疫苗研究

• Hib荚膜多糖在疫苗制备周期中的结构稳定性

  张腾腾;秦春君;尹珊珊;刘翠;刘建凯;尹健;佟巍;

  目的 评价b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖的基本结构聚核糖基核糖醇磷酸酯（polyribosylribitol phosphate,PRP）在Hib结合疫苗制备过程中的稳定性。方法 采用核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance spectroscopy,NMR）技术对制备的Hib精制多糖、多糖衍生物、多糖蛋白结合物进行结构解析。结果 制备的Hib精制多糖、多糖衍生物、多糖蛋白结合物的各项检测结果均符合《中国药典》三部（2020版）相关标准要求，且NMR谱图均未发生明显变化。结论 Hib结合疫苗主要抗原荚膜多糖的基本结构PRP在疫苗制备周期中未发生变化。

  2024年02期 v.37 129-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 1202K]
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• 重组腺病毒5型-诺如病毒GⅡ.4型-VP1病毒样颗粒的表达及鉴定

  汪梦俊;孙楠;裴捷;刘睿伦;邹文琪;熊宇;王文辉;于代冠;申硕;

  目的 采用293T细胞表达重组腺病毒5型（recombinant adenovirus 5,rAd5）-诺如病毒（Norovirus,NoV）GⅡ.4型-VP1病毒样颗粒（virus-like particle,VLP），并进行鉴定。方法 将重组腺病毒质粒pAd5-eGFP及pAd5-NoV-GⅡ.4-VP1分别转染293T细胞，拯救获得重组腺病毒rAd5-eGFP和rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1。rAd5-eGFP在293T细胞上连续传代，验证其载体功能。将rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1在293T细胞上进行传代，NoV-GⅡ.4-VP1经表达及纯化后，自组装形成NoV-GⅡ.4-VLP，并进行Western blot、ELISA检测及电镜观察。结果 镜下观察各代rAd5-eGFP均可见绿色荧光，且亮度随代次增加而增强。各代rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1收获液中均可见NoV-GⅡ.4-VP1蛋白表达，相对分子质量约58 900。NoV-GⅡ.4-VLP可与兔抗NoV-GⅡ.4-VP1血清发生特异性结合，具有与天然的NoV病毒颗粒相似构象，可有效识别志愿者唾液样本中的NoV受体；镜下观察，其形态完整，呈球状，直径为43.5～58.3 nm，颗粒表面有少数突起，可能为VP1自组装时暴露于颗粒表面的P结构域。结论 表达的重组腺病毒NoV-GⅡ.4-VLP具有完整的VLP结构和良好的特异性，有望用于NoV腺病毒载体疫苗的相关研究。

  2024年02期 v.37 138-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 904K]
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基础研究

• 骨髓间充质干细胞来源的微颗粒对心肌肥厚的作用及其机制

  曹茜倩;李俊虎;崔欣欣;郭晨梦;庞敏;刘键灿;白晓洁;封启龙;

  目的 探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）来源的微颗粒（microparticles,MPs）对心肌肥厚的作用及其机制。方法 对间充质干细胞（MSCs）进行成骨成脂诱导分化，经分离纯化后，透射电镜观察形态特征，流式细胞术鉴定MPs表面抗原。利用异丙肾上腺素（isoprenaline,ISO）诱发建立大鼠心肌肥厚模型，超声心动图检测大鼠心脏结构及功能后，进行心脏及分离的左心室的各项指标检测。将急性分离的大鼠单个心肌细胞分为对照（Control）、心肌细胞肥大（ISO）、MPs、MPs上清液（Supernatant）组，qRT-PCR法检测心肌细胞心房利钠肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、脑利钠肽（B-type natriuretic peptide,BNP）mRNA表达量；ELISA法检测心肌细胞钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calmodulin-dependent protein kinaseⅡ，CaMKⅡ）、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（phosphorylated calmodulin-dependent protein kinaseⅡ，p-CaMKⅡ）表达量；全细胞膜片钳记录各组大鼠单个心肌细胞L-型钙电流（LCa-L）。结果 MSCs成骨分化骨结节经茜素红染色后变成红色，成脂分化脂滴经油红O染色后变成红色；透射电镜下可见MPs膜结构完整，轮廓清晰，直径约200 nm;MPs表面标记物CD29和CD90表达阳性率分别为（98.24±0.82）%和（97.69±1.83）%。与Control组相比，ISO组大鼠左心室舒张末期内径（left ventricular end diastolic dimension,LVEDD）明显减少（t=5.065,P <0.05），室间隔舒张末期厚度（interventricular septum end-diastolic dimension,IVSd）、左心室后壁舒张末期厚度（left ventricular posterior wall dimension,LVPWd）、心重-体重比（heart weight to body weight ratio,HW/BW）、心重-胫骨长度比（heart weight to tibial length ratio,HW/Tibia）、左心重-胫骨长度比（left heart weight to tibial length ratio,LV/Tibia）明显升高（t分别为4.013、2.368、4.392、5.043、6.120,P均<0.05），建模成功；ISO组大鼠肥大心肌细胞ANP、BNP mRNA表达量均较Control组明显升高（t分别为25.120、18.261,P均<0.01）；经48μg/mL MPs孵育48 h后的MPs组ANP、BNP mRNA表达量较ISO组显著下降（t分别为12.110、3.526,P均<0.05）;ISO组CaMKⅡ和p-CaMKⅡ蛋白表达水平较Control组显著升高（t分别为3.278、4.181,P均<0.05）,MPs组p-CaMKⅡ蛋白表达水平显著下降（t=5.420,P <0.05）;ISO组钙电流密度较Control组明显增高（t=15.261,P <0.01）,MPs组较ISO组明显降低（t=6.216,P <0.05）。结论 MSC-MPs可显著抑制ISO诱导的大鼠心肌细胞肥大，这一效应与其下调心肌细胞CaMKⅡ、抑制L-型钙通道有关。

