中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 皮内免疫部分剂量组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗的免疫持久性

    李婧妍;蔡路奎;马艳;温嘉纳;胡文著;廖宏玮;史荔;杨净思;

    目的 评价皮内免疫(intradermal,ID)部分剂量组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(diphtheria-tetanus-acellular component pertussis and Sabin-derived inactivated poliovirus vaccine,DTacP-sIPV)的免疫持久性。方法将40只Wistar大鼠(雌雄各半)分别经ID部分剂量(DTacP-sIPV 1/5和1/10剂量,即1/5D和1/10D ID组)及肌肉注射(intramuscular,IM)全剂量DTacP-sIPV(全剂量IM组),同时设空白对照组(ID PBS)。于0、1、2月共免疫3次,末次免疫后12个月经尾静脉采血,分离血清。微量中和试验法检测抗脊髓灰质炎病毒中和抗体滴度,间接ELISA法检测大鼠血清中抗白喉毒素(diphtheria toxin,DT)、破伤风毒素(tetanus toxin,TT)、百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)和百日咳黏附素(pertactin,PRN)的IgG抗体滴度,并计算抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)及抗体阳性率。末次免疫后12个月,经雾化吸入百日咳杆菌气雾进行攻击,攻击时间为30 min,于气雾攻击后2、5、14 d检测各组大鼠白细胞数及肺、气管、鼻部位的菌落克隆形成数(colony-forming unit,CFU)。结果 与全剂量IM组比较,1/5D和1/10D ID组脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体阳性率差异均无统计学意义(P均> 0.05),空白对照组各型抗体阳性率均为0。1/5D、1/10D ID及全剂量IM组DT、TT、PT、FHA和PRN的IgG抗体阳性率均为100%,空白对照组IgG抗体阳性率均为0。与攻击后2 d比较,空白对照组大鼠经百日咳杆菌气雾攻击后5 d的白细胞数明显升高(F=3.48,P <0.05),随后开始下降;其他组均随时间的延长保持平稳(F=0.14~1.30,P> 0.05)。气雾攻击后,空白对照组大鼠肺部细菌载量明显高于其他3组(F=19.00~206.00,P <0.05),攻击后14 d仍可检测到百日咳杆菌;除空白对照组外,其他3组大鼠肺部细菌载量均于攻击后5 d达峰值,14 d时基本清除,各时间点组间差异无统计学意义(F=1.14~1.25,P> 0.05)。空白对照组各时间点气管和鼻部细菌载量略高于其他组,但差异均无统计学意义(F=0.71~3.54,P> 0.05);除空白对照组外,其他3组大鼠气管和鼻部细菌载量较接近,差异均无统计学意义(F=0.75~3.41,P> 0.05)。结论 ID 1/5D DTacP-sIPV可诱导大鼠产生针对疫苗各组分的持久保护性抗体,本研究为ID部分剂量DTacP-sIPV免疫策略的制订提供了实验依据。

    2023年05期 v.36 513-517+523页 [查看摘要][在线阅读][下载 873K]
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  • 电荷修饰流感疫苗脂质体的免疫效果

    李漂;刘艳红;刘晓琳;杨艾;张茜;鲁卫东;

