中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

专家视角

  • 关于预防性人用疫苗企业标准物质的思考

    王一平;赵宗阁;吴星;梁争论;毛群颖;

    疫苗标准物质为疫苗质量控制、剂量确定和有效性评价的标尺。疫苗企业标准物质是各企业在疫苗生产、质控和评价过程中直接使用的工作标准物质,其量值的准确和稳定对保证疫苗产品的批间一致性、安全性和有效性发挥关键作用。本文在调研国内代表性疫苗企业标准物质管理现状的基础上,结合世界卫生组织(World Health Organization,WHO)和《中国药典》等相关指南和法规,提出我国预防性人用疫苗企业标准物质建立和应用时应考虑的要点,并建议制定疫苗企业标准物质指导原则,以规范该类标准物质的研制和应用。

    2023年12期 v.36 1409-1413+1418页 [查看摘要][在线阅读][下载 875K]
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疫苗研究

  • SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫血清抗体水平检测方法的比较

    吴小红;赵丹华;刘欣玉;杨立宏;李玉华;曹守春;

    目的 对3种SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫血清抗体水平的检测方法进行比较。方法 分别采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、假病毒中和试验(pseudo virus-based neutralization assay,PBNA)及微量细胞病变中和试验(micro-cytopathic effect neutralization test,MCPENT)检测SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫前及2针免疫后共120份血清(免疫前40份,免疫后80份)的抗体水平,分析3种检测方法的一致性和相关性。结果 3种方法检测120份血清的符合率均达90%以上,Kappa系数均> 0.7,P均<0.01。3种方法检测阳性血清抗体滴度结果的相关系数(r)为0.825~0.902,P均<0.01。结论 3种方法用于SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫血清抗体水平检测具有良好的一致性及相关性。

    2023年12期 v.36 1414-1418页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K]
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  • 中国百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组遗传分析

    李喆;吴燕;王丽婵;卫辰;廖平安;朱德武;瞿明霞;马霄;

    目的 对我国百日咳疫苗生产用菌株进行完成图基因组的遗传分析。方法 利用PacBio Sequel三代测序平台与Illumina二代测序平台相结合的方式,对百日咳疫苗生产用原始菌株进行完成图基因组测序,并进行基因组组分分析、基因功能注释以及比较基因组分析。同时对企业生产过程中不同代次菌株进行遗传稳定性分析。结果 获得了百日咳疫苗原始菌株及其生产过程不同代次菌株的完成图基因组,基因组长度4.1 Mb,GC含量68%,不同代次间基因组结构稳定;获得并分析了pt、pha、prn、fim2、fim3、act、tct、ompA、BrKA、rplD、BP1569等具有免疫原性或潜在免疫原性的基因,不同代次间基因未发生变异。结论 本研究获得了结构完整、背景清晰的百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组,为我国百日咳疫苗生产用菌种的质量控制提供了依据,同时也为百日咳分子流行病学的研究提供了参考。

    2023年12期 v.36 1419-1424+1429页 [查看摘要][在线阅读][下载 1040K]
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  • 氢氧化铝佐剂与甲型肝炎病毒抗原吸附条件的优化及吸附产物免疫原性评价

    王艺博;夏青娟;王昕雷;徐涵禹;白鸽;郑书君;徐艳玲;

    目的 优化氢氧化铝Al(OH)_3佐剂与甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原的吸附条件,并评价吸附产物的免疫原性。方法 选取缓冲盐终摩尔浓度(0.01、0.02和0.04 mol/L)、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、氯化钠(NaCl)终摩尔浓度(0.075、0.13、0.15、0.17、0.45、0.75、1.0 mol/L)、混合方式(稀释后混合、不稀释直接混合)及滴加顺序[HAV原液滴加至Al(OH)_3溶液、Al(OH)_3溶液滴加至HAV原液]进行单因素筛选。以Al(OH)_3吸附率为评价指标,通过正交试验对筛选出的因素进行优化。采用最优及次优组合条件制备的吸附产物经腹腔免疫NIH小鼠(雌雄各半),0.5 mL/只,每组10只,于免疫后28 d,经眼球或心脏采血,分离血清,HAV抗体定性检测试剂盒(ELISA法)检测HAV抗体水平,小鼠血清抗体阳转率评价吸附产物的免疫原性。结果 单因素筛选结果表明,缓冲盐终摩尔浓度、pH、NaCl终摩尔浓度对吸附效果可产生明显影响(F分别为6.582、14.007、8.612,P均<0.05),混合方式和滴加顺序对吸附效果无影响(t分别为-0.696和1.153,P均> 0.05),确定缓冲盐终摩尔浓度为0.01及0.02 mol/L,pH为5.5~7.0、NaCl终摩尔浓度为0.13~0.17 mol/L。正交试验确定影响吸附效果因素依次为:缓冲盐终摩尔浓度> pH> NaCl终摩尔浓度,最优组合为:pH 6.3+缓冲盐终摩尔浓度0.01 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.15 mol/L,次优组合为:pH 5.8+缓冲盐终摩尔浓度0.02 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.17 mol/L。最优及次优组合制备吸附产物免疫小鼠的血清抗体阳转率均为100%。结论 优化条件制备的吸附产物具有良好的免疫原性,本研究为甲肝灭活疫苗研究奠定了基础。

