
目的调查长春地区猪十二指肠贾第鞭毛虫(简称贾第虫)感染的分子流行病学特征。方法选择长春地区两个猪场,随机采集60份猪粪便样品,根据贾第虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,TPI)基因设计巢式PCR引物,以提取的猪粪便基因组DNA为模板进行巢式PCR扩增,PCR产物经测序及序列比对,并建立贾第虫系统进化树。结果 60份样品中,27份为阳性,阳性率为45%(27/60),基因型均为人兽共患型集聚体A。结论长春地区两个猪场存在较严重的贾第虫感染,基因型均为集聚体A,有较大的散播风险,需加强猪场卫生监督管理,以避免疫病流行。
2019年05期 v.32 553-556页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K] [下载次数：179 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1234 ] - 许安阳;庞红;
目的评价水痘减毒活疫苗(varicella vaccine,VarV)在小学生及学龄前儿童中的保护效力(vaccine effectiveness,VE)。方法检索中国知网、万方和维普中文期刊、PubMed和Embase等文献数据库,收集中国2017年以前所有国内病例对照研究和回顾性队列研究中VarV的VE文献,并应用RevMan 5. 1软件进行Meta分析。结果共纳入34篇文献,其中病例对照研究19篇,回顾性队列研究15篇。34篇文献VarV合并VE为69%(95%CI:64%～73%);接种2剂次VarV的VE(92%,95%CI:80%～97%)明显高于接种1剂次(60%,95%CI:42%～73%),差异有统计学意义(P <0. 000 01);学龄前儿童接种VarV的VE(78%,95%CI:60%～87%)明显高于小学(33%,95%CI:4%～54%),差异有统计学意义(P <0. 000 01);5岁以下儿童接种VarV的VE最高,为94%(95%CI:69%～99%),9岁及9岁以上儿童接种VarV的VE最低,为41%(95%CI:23%～54%)。结论 VarV具有一定的保护效力,随着接种年龄的增加而降低。建议全面推广VarV的2剂次免疫程序。
2019年05期 v.32 557-564页 [查看摘要][在线阅读][下载 585K] [下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：1234 ]
- 边红;王燕;孙成彪;许娜;朱文赫;刘文森;王秀然;
目的表达重组蓖麻毒素A链(ricin toxin A,RTA),并进行半乳糖糖基化修饰。方法将重组质粒pET-28a-RTA转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白RTA,通过镍离子亲和层析柱纯化包涵体,并复性。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]/N,N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)法对重组RTA进行半乳糖糖基化修饰,并对偶联反应温度(20、25、30和37℃)和半乳糖与RTA的投料比(100∶1、500∶1、1 000∶1、1 500∶1和2 000∶1)进行优化。结果 RTA蛋白相对分子质量约34 000,主要以包涵体形式表达,纯化复性后纯度大于90%。最适偶联反应温度为25℃,半乳糖与RTA最适投料比为1 000∶1。结论成功表达了RTA蛋白,并通过EDC/NHS法实现了半乳糖与RTA的偶联。
2019年05期 v.32 565-569页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1206 ] - 孙艳;陈智;钟静;刘莉娜;何敏;范凤鸣;杨欢;曾献武;刘杰;
目的建立检测狂犬病病毒PM株病毒滴度的改良蚀斑法,并验证其精密度。方法于细胞接种病毒后第6天,分别加入不同浓度(0、50、75、100、200、400 mmol/L)HEPES溶液,以及分别于细胞接种病毒后第2、4、6、8天,加入最适浓度的HEPES溶液,确定HEPES最适加入浓度及蚀斑最适判定时间,建立改良的蚀斑法,检测48批狂犬病病毒毒力,并与小鼠脑内滴定法进行相关性比较;重复检测3次10批狂犬病病毒收获液毒力,计算变异系数(CV)。结果接种病毒后第6天后加入200 mmol/L HEPES溶液,形成的蚀斑清晰,易于计数。建立的蚀斑法与小鼠脑内滴定法具有高度相关性,3次检测结果的CV在0. 4%～3. 38%之间,重复性良好。结论加入HEPES溶液改良后的蚀斑法,操作便捷,是较为理想的滴定狂犬病病毒PM株毒力的方法,可替代小鼠脑内滴定法。
2019年05期 v.32 570-574页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K] [下载次数：335 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1294 ] - 黄蓉;蒋鸿超;李小曼;王明英;王美芬;孙强明;张桢;
目的建立一种基于VP6基因的A组轮状病毒(rotavirus,RV)拷贝数的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。方法提取病毒液中RV基因组RNA,经RT-PCR扩增VP6基因片段,回收PCR产物克隆至pMD-19T载体,将鉴定正确的阳性菌株常规培养制备标准品质粒,建立RT-qPCR病毒拷贝数检测方法,以标准品质粒Ct值为横坐标,拷贝数的对数为纵坐标绘制标准曲线,依据标准曲线方程检测样品中RV拷贝数。结果标准品质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;获得RV标准品质粒的标准曲线方程为y=-0. 246 3 x+10. 957,R~2=0. 995 5;原倍及稀释度为1×10~(-3)的样品溶液的RV病毒拷贝数分别为265 319. 903 5、1 682. 228 735 copies/μL。结论建立的RT-qPCR拷贝数检测方法,能在早期快速准确的检测RV,该方法稳定性较好,可据此标准曲线方程对样品中的RV进行绝对定量,为RV研究及临床检查提供了检测工具。
2019年05期 v.32 575-578页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：772 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1468 ] - 邓海清;尹珊珊;郝倩;顾行举;刘杨;张艳红;高宇皎;刘建凯;