    目的 检测电荷修饰脂质体的理化性质,并评价其作为流感疫苗佐剂的免疫增强效果。方法 以大豆卵磷脂、胆固醇、2,3-二油氧基丙基-三甲基氯化铵[N-1-(2,3-Dioleyloxy)propyl-N,N,N-trimethylam-moniumchloride,DOTAP]与1,2-二油酰基磷脂酰胆碱(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DOPC)(DOTAP与DOPC质量比为1∶4、2∶3、3∶2、4∶1)为膜材,制备4种电荷修饰的脂质体。将四价流感疫苗分别与制备的4种脂质体按1.4∶1.0的体积分数混合,通过冻融-冻干法将混合液制备为阳离子修饰的流感疫苗脂质体冻干粉。用PBS复溶脂质体冻干粉,采用激光粒度仪测定粒径及Zeta电位,Lowry法测定脂质体包封率。将231只雌性KM小鼠随机分为阴性对照组(PBS)、阳性对照组(四价疫苗原液)、阳离子脂质体组(4种电荷修饰的流感疫苗脂质体)和中性脂质体组(未经电荷修饰的流感疫苗脂质体),均经腹腔注射,0.2 m L/只,免疫后7、14、28 d,采用MTT法和T淋巴表面标记法评价其细胞免疫效果;免疫后3、7、14、28、42、56 d,采用血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)试验评价其体液免疫效果。结果 DOTAP与DOPC质量比为4∶1时,阳离子修饰脂质体的粒径和Zeta电位达最大,分别为529.65 nm和12.05 mV,此时包封率也较高,为81.82%。4个比例的阳离子脂质体组小鼠脾细胞的刺激指数(stimulus index,SI)及CD4~+/CD8~+值均明显高于阴性对照组(F=4.651~25.866,P均<0.05),其中4∶1比例组的两项指标均高于其他3个比例组;且该组小鼠于免疫后3 d即产生了早期体液免疫效果,免疫后42 d抗体滴度达最高,在整个免疫周期内均维持较高水平。结论 不同电荷修饰的阳离子脂质体均能提高流感疫苗的免疫效果,其中DOTAP与DOPC质量比为4∶1时的免疫增强效果最好,免疫效应持续时间最长。

    2023年05期 v.36 518-523页 [查看摘要][在线阅读][下载 846K]
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  • 甲型肝炎病毒衣壳蛋白VP1、VP3的原核表达及其免疫原性

    赵丹莹;周永飞;徐艳玲;陈子杨;唐剑光;常东英;王艺博;关诗宇;常军亮;曹玉锋;

    目的 原核表达甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)衣壳蛋白VP1和VP3,并评价其免疫原性。方法 PCR法扩增VP1和VP3基因片段,克隆至载体pET-G28a中,构建重组表达质粒pET-G28a-VP1和pET-G28a-VP3,转化至感受态E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析表达产物。目的蛋白经离子交换层析纯化,复性后与多种佐剂配伍,免疫雄性BALB/c小鼠,随机分为VP1-MF59、VP1-AH、VP1-AP、VP1-AP-10CpG、VP1-AP-50CpG、VP3-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组,每组5只。ELISA法检测各组小鼠血清中IgG抗体效价,快速荧光灶免疫抑制试验测定VP1-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组小鼠血清中和抗体效价。结果 菌落PCR及测序结果证明,重组表达质粒pETG28a-VP1及pET-G28a-VP3构建正确。重组蛋白VP1和VP3相对分子质量分别约为37 000和26 000,主要以包涵体形式存在,表达量分别为18.6%和32.4%,纯度分别为86.3%和84.7%,且分别可与兔抗HAV抗血清及鼠抗HAVVP3抗血清发生特异性结合。VP1-AP-50CpG组小鼠血清的IgG抗体效价显著高于VP1-AP组(q=22.05,P <0.01),VP3-VP1-AP组小鼠血清的IgG抗体效价显著高于VP1-AP及VP3-AP组(q分别为22.05和22.49,P均<0.01)。与PBS对照组比较,VP1-AP及VP3-VP1-AP组小鼠血清的中和抗体效价显著升高(q分别为7.79和25.11,P <0.01)。结论 原核表达的HAV衣壳蛋白VP1和VP3纯度较高,且具有良好的免疫原性,制剂中添加CpG有利于增强抗原的免疫原性。本研究为HAV重组亚单位疫苗的研发奠定了基础。

    2023年05期 v.36 524-530页 [查看摘要][在线阅读][下载 902K]
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基础研究

  • GⅡ.4 Sydney[P31]型诺如病毒GZ19株进化及其受体结合特征分析

    王金冬;马亚林;段招军;