    2023年12期 v.36 1425-1429页 [查看摘要][在线阅读][下载 888K]
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  • 水痘-带状疱疹病毒高效价中和抗体的制备及应用

    邵宏秋;魏巍;黄晓娜;李景新;魏国良;张芸畅;修华谦;刘婷婷;王宇迪;孙博;卢井才;石亮;

    目的 制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)高效价特异性免疫血清,用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。方法 将高纯度重组gE糖蛋白分别与弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂及MF59佐剂组合,免疫雄性家兔,每组2只,免疫后第56天,每只最大量采血(心脏或颈动脉)制备血清,与VZV混合进行中和反应后,接种至长满单层MRC-5株人二倍体细胞的6孔板中,孵育7 d,计数空斑数,检测免疫血清的中和效价和中和病毒能力;选择高中和效价和高中和病毒能力血清进行水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查。结果 重组gE糖蛋白的多种组合免疫家兔后制备的免疫血清均具有中和活性,其中重组gE糖蛋白与弗氏佐剂组合免疫后制备的血清中和效价最高,为1:512,中和病毒能力可达240 000 PFU/mL;制备的免疫血清用于VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查,结果均符合要求。结论 重组gE糖蛋白可用于VZV高效价中和抗体制备,制备的高效价中和抗体适用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。

    2023年12期 v.36 1430-1433+1441页 [查看摘要][在线阅读][下载 884K]
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基础研究

  • 麻疹减毒活疫苗Hu191株对4T1乳腺癌细胞上皮-间质转化、增殖及迁移的影响

    姚梦玮;李玉迁;徐庆胜;方小菡;魏洪;迟茜文;刘蕊;

    目的 探讨麻疹减毒活疫苗Hu191株(MV-Hu191)对4T1乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、增殖及迁移的影响。方法 采用CCK-8法和克隆形成试验检测MV-Hu191对4T1细胞增殖的影响;细胞划痕试验检测MV-Hu191对4T1细胞迁移的影响;Western blot法检测MV-Hu191对4T1细胞EMT通路蛋白(MMP-2、MMP-9、E-cadherin)表达的影响。建立雌性BALB/c小鼠4T1荷瘤小鼠模型,将模型小鼠分为对照组(PBS)、MV-Hu191(1×106TCID50)组和紫杉醇组(15 mg/kg),每组10只,每2 d瘤内注射药物100μL,连续给药5次,28 d后,观察MV-Hu191对小鼠生存期、体内成瘤性及转移的影响;HE染色观察肺组织及肿瘤组织病理特征;免疫组化染色观察肿瘤组织EMT通路蛋白(MMP-2、MMP-9、E-cadherin)表达情况。结果 体外试验结果表明,与对照组相比,MV-Hu191能抑制4T1细胞增殖及迁移(F分别为2.811和13.535,P分别为0.001和0.002),下调4T1细胞MMP-2和MMP-9表达(F分别为45.433和9.744,P分别为0.011和0.038),上调E-cadherin表达(F=7.001,P=0.032)。体内试验结果表明,与对照组相比,MV-Hu191能显著延长荷瘤小鼠生存时间(F=18.079,P=0.000),并降低肿瘤质量(F=8.301,P=0.003)和肺结节转移数量(F=33.792,P=0.000);MV-Hu191组肿瘤组织间隙较小,细胞呈圆形,肺泡轮廓清晰可见;MV-Hu191组肿瘤组织MMP-2和MMP-9表达显著降低(F分别为6.705和9.047,P分别为0.028和0.023),E-cadherin表达显著上升(F=3.468,P=0.039)。结论 MV-Hu191能显著抑制4T1乳腺癌细胞增殖及迁移,拮抗4T1荷瘤小鼠成瘤性和肺转移,延长小鼠生存期,其抗乳腺癌作用的可能机制是调节EMT通路蛋白表达。