  2024年02期 v.37 143-150页 [查看摘要][在线阅读][下载 1026K]
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• 人白细胞介素-26慢病毒表达质粒与基因敲除质粒的构建及其在HEK293T细胞中的活性验证

  周海金;吴珊;刘丽媛;蒋丹;许涛;蓝华滔;舒纬童;徐广贤;

  目的 构建人白细胞介素（interleukin,IL）-26慢病毒表达质粒与基因敲除质粒，为研究IL-26基因在细胞信号通路及细胞自噬中的功能奠定基础。方法 利用RT-PCR从人外周血单个核细胞中扩增IL-26基因序列，克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP真核表达载体中，构建过表达质粒；并根据IL-26外显子序列设计4个敲除靶点Exon1sgRNA1、Exon1sgRNA2、Exon3sgRNA1、Exon3sgRNA2，利用CRISPR/Cas9技术构建至lentiCRISPRv2载体中，构建基因敲除质粒。将过表达质粒和基因敲除质粒分别瞬时转染至HEK293T细胞，利用RT-qPCR和Western blot验证IL-26 mRNA和蛋白的表达情况。并对IL-26进行氨基酸序列分析、结构预测及亚细胞定位观察。结果 通过酶切、测序鉴定及生物信息学分析显示，IL-26全长516 bp，编码171个氨基酸。IL-26过表达质粒转染的HEK293T细胞与正常对照组相比，IL-26 mRNA水平升高了656.789倍，蛋白质水平升高了1.978倍，差异均有统计学意义（t分别为17.976和7.859,P分别<0.000 1和<0.001）。4个敲除靶点Exon1sgRNA1、Exon1sgRNA2、Exon3sgRNA1、Exon3sgRNA2质粒转染至HEK293T细胞中后，IL-26的表达水平分别下降了0.930、0.980、0.523 3和0.316 9倍，其中Exon3-sgRNA2质粒能够显著下调IL-26的表达（t=7.440,P <0.001）。IL-26蛋白的前22个氨基酸存在信号肽结构，且具有一定的跨膜功能，IL-26存在于细胞质中。结论 成功构建了IL-26过表达和基因敲除质粒，为后续IL-26功能的研究奠定了基础。

  2024年02期 v.37 151-159页 [查看摘要][在线阅读][下载 1382K]
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• 卵泡液外泌体miRNA对颗粒细胞糖酵解途径介导多囊卵巢综合征患者卵泡发育的影响及其作用机制

  曹建平;张家宁;单会荃;刘宣;苏杰;崔奎青;