    目的 分析我国GⅡ. 4型诺如病毒(norovirus,NoV)GZ19株的进化特征,并明确其结合组织血型抗原(histoblood group antigens,HBGAs)受体的能力和方式。方法 根据GZ19株中的ORF2区序列,构建进化树,并分析其在HBGAs结合位点(HBGA binding sites,HBSs)和关键阻断表位的氨基酸序列。采用原核表达系统表达P颗粒并进行纯化,获得的蛋白经SDS-PAGE和间接ELISA法鉴定后,采用唾液结合试验和寡糖结合试验分析P颗粒的糖结合特征。结果GZ19株属于GⅡ. 4 Sydney[P31]谱系,其受体结合位点和阻断表位的氨基酸序列相对保守,与近5年其他GⅡ. 4Sydney[P31]毒株具有较高的同源性,而与GⅡ. 4 Sydney 2012原型株和GⅡ. 4 Sydney[P16]株的差异较大。P颗粒仅与A、B、O、AB分泌型唾液和H-di寡糖结合。结论 GZ19株代表目前GⅡ. 4 Sydney[P31]NoV的进化方向,P颗粒的成功表达及其与HBGAs受体的结合特征分析,为研究我国GⅡ. 4 NoVs的流行进化规律及疫苗开发奠定了基础。

    2023年05期 v.36 531-536+544页 [查看摘要][在线阅读][下载 1029K]
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  • 小鼠短散布核元件B1反义RNA的药代动力学分析

    吴沛园;王晓蝶;刘鑫;武崇光;吉宁;王秀芳;吕占军;

    目的 分析小鼠短散布核元件B1反义RNA(B1 antisense RNA,B1as RNA)静脉注射正常小鼠后,在小鼠血液及不同组织中的生物分布;以及转染培养的正常小鼠胚胎细胞后,细胞摄取B1as RNA的效率。方法 取6只8~12周龄BALB/c小鼠,雌雄各3只,经尾静脉注射20μg B1as RNA,分别于注射后不同时间经眼眶静脉丛采血;取54只8~12周龄BALB/c小鼠,经尾静脉注射20μg B1as RNA,注射后不同时间分别安乐处死6只小鼠,雌雄各3只,解剖后取心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和胸腺;将B1as RNA转染入培养的小鼠胚胎细胞,转染后不同时间取一定量的细胞,采用RT-q PCR法检测B1as RNA在小鼠血液及不同组织的生物分布以及胚胎培养细胞中B1as RNA的存留水平。将30只自然衰老的BALB/c小鼠(≥14月龄)分成3组:治疗组(经尾静脉注射20μg B1as RNA,每周1次)、无关RNA对照组(经尾静脉注射20μg Lac Z3F3R RNA,每周1次)和盐水对照组(注射相同体积的盐水),每组10只,另设年轻对照组(正常年轻的8~12周龄BALB/c小鼠,雌雄各5只),给药4周后,安乐处死各组小鼠,取肝脏组织,RT-q PCR法检测衰老相关基因(Sirt1、p21、p16~(INK4a)、p15~(INK4b)、p19~(Arf))的表达水平。结果 尾静脉注射后,B1as RNA在小鼠血液中可存留约30 min,在大多数检测到的组织中可存留2~4 h,在肺中可存留约48 h;B1as RNA转染小鼠胚胎培养细胞后45 min,细胞摄取B1as RNA的效率约为每个细胞摄取400个B1as RNA分子。与盐水对照组比较,B1as RNA处理可显著下调p21、p16~(Ink4a)、p15~(Ink4b)、p19~(Arf)基因m RNA的表达(t分别为10.01、4.461、4.420和5.309,P均<0.05),显著上调Sirt1基因mRNA的表达(t=4.579,P<0.05)。结论 B1as RNA转染细胞可被细胞有效摄取。静脉注射小鼠后,B1as RNA可在血液和组织中停留一定时间,并调节衰老相关基因的表达,使其接近年轻正常小鼠的表达水平。

    2023年05期 v.36 537-544页 [查看摘要][在线阅读][下载 976K]
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  • siRNA干扰C-C趋化因子配体5对喉癌细胞生物学特性的影响

    牛丽;韩瑞;贺龙;王瑛;郭慧娜;皇甫辉;