目的建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证。方法采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量。色谱柱:TSKgel G3000(300 mm×78 mm,5μm);流动相:10 mmol/L PBS(150 mmol/L NaCl,pH 6. 8);检测波长:214 nm;流速:0. 5 m L/min;柱温:25℃;自动进样:100μL。同时对该方法进行线性、精密度、准确度、耐用性及专属性验证。结果建立的方法在纯化载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量为3～18μg/mL时,与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(R2)> 0. 99;23F-2017001、23F-2017002、23F-2017003批供试品重复性相对标准偏差(RSD)分别为0. 1%、0. 3%、1. 0%,中间精密性RSD分别为3. 7%、8. 5%、4. 8%;加入6、8、10μg/mL纯化载体蛋白TT样品的3次检测结果回收率在93. 2%～102. 6%之间,回收率的RSD均为0. 6%;进样温度为20～30℃条件下的保留时间和峰面积相对偏倚在-0. 1%～0. 5%之间;流动相溶液中含甘氨酸及低浓度硼酸时对检测结果无干扰,硼酸浓度为20 mmol/L以上时对游离蛋白峰检测有一定干扰。结论本实验建立的方法具有良好的线性、精密性、准确性、耐用性及专属性,可用于23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量检测。
2019年05期 v.32 579-583页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K] [下载次数：296 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1248 ]
- 傅宇婷;刘小畅;赵婷;杨净思;
脊髓灰质炎(简称脊灰,poliomyelitis)是由脊灰病毒引起的急性肠道传染病,严重危害人类健康和社会经济发展。1988年,全球消灭脊灰倡议行动启动以来,全球脊灰病例减少了99%以上。近年来野生型脊灰病毒(wild poliovirus,WPV)的流行呈降低趋势,而一些使用口服脊灰减毒活疫苗(oral live attenuated poliomyelitis vaccine,OPV)的国家正面临疫苗衍生脊灰病毒的风险。因此,世界卫生组织(WHO)调整了脊灰免疫策略,要求所有目前接种OPV的国家,在免疫程序中至少增加1剂脊灰灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)。IPV能避免OPV使用过程中的疫苗相关脊灰型麻痹(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)、疫苗衍生脊灰病毒(vaccine-derived poliovirus,VDPV)和疫苗重组脊灰病毒(vaccine recombinant poliomyelitis virus,VRPV)的发生。WHO要求使用IPV和二价脊灰减毒活疫苗(bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)序贯免疫程序替代三价脊灰减毒活疫苗(trivalent oral poliovirus vaccine,t OPV),逐步实现全程接种IPV。
2019年05期 v.32 584-588+593页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K] [下载次数：774 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：1178 ] - 邱苏赣;白玉;
近年来,得益于对癌症免疫监视和逃逸机制理解的不断深入及基因转运载体的发展,免疫疗法在临床上取得了一系列的成功。本文将介绍包括慢病毒载体(lentivirus,LV)的基本结构和生活史在内的发展历程。LV应用中的最主要安全性风险来源于具有复制能力的慢病毒载体(replication competent LV,RCL),针对这一问题发展出了一系列新的LV和相应的辅助手段。目前作为癌症免疫疗法主流的过继细胞传输法包括T细胞受体(T cell receptor,TCR)-T细胞和嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞疗法,其中LV已被广泛应用。此外本文还针对LV应用中的一些监管方面的问题及LV的未来发展方向进行探讨。
2019年05期 v.32 589-593页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K] [下载次数：849 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1386 ] - 张影;鲁旭;王斌;曾明;
螨变应原制品是以螨虫培养物为原材料制备而成的生物制品,用于螨虫过敏症的体内诊断和脱敏治疗。螨变应原提取物制备过程和标准化方法对制品质量和效力指标均有重要影响。质量稳定的螨变应原制品是脱敏治疗取得成功的关键。本文对螨变应原制品生产及质量控制关键参数进行综述,以期为相关产品的研究和质量控制提供参考。
2019年05期 v.32 594-599页 [查看摘要][在线阅读][下载 209K] [下载次数：251 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1193 ] - 寇文月;王娇娇;王为;董静贞;
无菌检查隔离器是一种为无菌检查试验提供无菌环境的设备,可较好地防止微生物污染待测样品,避免试验用品和辅助设备的污染,提高无菌检查试验结果的准确性。随着制药行业对无菌环境要求的不断提高,无菌检查隔离器已在全球制药行业得到广泛应用。本文主要对无菌检查隔离器的发展、分类、灭菌、工艺、验证、配套设备及在无菌检查中的应用作一综述,并将无菌隔离器与传统无菌检查室进行比较。
2019年05期 v.32 600-603页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K] [下载次数：358 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1125 ] - 刘建东;张静飞;张燕;郑海发;
腮腺炎是由腮腺炎病毒感染导致的急性呼吸道传染病,通过飞沫在空气中进行传播,主要发生在儿童和青少年人群,症状多为全身多系统多器官感染,同时该病毒也可感染成年人,通常不引起发病,但可作为病毒携带者传播疾病。流行性腮腺炎的发病率高,传染性强,可感染中枢神经系统导致死亡,严重影响人类健康。自20世纪60年代起,随着腮腺炎减毒活疫苗在全球范围内的广泛应用,腮腺炎的发病率显著降低,但近年来许多国家腮腺炎在疫苗免疫人群中再次暴发,亟需研制有效疫苗来控制腮腺炎的流行。为了解腮腺炎病毒及其疫苗的研究进展,本文对腮腺炎病毒的基因结构和流行情况、腮腺炎再次暴发流行的可能原因和腮腺炎疫苗的国内外研究进展作一综述。
2019年05期 v.32 604-608页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] [下载次数：687 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1246 ] 下载本期数据