  目的 评价卵泡液（follicular fluid,FF）外泌体miRNA对颗粒细胞（granulosa cells,GCs）糖酵解途径介导的多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）患者卵泡发育的影响，并探讨其作用机制。方法 招募3名PCOS不孕患者和3名非PCOS不孕患者，测定2组患者在促排卵前的基线激素水平，通过短效长方案促排卵并穿刺取双侧FF，超速离心法收集外泌体，采用透射电镜进行鉴定。Trizol法提取外泌体总RNA，构建文库，进行miRNA测序及质控处理后，与参考基因组GRCh38进行比对。利用聚类Profiler R包进行差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）的GO注释分析和KEGG通路分析。应用Omnipath数据库对miRNA进行互作分析。随机抽取16个miRNA，通过qPCR检测，验证miRNA测序结果的准确性。结果 与非PCOS组比较，PCOS组的黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、抗缪勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH）、睾酮（testosterone）、窦卵泡数显著高于非PCOS组（t=2.479～9.163,P均<0.05）。2组FF外泌体边缘均清晰，中央淡染的杯口状囊泡，直径为100～150 nm，结构完整，外泌体浓度约为8×1010particles/mL。miRNA测序共检测到928个miRNA，与非PCOS组比较，POCS组外泌体中共筛选出59个差异miRNA(DEmiRNA)，其中31个上调，28个下调，且qPCR法检测的基因表达差异趋势与miRNA测序结果高度相似。在PCOS患者FF外泌体中，通过miRNA调控mRNA，可显著改变GCs糖酵解效率和细胞凋亡状态。PKM、PFKL、HK2是miRNA调节GCs糖酵解的关键靶基因，SLC2A1是miRNA调节GCs凋亡的关键靶基因。结论 PCOS患者FF外泌体miRNA可使GCs糖酵解减弱，并加速其凋亡，从而减少ATP及乳酸的产生，导致卵泡发育障碍。

  2024年02期 v.37 160-165+171页 [查看摘要][在线阅读][下载 1341K]
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• 伪狂犬病病毒gH糖蛋白在哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性

  喻晓航;刘一宁;丁彦彬;罗烨;方琪;郑金;余兴龙;

  目的 在哺乳动物细胞中表达伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）gH糖蛋白，并检测其免疫原性。方法PCR扩增PRV-XiangA株gH基因片段，插入哺乳动物细胞表达载体pIRES-neo3中，构建重组表达质粒pIRES-gH，将其转染至HEK-293F细胞中，悬浮培养5 d。取细胞培养上清，进行Western blot鉴定后，经镍离子层析柱纯化。将纯化的gH糖蛋白作为免疫抗原与ISA 201 VG佐剂乳化后免疫8只雌性ICR小鼠，对照组8只小鼠免疫等量佐剂。初次免疫后5和8周各加强免疫1次，并分别于初次免疫后4、7、10周采血，检测小鼠血清特异性抗体及中和抗体效价；第3次采血2 d后，使用PRV-XiangA毒株（1.5×104TCID50）对小鼠进行滴鼻攻毒，每日观察小鼠发病及死亡情况。结果 重组表达质粒pIRES-gH经测序鉴定构建正确。gH糖蛋白成功在哺乳动物细胞中表达并进行了糖基化修饰，且反应原性良好，在100 mL培养体积下可纯化到约625μg蛋白。免疫3次后，小鼠能产生高水平的特异性抗体，且具有中和PRV的作用，其中和抗体效价最高可达1∶256。攻毒试验中对照组小鼠全部发病并死亡；而gH免疫组有一半小鼠未发病，存活率为50%。结论 在哺乳动物细胞中成功表达了PRV gH糖蛋白，并首次证实其具有免疫保护作用，为gH糖蛋白的进一步研究及应用提供了实验依据，也为PRV亚单位疫苗的研发提供了新的思路。

  2024年02期 v.37 166-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 871K]
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• 鹅粪便中副干酪乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌的分离及鉴定

  高炳南;岳学青;王秋菊;曹雨涵;任雨龙;孙愉;魏笑;张昊;

  目的 分离北方白鹅粪便中的副干酪乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌，并进行鉴定。方法 收集30只52周龄北方白鹅的粪便，通过特异性培养基培养，分离获得副干酪乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌菌株，分别编号为S00834-8和IS00439-2，并进行16S DNA测序鉴定。将获得的两2株菌株于不同培养时间（0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、36和48 h）、温度（34、36、37、38、40℃）、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0)条件下培养，通过紫外可见分光光度计测定A600，评价菌株的生长特性。同时检测菌株的耐酸耐胆盐特性（pH为2.0、2.5、3.0、3.5、7.0，胆盐浓度为0、0.3%、0.5%、1.0%、1.5%）及对抗生素的耐受性。结果 获得的S00834-8和IS00439-2菌株分别为副干酪乳酸杆菌亚种耐受性H和枯草芽孢杆菌KA9。S00834-8菌株最佳培养条件为：于37℃，用pH为6.0的培养基培养12 h；具有良好的耐胆汁和耐胃酸的能力；对哌拉西林、诺氟沙星、阿米卡星、庆大霉素和四环素中度敏感，对左氟沙星、链霉素、氯霉素敏感。IS00439-2菌株最佳培养条件为：于36℃，用pH为7.5的培养基培养8 h；具有良好的耐胆汁和耐胃酸的能力；对左氟沙星和四环素中度敏感，对哌拉西林、诺氟沙星、链霉素和氯霉素敏感。结论 鹅源副干酪乳酸杆菌亚种耐受性H和枯草芽孢杆菌KA9具有良好的耐酸、耐胆盐特性，有望成为鹅源微生态制剂的候选菌株。