    目的 研究C-C趋化因子配体5(C-C chemokine ligand 5,CCL5)在头颈鳞状细胞癌中的表达,并探讨CCL5对喉癌细胞生物学特性的影响。方法 基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库查找CCL5在头颈鳞状细胞癌中的表达情况。将喉癌细胞TU177转染siRNA(siRNA组),并设对照(NC)组,CCK8法、细胞划痕试验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、迁移、细胞周期及细胞凋亡情况;RT-PCR、Western blot法检测CCL5敲降效率及多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)、bcl-2相关x蛋白(bcl-2-associated x protein,Bax)mRNA转录及蛋白表达水平。结果 CCL5在头颈鳞状细胞癌的表达高于正常组织(P <0.05)。与NC组相比,siRNA组siRNA具有较高的敲降效率(t分别为12.898和22.656,P均<0.01);siRNA敲降CCL5可抑制喉癌细胞增殖、迁移,促进喉癌细胞晚期凋亡及凋亡蛋白Bax的表达(t=2.600~11.667,P均<0.05)。结论 CCL5在头颈鳞状细胞癌中高表达,siRNA干扰CCL5通过上调Bax表达抑制喉癌细胞TU177增殖、迁移,促进凋亡,为CCL5可能作为治疗喉癌的新靶点奠定了基础。

    2023年05期 v.36 545-550+558页 [查看摘要][在线阅读][下载 1024K]
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  • 猪外周血淋巴细胞干扰素诱导跨膜蛋白的拓扑学分析及其在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后转录水平的变化

    蒙小刚;宋扬;鲁会军;霍晓伟;吕香玉;刘锴;温树波;

    目的 对猪外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBMCs)干扰素诱导跨膜蛋白(IFN-induced transmembrane,IFITM)进行拓扑学分析,并检测PBMCs在体外感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后IFITM基因mRNA转录水平的变化。方法 无菌采集PRRSV、猪圆环病毒2(porcine circovirus 2,PCV2)和乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)阴性的仔猪抗凝血,分离PBMCs,PCR扩增猪IFITM CDS序列,测序并进行拓扑学分析。PBMCs体外感染PRRSV,分别于感染后12、24、36和48 h收集细胞样品,RT-PCR法检测PBMCs中PRRSV感染情况,qRT-PCR法检测IFITM1、IFITM2和IFITM3基因mRNA转录水平的变化。结果 成功分离到猪PBMCs,并克隆获得了PBMCs源IFITM CDS全长序列,猪IFITM蛋白可能存在两种拓扑学结构。PBMCs接种PRRSV后24 h可产生明显的细胞病变。PRRSV可在PBMCs中复制。PRRSV感染早期可显著上调PBMCs中IFITM1、IFITM2和IFITM3基因mRNA的转录水平,且均在感染后第12 h达高峰,随后逐渐下降;IFITM1基因mRNA的转录水平在病毒感染后第36 h有所回升,然后又迅速回落。结论 PRRSV体外感染PBMCs可显著上调猪IFITM基因mRNA的转录水平,表明IFITM参与PBMCs抗病毒免疫反应。本研究为揭示机体抗PRRSV天然免疫反应提供了参考。

    2023年05期 v.36 551-558页 [查看摘要][在线阅读][下载 1340K]
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  • 重组人白介素-29-Fc融合蛋白在HEK-293F细胞中的表达及体外抗肿瘤活性分析

    闫甲丽;左群;祁芳冰;刘明杨;刘建伟;李素贞;柳森;王健;

    目的 在人胚肾293F(human embryonic kidney 293F,HEK-293F)细胞中表达重组人白介素-29-Fc(recombinant human interleukin-29-Fc,rhIL-29-Fc)融合蛋白,并分析其体外抗肿瘤活性。方法 构建重组UCOE-IL-29-Fc表达质粒,瞬时转染HEK-293F细胞,经表达、纯化后获得rhIL-29-Fc融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定;将rhIL-29和rhIL-29-Fc蛋白分别经左耳皮下免疫雌性日本大耳白兔,每组2只,0.5 mg/只,右耳静脉采血,分离血清,ELISA法检测半衰期;CCK-8试验检测rhIL-29-Fc蛋白对人结肠癌HT-29、人结肠癌HCT-116、人Burkkit淋巴瘤Daudi、人非小细胞肺癌NCI-H1975、人小细胞肺癌NCI-H209、人食管癌EC109和人胰腺癌PANC-1细胞的体外抗增殖效果,并计算半数抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC_(50))。结果 重组表达质粒UCOE-IL-29-Fc经双酶切及测序鉴定证明构建正确,瞬时转染HEK-293细胞6 d后,收获培养上清,经纯化获得的rhIL-29-Fc融合蛋白相对分子质量与预期相符,蛋白浓度为1.5 mg/mL,纯度为93%,可与小鼠抗人IL-29抗体特异性结合。rhIL-29-Fc蛋白半衰期为25 h,对7种肿瘤细胞显示出不同程度的增殖抑制效应,对不同细胞的IC_(50)也不同。结论 利用HEK-293F细胞成功表达rhIL-29-Fc融合蛋白,该融合蛋白半衰期比rhIL-29延长了20 h。根据7种肿瘤细胞显示出不同程度的体外增殖抑制效应和IC_(50)测定结果,发现rhIL-29-Fc融合蛋白的抗肿瘤活性高于rhIL-29。该研究为IL-29蛋白治疗肿瘤的开发奠定了基础。