    2023年12期 v.36 1434-1441页 [查看摘要][在线阅读][下载 1184K]
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  • miR-130b-5p靶向E26转录因子1对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制

    陈选才;符浩;唐亚纯;唐昕;祝乐喜;李雪峰;朱子贵;

    目的 探讨miR-130b-5p靶向E26转录因子1(E26 transformation specific-1,ETS1)对前列腺癌(prostatic cancer,PCa)细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR法测定PCa组织及其癌旁组织、PCa细胞(LNCap、PC-3、DU-145)及正常前列腺细胞(RPWE-1)中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平,Western blot法检测PCa细胞中ETS1蛋白的表达水平。生物信息学、双荧光素酶活性测定法、qRT-PCR法及Western blot法预测和验证miR-130b-5p与ETS1的靶向关系。将PC-3细胞分为对照(不作任何处理)、mimic(转染miR-130b-5p模拟物)、mimic+ETS1组(转染miR-130b-5p模拟物+pcDNA-ETS1),采用克隆形成试验和CCK-8法分别检测细胞增殖情况及活力,划痕试验和Transwell小室试验分别检测细胞迁移及侵袭情况,Western blot法检测侵袭相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果 与癌旁组织比较,PCa组织中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平明显下降(t=12.450,P <0.001);与RPWE-1细胞比较,LNCap、PC-3和DU-145细胞中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平均明显下降(t分别为4.463、7.103和5.741,P分别为0.001 2、<0.001和<0.001),ETS1蛋白表达水平显著升高(t分别为4.850、9.325和7.723,P分别为0.008、<0.001和0.002)。miR-130-5p可以靶向负调控ETS1的表达。与对照组比较,mimic组细胞克隆率、细胞活力、细胞划痕愈合率均明显降低(t分别为11.370、10.640、15.660,P均<0.001),侵袭细胞数明显减少(t=10.160,P <0.001),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9和波形蛋白(vimentin)表达水平显著下调(t分别为15.120、9.992和12.600,P分别为<0.001、<0.001和0.002),钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著升高(t=6.928,P <0.001),磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)磷酸化水平均显著降低(t分别为7.746、8.041和11.510,P分别为0.002、0.002、<0.001);与mimic组比较,mimic+ETS1组细胞克隆率、细胞活力、细胞划痕愈合率均明显升高(t分别为6.988、6.642、6.660,P均<0.001),侵袭细胞数明显增多(t=4.082,P=0.002),MMP-2、MMP-9和vimentin蛋白表达水平显著上调(t分别为10.410、6.754和8.521,P分别为0.002、0.003、0.002),E-cadherin表达水平显著下调(t=4.648,P <0.01),PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(t分别为4.850、4.323和10.840,P分别为0.008、0.008和<0.001)。结论 miR-130b-5p可靶向ETS1抑制PC-3细胞的增殖、迁移及侵袭,可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路实现的。

    2023年12期 v.36 1442-1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 1165K]
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  • 表达狂犬病病毒G蛋白嵌合型重组水疱性口炎病毒的构建及鉴定

    赵婷婷;任秀秀;王轶男;李实实;黄秋芳;王晓杰;张晓焕;卫江波;苏文浩;

    目的 以水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)为载体,构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)G蛋白的嵌合型重组VSV。方法 将VSV骨架质粒G基因替换为狂犬病疫苗CTN-1株G基因,与分别表达T7聚合酶及VSV N、P、L蛋白的辅助质粒共转染293T细胞,获得重组病毒。通过RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测RV G基因和G蛋白表达。将重组病毒在Vero细胞上传代培养,检测不同代次病毒滴度并绘制病毒生长曲线。结果 成功获得了重组病毒VSV-RVG,RT-PCR结果表明重组病毒基因组中成功插入了RV G基因,免疫荧光法和Western blot可检测到RV G蛋白的表达。重组病毒连续传代5次,病毒滴度稳定在7.5~8.5 lgTCID50/mL之间。结论 成功构建了表达RV G蛋白的嵌合型重组VSV,重组病毒具有良好的遗传稳定性,为以VSV为载体的反向遗传学技术平台的构建奠定了基础。