  2024年02期 v.37 172-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 994K]
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诊断制剂

• 5个种属血白蛋白多克隆抗体的制备及其效果评价

  张建敏;周长明;李潇;胡宇驰;王铁松;赵璇;

  目的 制备人、牛、羊、猪、马血白蛋白多克隆抗体，并评价其用于鉴定人血白蛋白（human serum albumin,HSA）的效果。方法 采用生物信息学技术和人工合成多肽法分别制备人、牛、羊、猪、马血白蛋白特异性多肽，高效液相色谱法鉴定多肽纯度后，再分别与钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）进行偶联，制备多肽抗原。将5个种属多肽抗原经背部皮下多点免疫雄性新西兰大白兔，2只/种，获得的抗血清经Protein A亲和层析柱纯化，即为多克隆抗体。采用ELISA及Western blot法分别测定多克隆抗体效价及特异性，并使用制备的5个种属血白蛋白多克隆抗体鉴定HSA制品。结果 人工合成的人、牛、羊、猪、马血白蛋白多肽纯度达91%以上，获得相应的多克隆抗体效价均为1∶160 000，可与相应抗原发生特异性结合，且可有效鉴别HSA制品。结论 制备的人、牛、羊、猪、马血白蛋白多克隆抗体具有良好的特异性，且制备过程简单快速，适合大量生产，为HSA快速鉴别试剂盒的研发奠定了基础。

  2024年02期 v.37 179-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K]
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治疗制剂

• 谷氨酰胺酶1抑制剂对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

  王晓;张聪聪;张燕红;洪诗瑶;杜杰;

  目的 探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)特异性抑制剂BPTES[bis-2-（5-phenylacetamido-1,3,4-thiadiazol-2-yl）ethyl sulfide]对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型肝纤维化的影响。方法 经雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射橄榄油（对照组）、10%CCl4(10μL/g，模型组)或10%CCl4(10μL/g)+BPTES(10 mg/kg，处理组)，每组10只，每周注射2次，共4周，构建肝纤维化模型。采用天狼猩红染色法观察小鼠肝脏组织中胶原沉积情况；qRT-PCR和免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏组织中肌动蛋白2(actin alpha 2,Acta2)、Ⅰ型胶原a1(collagen typeⅠalpha1,Col1a1)、GLS1基因及GLS1蛋白表达水平。结果 与对照组小鼠相比，模型组小鼠肝脏组织整体增大，表面不光滑，呈颗粒状，同时肝脏质量与胫骨长度比显著增加（t=2.979,P <0.05）；与对照组相比，模型组小鼠肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著增加（t=7.661,P <0.01）,Acta2和Col1a1基因相对表达量均显著增加（t分别为4.335和5.319,P均<0.01）,GLS1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加（t分别为5.319和9.725,P <0.01）；与模型组小鼠相比，BPTES处理组小鼠肝脏质量减轻，肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著减少（t=7.427,P <0.01）,Atca2和Col1a1基因相对表达量均显著降低（t分别为3.713和2.628,P均<0.05）。结论 抑制GLS1活性可显著改善CCl4诱导的肝纤维化程度，为肝纤维化治疗提供了新思路。

  2024年02期 v.37 183-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
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• SRT1720对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

  邹巧玲;袁秋林;宋银宏;