    2023年05期 v.36 559-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 984K]
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  • 解聚素-金属蛋白酶17缺失对鼻咽癌细胞活性氧产生及线粒体功能的影响

    尹永波;李学申;邱金霞;籍玉青;崔静;

    目的 探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)缺失对鼻咽癌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生及线粒体功能的影响。方法 将3组ADAM17基因干扰质粒ADAM17 shRNA及空质粒ADAM17-shRNA-NC转染鼻咽癌细胞株(CNE1),RT-PCR及Western blot法检测干扰效率,选择干扰效果最好的shRNA进行后续试验。CCK-8法检测各组细胞增殖能力;克隆形成试验检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化;荧光显微镜检测细胞线粒体氧化损伤产物ROS水平;丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测细胞氧化应激标志物MDA和SOD含量;Western blot法检测细胞线粒体损伤标记物Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3、c-Myc的表达。结果 ADAM17-shRNA2组干扰效果最好。与shRNA-NC组相比,ADAM17-shRNA2组细胞的增殖速率明显下降(t=8.964,P=0.036);形成的集落数明显减小(t=10.351,P=0.014);细胞凋亡数量明显增加(t=11.25,P=0.008);细胞内代表ROS水平的荧光强度明显增强;线粒体膜电位明显下降(t=9.233,P=0.013);SOD含量明显降低(t=7.233,P=0.034),MDA含量明显升高(t=7.415,P=0.038);细胞中Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3的水平均明显升高(t分别为8.985、9.021和7.789,P分别为0.023、0.011和0.031),c-Myc蛋白表达水平明显减少(t=10.352,P=0.004)。结论 干扰ADAM17基因表达通过促氧化诱导SOD水平下降,MDA水平升高,进而缓解细胞膜的氧化损伤;同时促进细胞线粒体ROS表达水平,降低线粒体膜电位,体外抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

    2023年05期 v.36 566-573页 [查看摘要][在线阅读][下载 1045K]
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  • GⅠ.1型人札如病毒的体外培养及其衣壳蛋白VP1多克隆抗体的制备

    杜文静;刘丹;丛鑫;庞立丽;毛彤瑶;段招军;

    目的 体外培养GⅠ. 1型人札如病毒(human sapovirus,HuSaV),并制备其衣壳蛋白VP1多克隆抗体。方法 将中国疾病预防中心病毒病预防控制所腹泻室保存的GⅠ. 1型HuSaV阳性粪便标本接种至添加不同胆酸盐[甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、甘氨胆酸(GCA)]的人十二指肠腺癌细胞(HuTu-80)中,利用PCR和RT-qPCR法确定病毒感染、增殖及传代情况。PCR扩增VP1基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-VP1,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组VP1蛋白纯化后免疫2只雌性新西兰大耳白兔,共免疫4次,免疫后18、28、38和48 d采血,ELISA法检测血清效价。结果 GⅠ. 1型HuSaV在胆酸盐GCA存在下可有效感染HuTu-80细胞,增殖后的病毒在HuTu-80细胞中能够稳定连续传3代。表达的重组GST-VP1蛋白相对分子质量约86 000,纯化后约60 000(切除GST标签)。制备的抗HuSaV VP1蛋白多克隆抗体效价可达1∶12 800以上。结论 利用HuTu-80细胞添加胆酸盐成功实现了HuSaV的体外分离培养,并制备了HuSaV VP1蛋白高效价多克隆抗体,为深入开展HuSaV的鉴定、感染及致病机制等奠定了基础。