    2023年12期 v.36 1450-1454页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K]
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  • SARS-CoV-2不同毒株在K18-hACE2小鼠体内的毒力比较

    张秋;王如玉;范慧芬;孙凯丽;刘元浪;夏云翔;徐秀丽;卢佳;李新国;

    目的 通过滴鼻途径探讨严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)不同毒株(Prototype、Delta、Beta、Omicron BA.1)对表达人血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的转基因小鼠K18-hACE2的感染效果。方法 每种毒株设置不同梯度的攻毒剂量,采用滴鼻方式进行攻毒,每日监测小鼠体质量及存活情况,观察周期变异株Beta组为6 d,其他3组为14 d。利用IBM SPSS Statistics26分析软件计算半数致死量(LD_(50)),通过检测肺、脑、鼻甲组织病毒核酸载量及肺组织病变损伤情况对SARS-CoV-2不同毒株的毒力进行比较。结果 Beta株毒力最强、致死性最高,最低剂量(1 CCID_(50))100%致死,LD_(50)<1 CCID_(50);Delta、Prototype和Omicron BA. 1株的LD_(50)分别为0.52、0.60和52.92 CCID_(50)。不同毒株感染后各剂量组小鼠的肺组织病毒核酸拷贝数随着攻毒剂量的增加而呈整体递增趋势,死亡小鼠的脑组织病毒拷贝数可达108~1011copies/mL,感染不同毒株各剂量组小鼠的肺组织病理出现不同程度的损伤。结论 SARS-CoV-2不同毒株在K18-hACE2小鼠体内的毒力Beta> Delta> Prototype> Omicron BA.1。

    2023年12期 v.36 1455-1464页 [查看摘要][在线阅读][下载 1443K]
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  • 囊状幼虫病病毒衣壳蛋白肝素结合基序鉴定及其抗感染作用分析

    沈克飞;曹兰;徐登峰;许国洋;杨金龙;罗文华;

    目的 鉴定囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)药物结合口袋蛋白2(drug-binding pocket protein 2,Dbpp2)的肝素结合基序,并测定肝素结合基序及其衍生肽的抗SBV感染活性。方法 采用在线软件对Dbpp2进行二级结构预测和同源建模,以搜索肝素结合基序,利用肝素琼脂糖珠检测SBV、Dbpp2及其肝素结合基序突变体与肝素的结合能力、肝素结合基序抑制Dbpp2结合肝素的能力,并检测肝素结合基序及其衍生肽对SBV感染的中华蜜蜂(Apis cerana cerana)幼虫的治疗效果。结果 SBV和Dbpp2可结合肝素,Dbpp2 C-端暴露在表面的富含碱性氨基酸的柔性环(KPANRPRR)为肝素结合基序,该基序可抑制Dbpp2结合肝素。KPANRPRR及其衍生肽KPAARPRR、KPRN-RPRR、KPRARPRR、KPRWRPRR、KPRWRPRRW均具有降低SBV感染导致幼虫死亡率的作用,其中,KPRARPRR的治疗效果最佳。结论 本研究为阐明SBV-氨基萄聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相互作用奠定了基础,也为基于相互作用开发治疗SBV感染的多肽提供了参考。

    2023年12期 v.36 1465-1470+1475页 [查看摘要][在线阅读][下载 985K]
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  • 肾素前体和成熟肾素的原核表达及纯化

    张超;汪静;李小鹏;张江涛;张传宝;

    目的 原核表达及纯化肾素前体(renin,REN)和成熟肾素(REN-340),并检测其浓度。方法 根据NCBI中检索获得的人REN基因序列(5972),经E.coli密码子优化后,人工合成REN及REN-340基因片段,克隆至载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET。转化至感受态E.coli BL21(DE3),于不同诱导温度(20、25、30、37℃)及不同终浓度(0.1、0.2、0.4、0.5 mmol/L)IPTG条件下进行诱导表达。采用最佳诱导条件诱导表达重组REN和REN-340,经Ni-NTA镍离子亲和层析后,ELISA法检测其浓度。结果 经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET构建正确。重组REN和REN-340的最佳诱导温度分别为37和20℃,最佳IPTG终浓度分别为0.1和0.2 mmol/L。纯化的重组REN和RNE-340浓度分别为9 148.21和15 115.31 m IU/m L。结论 制备的重组REN和REN-340蛋白浓度较高,且生产周期较短,有望用于制备室间质量评价(external quality assessment,EQA)的候选质控品和标准物质。