    2023年05期 v.36 574-579页 [查看摘要][在线阅读][下载 914K]
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  • 长链非编码核糖核酸FRAPT在三阴性乳腺癌中的表达及其生物学意义

    何赛;刘志芳;李瑞玮;

    目的 探讨长链非编码核糖核酸FRAPT(lncRNA FRAPT)在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞中的表达,并分析其对TNBC细胞增殖、细胞周期及耐药的影响。方法 利用scRNASeqDB及TCGA在线生物信息学分析数据库,检测lncRNA FRAPT在TNBC中的表达情况及其与预后的相关性;利用Lipofectamine~(TM)2000向TNBC细胞MDA-MB-231中单独转染si-lncRNA FRAPT及si-Ctrl(阴性对照),磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)试验、流式细胞术检测转染后TNBC细胞的增殖及细胞周期变化,并检测对化疗药物紫杉醇(paclitaxel,PTX)的耐药情况。结果 TNBC组织和细胞中lncRNA FRAPT表达上调,且其高表达与TNBC患者较差的预后呈正相关(Hazard Ratio=1.66,P=0.047)。沉默lncRNA FRAPT显著抑制TNBC细胞的增殖,且细胞周期被阻滞在G1期;而沉默lncRNA FRAPT增加了TNBC细胞对PTX的敏感性。结论 lncRNA FRAPT在TNBC中高表达并与肿瘤预后相关,沉默lncRNA FRAPT可抑制TNBC细胞增殖、细胞周期,并增加了对化疗药物PTX的敏感性。

    2023年05期 v.36 580-584页 [查看摘要][在线阅读][下载 949K]
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诊断制剂

  • HBV核酸血筛试剂国家参考品的研制

    李克坚;郝晓甜;周诚;

    目的 研制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸血筛试剂国家参考品。方法 将从上海、甘肃、河南、湖南、湖北等地域的血液中心、浆站、生物制品公司等收集到的多份人HBV抗体阳性或HBV感染者血浆样品,经HBV DNA病毒检测,筛选出阴性及阳性参考品候选品;将HBV DNA国家标准品用人阴性血浆稀释至103IU/mL,作为最低检出量(limit of detection,LOD)候选品。将HBV核酸血筛国家阴性及阳性参考品候选品、LOD参考品待标品分发至8家企业实验室,分别进行HBVHCVHIV核酸血筛联检测定。对整套国家参考品进行均匀性和稳定性考察。结果共筛选出8份HBV病毒载量为0的阴性样品,作为阴性参考品;9份HBV DNA病毒载量为10~3~10~4IU/mL的阳性样品,作为阳性参考品;1份LOD参考品,经WHO HBV DNA标准品标定,病毒含量为1.0×10~3IU/mL。整套国家参考品稳定性好,均匀性检查符合规定。结论 制备了HBV核酸血筛试剂国家参考品,为我国HBV核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据。

    2023年05期 v.36 585-588+593页 [查看摘要][在线阅读][下载 837K]
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临床研究

  • 水痘减毒活疫苗临床病例病原学分析

    权娅茹;袁力勇;陈震;邱平;李长贵;

    目的 对水痘减毒活疫苗临床病例进行病原学分析。方法 采集企业水痘减毒活疫苗Ⅲ期临床试验(试验地点为河南省)中临床确诊为水痘病例的49名患者身上的水痘疱疹液,共64份,提取DNA,采用PCR和限制性片段多态性(PCR and restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法区分野毒株和疫苗株;采用2008年国际水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)基因型命名专题会议上建议的基因分型法进行基因型分析。结果 64份疱疹液均为野毒型(PstⅠ~+SmaⅠ~-BssHⅡ-NaeⅠ~-),无疫苗相关病例发生。49份疱疹液均为Clade 2遗传支;与Clade 2遗传支相比,49份疱疹液水痘病毒基因均在SNP18 082位点发生了T→C同义突变,1份在790位点发生了C→A突变。结论 在河南省开展的水痘减毒活疫苗临床试验中的临床病例均为野毒株感染引起,属Clade 2遗传支。