    2023年12期 v.36 1471-1475页 [查看摘要][在线阅读][下载 883K]
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诊断制剂

  • 用于SARS-CoV-2疫苗免疫后血浆筛选的不同ELISA试剂盒适用性评估

    周志军;王倩;彭焱;岳胜兰;熊伟;纪德铭;冯璐;李娟;李策生;胡勇;李陶敬;

    目的 通过比较3个厂家4种SARS-CoV-2 ELISA-IgG及中和抗体检测试剂盒筛选免疫后血浆的收浆合格率并比较操作便利性,确定最佳原料血浆筛选用试剂盒。方法 以从现有SARS-CoV-2疫苗免疫后血浆中筛选的不同ELISA稀释倍数档位单份血浆为原料,用不同厂家SARS-CoV-2 ELISA-IgG及中和抗体检测试剂盒进行检测,按照各厂家效价分档位进行混合。混合血浆进行假病毒中和试验,根据中和抗体效价确定不同试剂盒的收浆标准,并计算各自收浆合格率;根据收浆标准确定单份血浆筛选的稀释方式,比较操作便利性;综合判断试剂盒的适用性。结果以内控参考品B2为收浆标准,厂家B ELISA-IgG抗体检测试剂盒在1 108份WT> 16的血浆中收浆合格率为82.1%,高于现用厂家A ELISA-IgG抗体检测试剂盒(59.8%)。以厂家B中和抗体检测试剂盒的50 IU/mL为收浆标准,该试剂盒在387份WT16~64的血浆中收浆合格率为66.4%,高于厂家A ELISA-IgG抗体检测试剂盒的收浆合格率(42.1%)。以厂家C中和抗体检测试剂盒100 IU/mL为收浆标准,该试剂盒在536份WT16~64的血浆中收浆合格率为42.5%,低于厂家A ELISA-IgG抗体检测试剂盒的收浆合格率(50.2%)。厂家C中和抗体检测试剂盒操作步骤最多,反应时间最长;厂家B ELISA-IgG抗体检测试剂盒反应时间最短,对于WT16~64的样品无需孔外稀释,而厂家A需孔外稀释。4种试剂盒的收浆合格率差异主要发生在WT16~64的样品中,其收浆合格率在该区间排序依次为:厂家B ELISA-IgG抗体检测试剂盒>厂家B中和抗体检测试剂盒>厂家A ELISA-IgG抗体检测试剂盒>厂家C中和抗体检测试剂盒;操作便利性排序为:厂家B ELISA-IgG抗体检测试剂盒>厂家B中和抗体检测试剂盒>厂家A ELISAIgG抗体检测试剂盒>厂家C中和抗体检测试剂盒。结论 从收浆合格率及操作便利性综合考量试剂盒的适用性,以厂家B ELISA-IgG抗体检测试剂盒最佳。

    2023年12期 v.36 1476-1482+1490页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K]
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治疗制剂

  • 重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9单克隆抗体质控方法的建立

    武刚;于传飞;俞小娟;李萌;杨雅岚;崔永霏;郭璐韵;王兰;

    目的 建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法。方法 根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肽指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量。结果 PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)%、(46.44±0.35)%、(4.28±0.04)%“;重链+轻链”峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)%、(4.11±0.76)%、(0.85±0.20)%,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)%、(2.85±0.08)%、(2.88±0.15)%;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)%、(0.75±0.01)%、(0.96±0.02)%;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)%、(34.69±0.41)%、(9.09±0.14)%、(12.61±0.50)%;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)%;聚山梨酯20含量为(0.012±0.000 3)%。结论本研究建立了PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控。

    2023年12期 v.36 1483-1490页 [查看摘要][在线阅读][下载 1016K]
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技术方法

  • 基于ELISA与NMR方法的降钙素基因相关肽抗体的抗原表位鉴定

    路晶晶;余飞;孙百平;于晓萍;刘万卉;

    目的 建立基于间接ELISA法的肽扫描与核磁共振光谱(nuclear magnetic resonance,NMR)技术相结合的方法,鉴定降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)抗体的抗原表位。方法 以CGRP各截短片段为包被抗原,间接ELISA法测定2种抗体(新CGRP抗体和对照抗体)与各抗原的结合活性,根据四参数曲线的EC50值分析线性抗原表位。NMR技术采集CGRP的二维氢-氮相关(2D1H-15N HSQC)谱,利用抗体对核磁信号的扰动,分析抗体与CGRP上精氨酸的结合。液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrum,LC-MS)和NMR技术检测精氨酸专属性修饰,通过修饰速率的比对,获得CGRP上2个精氨酸的信号指认。结果 2种抗体与CGRP(1-37)、CGRP(19-37)、CGRP(25-37)均存在量效关系,且符合四参数方程,但与CGRP(1-18)、CGRP(19-24)、无C-端酰胺的CGRP(25-37)均无量效关系;确定2种抗体的线性抗原表位均位于CGRP的C-末端。CGRP与对照抗体结合后,2D1H-15N HSQC谱中精氨酸ε-NH的信号消失;CGRP与新抗体结合后,精氨酸信号依然存在;确定抗原上的精氨酸R11和R18可与对照抗体结合,但不与新抗体结合。通过修饰速率的排序比对获得精氨酸ε-NH信号归属,即信号A对应R11,信号B对应R18。结论 本研究采用ELISA法与NMR技术相结合鉴定了新CGRP抗体及对照抗体的线性表位和构象表位,为设计新的靶向CGRP抗体药物提供了理论依据。

    2023年12期 v.36 1491-1496+1502页 [查看摘要][在线阅读][下载 991K]
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  • 单克隆接种/成像设备VIPS在CHO工程细胞株单克隆筛选中的应用

    谢涛;彭秀娥;孙青;张朝;陈文烨;张宽;

    目的 探讨应用单克隆接种/成像设备VIPS(Verified In-situ Plate Seeding)建立CHO工程细胞株单克隆筛选的方法。方法 采用VIPS将稳定转染目的基因的细胞池Cell pool 1分别于含不同组合(共18种组合,编号1~18)及体积(100和200μL/孔)培养基的96孔板中进行单细胞接种,并进行单克隆源性追踪拍照,根据图像结果,计算单克隆接种率、克隆形成率、单克隆增殖速率,评价单克隆源性图像效果。通过稳定转染目的基因的细胞池Cell pool 2、Cell pool 3、Cell pool 4验证该方法的适用性。结果 最适单克隆培养基为MediumⅡ,培养基体积为100μL/孔。最佳工艺条件下,Cell pool 1的单克隆接种率为80%,克隆形成率为83%,增殖速率较快,单克隆源性图像清晰。Cell pool 2、Cell pool 3、Cell pool 4在最佳工艺条件下,单克隆接种率均值为78%,克隆形成率均值为67%,增殖速率略有差异,细胞分裂过程图像均清晰。结论 采用VIPS建立的CHO工程细胞株单克隆筛选方法可提高CHO工程细胞株的克隆形成率,且能够提供充分的单克隆源性证明。

    2023年12期 v.36 1497-1502页 [查看摘要][在线阅读][下载 994K]
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  • 制药企业CNC区域微生物数据库的建立及微生物种群分析

    张弛;张建玲;薛梅;律苗;李泷;李勤勤;

    目的 建立制药企业CNC(controlled not classified)区域(即受控但未分级区域)微生物数据库,与洁净区微生物分布进行关联分析,实现对洁净区尤其是核心无菌操作区域的良好微生物控制,提升制药企业的无菌保障水平。方法 以1个制药企业生产车间的CNC区域为研究对象,按照人员、物料进入洁净区的路线,逐个对CNC区域进行浮游菌、沉降菌、人员和环境表面微生物取样。微生物经培养、纯化后,采用16S rRNA测序法进行菌种鉴别。利用Microbiomeanalyst在线分析软件进行数据分析。结果 制药企业CNC区域微生物数量和种类丰富,共收集到4 080株微生物,分布在47个属内。革兰阳性菌占比达84.4%,主要为葡萄球菌属、微球菌属、微杆菌属;革兰阴性菌占比达15.6%,不动杆菌属是分布数量最大的革兰阴性菌。以Alpha多样性指数表征微生物种群丰富度,浮游菌、沉降菌的微生物种群丰富度最高,环境表面次之,人员表面微生物种群丰富度最低。人员帽兜和胸腹部微生物数量相对较少,脚底和手部微生物数量较多。人员表面微生物种类相对较少,且葡萄球菌占据绝对优势。CNC区域微生物分布与同生产车间B、C级洁净区微生物分布进行关联分析,B、C级洁净区收集到的微生物绝大部分包含在CNC区域微生物种群中。B、C级洁净区与CNC区域类似,均以葡萄球菌属、微球菌属为主。不动杆菌属在B、C级洁净区的分布比例较CNC区域有所下降。结论 建立了制药企业CNC区域微生物数据库,确定了易进入洁净区的微生物种群,为洁净区的良好微生物控制提供了可靠的技术支持。