    2023年05期 v.36 589-593页 [查看摘要][在线阅读][下载 816K]
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技术方法

  • 报告基因法检测人生长激素生物学活性

    俞露;刘玉林;朱秋媚;张宇;李继宏;刘莹;刘景会;

    目的 建立报告基因法(reporter gene assay,RGA)检测人生长激素(human growth hormone,hGH)的生物学活性,并对方法进行验证。方法 通过hGH能与HEK293/GH-Luc细胞膜上的hGH受体(hGH receptor,hGHR)结合激活荧光素酶(luciferase,Luc)的表达评价hGH的生物学活性。建立的方法检测条件为:样品起始浓度1μg/mL;细胞接种量为(2.45~2.66)×104个/孔;样品3倍系列稀释,共8个稀释度;孵育时间为18~24 h。通过测定Luc强度,并经四-参数拟合与国家标准品进行比较计算样品的相对生物学活性。对建立的方法进行专属性、重复性、中间精密度、相对准确度、线性范围、耐用性验证。结果 产品中辅料成分及培养基中血清成分不会对活性检测结果产生影响;1批样品重复检测6次相对效价的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为6.794%,远低于20%;2名实验员不同时间对不同批次样品检测的相对效价GCV均低于20%;不同浓度供试品相对效价测定值的相对偏差均在±12%范围内,线性回归方程的斜率为0.982,线性范围为0.6~1.6μg/mL,决定系数(R2)为0.997;3批原液及1批成品在不同细胞代次、细胞密度及加样位置的条件下,相对效价测定值的GCV分别为4.758%、4.430%、7.294%和2.771%,均小于20%。结论 建立的RGA法专属性、重复性、中间精密度、相对准确度、线性范围和耐用性良好,均符合应用要求,有望替代传统体内生物学活性检测方法,用于hGH的活性评价及质量控制。

    2023年05期 v.36 594-598页 [查看摘要][在线阅读][下载 846K]
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  • 重组人脑利钠肽等电点分析全柱成像毛细管等电聚焦电泳法的建立及验证

    张竞;周志艳;李丹丹;安丽康;王岩勃;邹卫;

    目的 建立重组人脑利钠肽等电点(isoelectric point,pI)分析的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,CIEF-WCID)法,并进行验证。方法 采用CIEF-WCID法对两性电解质、占位剂、蛋白浓度、聚焦时间等进行优化后,获得检测重组人脑利钠肽的最佳检测条件。对建立的方法进行重复性、样品间精密度和耐用性验证,并对连续生产的3批重组人脑利钠肽进行pI分析。结果 选择HR AESlyte 8-10.5为两性电解质,25 mmol/L氢氧化钠为占位剂,以87.5μg/mL为样品检测终浓度,聚焦时间为8 min。同一样品连续进样6次,检测pI相对标准偏差(RSD)为0.1%;6份样品检测pI RSD为0.1%;在样品不同终浓度下,主峰pI RSD为0.1%,不同放置时间下,样品pI RSD为0.1%,但pI标记物不可随意更改。连续3批重组人脑利钠肽样品pI均可检出。结论建立的重组人脑利钠肽pI分析的CIEF-WCID法,重复性好、精密度高,可用于重组人脑利钠肽后续的质量控制。

    2023年05期 v.36 599-603+613页 [查看摘要][在线阅读][下载 999K]
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综述

  • 病毒性亚单位疫苗的研究进展

    苏津贤;柏家林;张海霞;

    亚单位疫苗由病原体的免疫活性片段制备而成,不含遗传物质,是新型疫苗的研究热点和开发方向,其安全无隐患,且具有高免疫活性,在遏制致病性病毒传播方面发挥了重要作用。本文对常见病毒性疾病亚单位疫苗的研究进展及应用作一综述,旨在为新发病毒性疾病亚单位疫苗的研发提供理论依据。

    2023年05期 v.36 604-613页 [查看摘要][在线阅读][下载 934K]
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  • Ets转录因子ELK1功能及其作用机制的研究进展

    赵元莘;翟岩辉;师粒晶;李子义;