    2023年12期 v.36 1503-1507+1514页 [查看摘要][在线阅读][下载 915K]
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综述

  • 诱导多能干细胞在儿童遗传性疾病治疗中的应用进展

    谢欣;尹晓娟;

    体细胞重编程技术在现代生物学领域发展迅速,通过体细胞重编程获得的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)不仅能自我更新,还具有多向分化潜能,在疾病建模及再生医学等方面均发挥重要作用。本文就基因重编程技术、iPSCs的疾病模型及其在儿童遗传性疾病中的应用进展作一综述,以期为iPSCs在各种遗传性疾病机制及治疗方法研究中的应用提供参考。

    2023年12期 v.36 1508-1514页 [查看摘要][在线阅读][下载 917K]
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  • 不同微载体细胞培养技术在生物制品领域的应用

    王晓勋;张中洋;

    单位面积细胞的生产力决定了细胞培养工艺放大潜力,微载体系统的规模化应用可为贴壁依赖型动物细胞的高产培养提供极大的表面积,适合高效生产工艺的开发和优化放大。近年,基于微载体的培养工艺广泛用于多种类型动物细胞培养,可生产多种重要的生物制品,如疫苗、酶类、激素、抗体、干扰素及其他生物制剂等。本文就国内外微载体细胞培养技术的研究进展、新型微载体和传统微载体的比较及其应用作一综述,以期为新型微载体大规模细胞培养技术的深入研究及应用提供参考。

    2023年12期 v.36 1515-1521+1529页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
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  • 胰高血糖素样肽-1受体激动剂及其类似物在帕金森病中神经保护作用机制的研究进展

    李雪峰;潘婷;陈新华;吴大龙;

    帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是好发于中老年人的第二大神经退行性疾病,目前一线治疗药物以左旋多巴为主,但患者长期服用疗效欠佳,甚至出现“开关”现象和直立性低血压等不良反应。胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonist,GLP-1RA)及其类似物是一种内源性肽激素,释放至血液中可穿越血脑屏障进入中枢神经系统发挥神经保护作用。研究表明,GLP-1RA可改善PD的运动障碍并恢复多巴胺能神经元活性。但其起效机制尚未完全明确,本文归纳总结了GLP-1RA及其类似物改善PD运动障碍、恢复多巴胺能神经元活性的作用机制,从减少神经炎症、抑制氧化应激、抑制细胞凋亡、调节线粒体形态、增加神经元突起、增强自噬、调节肠道菌群稳态等方面作一综述,为PD机制的研究和GLP-1RA相关新药研发提供新思路。

    2023年12期 v.36 1522-1529页 [查看摘要][在线阅读][下载 922K]
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  • 卡介苗的研究进展

    曹慧;王珣;

    结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的慢性、消耗性传染病,给人类健康造成严重威胁。卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)是由减毒牛型Mtb制成的活菌苗,是唯一批准使用的预防TB疫苗。BCG能够有效预防对婴幼儿具有高致死性的结核性脑膜炎和粟粒性肺结核。但对于儿童和成年人群,BCG提供的保护力有限,且保护效果随着时间的延长而下降。目前针对BCG的改良措施包括改变免疫途径和接种程序,以及研发新的抗TB疫苗。BCG主要用于预防TB以及治疗膀胱癌,同时也有其他适应证。本文从BCG的发展史、改良措施和适应证等方面对BCG最新研究进展作一综述。

    2023年12期 v.36 1530-1537页 [查看摘要][在线阅读][下载 915K]
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