    Ets转录因子ELK1是Ets转录因子家族中三元复合物(ternary complex factor,TCF)亚家族成员之一,是MAPK/ERK信号通路的直接下游转录因子,磷酸化后具有激活ERK信号的功能。ELK1在干细胞和肿瘤细胞中呈高表达且磷酸化程度高,在干细胞中具有促进增殖、抑制凋亡和分化的作用;在肿瘤细胞中具有促进增殖、迁移,抑制凋亡的作用。在神经细胞中,ELK1参与长期记忆、学习和成瘾等功能的发挥。本文就ELK1的主要结构及基本生物学特性、ELK1在肿瘤细胞、干细胞和神经细胞中的功能及其作用机制的研究进展作一综述,以期为后续相关研究提供新思路。

    2023年05期 v.36 614-618+625页 [查看摘要][在线阅读][下载 865K]
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  • 以无细胞百白破疫苗为基础的联合疫苗的研究进展

    屈旭成;王婷婷;刘建凯;郑海发;

    联合疫苗(combined vaccine)是将2种或2种以上不同生物体或提纯抗原通过物理方法混合后制成的单一疫苗制剂。联合疫苗的使用能够减少免疫针次,提高儿童的依从性及家长的接受度;降低运输、储存和管理成本;避免漏种,提高疫苗接种率。目前,国外已有多种联合疫苗上市,且具有较好的安全性和免疫原性;国内已有部分联合疫苗上市,还有多种联合疫苗处于临床试验阶段。近年,随着国内组分百日咳疫苗、Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒灭活疫苗研发的成功,以无细胞百白破疫苗为基础的联合疫苗得到了较大发展。本文就国内外已上市和临床试验中以无细胞百白破疫苗为基础联合疫苗的研究进展作一综述,以期为国内相关联合疫苗的研发提供思路。

    2023年05期 v.36 619-625页 [查看摘要][在线阅读][下载 868K]
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  • 受体活性调节蛋白的研究进展及其在疾病预防中的应用前景

    钱蕊;王礼群;姚于勤;方爱平;

    受体活性调节蛋白(receptor activity-modifying proteins,RAMPs)是Ⅰ型跨膜蛋白,是多种G蛋白偶联受体(Gprotein-coupled receptors,GPCRs)的活性调节蛋白。RAMPs与神经系统疾病、心血管疾病、肾功能、骨骼发育、肥胖等生理病理现象有关,对疾病预防具有重要意义,是多种疾病治疗的潜在靶点,且与疾病预后也密切相关。目前对可能调控RAMPs表达的蛋白的研究较少,本文着重综述了可能对RAMP3转录表达具有调控作用的甾醇调节元素结合因子-2(sterol regulatory element-binding factor-2,SREBF-2),并对RAMPs在生物学、病理学和药理学方面的研究进展作一综述,为RAMPs的进一步研究及其相关疾病的预防和检测提供参考。

    2023年05期 v.36 626-630页 [查看摘要][在线阅读][下载 842K]
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  • 我国细胞培养基产业发展机遇与挑战及对策建议

    陈琪;郭伟;杨喆;于振行;沈建忠;

    细胞培养基是生命健康领域必不可少的原材料之一。近年来,国产细胞培养基的性能和质量不断提高,国产厂商的市场占有率稳步提升,由2017年的19.2%提高至2021年的33.7%。但产业发展仍存在一定问题和短板,如技术和工艺积累亟待加强、产品质量有待提升、缺乏行业标准和规范等。本文基于文献研究、专题研讨、专家访谈,回顾了细胞培养基的发展历程,从我国细胞培养基产业发展基本情况、发展现状及趋势,深入分析、系统梳理产业发展面临的机遇与挑战,并针对性地提出相关对策建议。

    2023年05期 v.36 631-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 825K]
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专题报道

  • 国家疫苗批签发机构体系建设工作情况介绍及阶段性总结

    江征;贺鹏飞;陈保文;陈国庆;李长贵;徐苗;张辉;

    <正>批签发是指国家药品监管部门为保障疫苗等生物制品的安全有效,在每批产品上市前由指定药品检验机构对其进行审核、检验及签发的监督管理行为。它是国际上对疫苗监管的一种通行做法,被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为国家疫苗监管体系的关键职能之一,

    2023年05期 v.36 636-640页 [查看摘要][在线阅读][下载 810K]
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