  目的 评价沉默信息调节因子2-相关酶1(silent information regulator 2-related enzymes1,SIRT1)激活剂（SRT1720）对对乙酰氨基酚（acetaminophen,APAP）诱导小鼠肝损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法 将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照、SRT1720、APAP和APAP+SRT1720组，每组10只。SRT1720和APAP+SRT1720组小鼠经灌胃给予SRT1720(30 mg/kg体质量)，对照和APAP组经灌胃给予等体积生理盐水，均每天给药1次，连续给药5 d；第6天，APAP和APAP+SRT1720组小鼠分别经腹腔注射APAP(325 mg/kg体质量)，对照和SRT1720组小鼠经腹腔注射等体积生理盐水。24 h后，摘除眼球取外周全血，分离血清，采用相应试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）及门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）水平；将小鼠经断颈处死，无菌取肝脏组织，HE染色法观察肝组织病理改变，RT-qPCR法检测PERK-eIF2α-CHOP信号通路相关分子GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP基因mRNA转录水平，Western blot法检测上述基因相应蛋白及Caspase12蛋白的相对表达水平。结果与对照组比较，APAP组小鼠血清中ALT和AST水平均明显上升（t分别为55.21和34.29,P均<0.01）；肝组织中可见明显大片状肝细胞坏死，肝小叶结构发生显著改变，部分区域肝细胞发生肿胀变形较严重；GRP78、PERK、eIF2α、ATF4和CHOP基因的mRNA转录及蛋白相对表达水平均明显增高（t=9.85～33.89,P均<0.05）;Caspase12蛋白相对表达水平显著升高（t=11.78,P <0.01）。与APAP组比较，APAP+SRT1720组小鼠血清中ALT和AST水平均明显降低（t分别为42.92和18.02,P均<0.01）；肝细胞损伤程度明显减轻，发生肿胀变形的细胞也显著减少；GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP基因的mRNA转录和蛋白相对表达水平均明显下降（t=6.19～22.43,P均<0.05）;Caspase12蛋白表达水平未发生明显下降（t=0.34,P> 0.05）。结论 SRT1720可改善APAP诱导小鼠发生的肝损伤，可能是通过抑制内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）中PERK-eIF2α-CHOP信号通路实现的。

  2024年02期 v.37 188-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 1021K]
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临床研究

• DTaP-IPV-Hib-HepB六联疫苗安全性及免疫原性的Meta分析

  刘静文;贾征;罗兴献;傅书勇;杨悦;邢花;

  目的 比较接种无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌（结合）-重组乙型肝炎（DTaP-IPV-HibHepB）六联疫苗与DTaP-IPV-Hib五联疫苗加HepB单苗或DTaP-IPV-HepB五联疫苗加Hib单苗后的安全性和免疫原性差异，为六联疫苗在我国上市使用提供参考。方法 检索国内外发表的有关DTaP-IPV-Hib-HepB六联疫苗与无细胞百白破（DTaP）三联疫苗、Hib单苗、IPV单苗、HepB单苗的随机对照临床试验（randomized controlled trial,RCT），采用Meta分析方法，利用Revman 5.4.1软件评价六联疫苗的安全性及免疫原性。结果 共纳入7篇文献，共8个RCT,3429名受试者。安全性Meta分析显示，除接种部位硬结和哭闹外，接种六联疫苗与同时接种五联疫苗加单苗后的注射部位以及全身不良反应发生率差异均无统计学意义（P> 0.05）；免疫原性Meta分析显示，接种六联疫苗的各项抗体指标与同时接种五联疫苗/单苗的差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 DTaP-IPV-Hib-HepB六联疫苗在基础免疫中的安全性和免疫原性与对照疫苗相当，可应用于婴幼儿群体预防相关疾病。但受纳入研究数量和质量限制，尚有待进一步开展更大样本、多中心、高质量的RCT加以验证。

  2024年02期 v.37 195-201页 [查看摘要][在线阅读][下载 883K]
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• 浦东新区16～45岁常住女性HPV疫苗相关KAP及其影响因素分析

  王卫平;刘文敏;杨丹丹;揭俊钦;杜莉;周萍;文京海;

  目的 分析上海市浦东新区16～45岁常住女性对人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）疫苗的相关知识、态度、行为（knowledge-attitude-practice,KAP）及其影响因素。方法 在浦东新区36个街镇中随机选取6个作为调查现场，随机抽样选取16～45周岁常住女性，排除阅读或理解障碍者、有精神障碍者，通过自填式问卷共收集到1 022份有效问卷，了解浦东新区常住女性对HPV疫苗的KAP现状，通过单因素分析和结构方程模型分析HPV疫苗的KAP之间的联系及其影响因素。结果 浦东新区16～45岁常住女性对HPV疫苗的总体知晓率较高，单因素分析显示，婚姻状况、文化程度、就业状况及家庭年收入与HPV疫苗的知晓水平有关（χ~2分别为12.832、17.636、16.770和20.030,P均<0.05）；年龄、婚姻状况、就业情况、子女情况与HPV疫苗的接种水平有关（χ~2分别为12.382、25.777、8.830和20.138,P均<0.05）;HPV疫苗健康教育、HPV及HPV疫苗知识得分影响HPV疫苗的接种情况（χ~2分别为97.561和68.969,P <0.001）；研究对象对于宫颈癌知识的掌握受HPV感染相关知识的正向影响（γ_(11)=0.756,P <0.001）。宫颈癌知识的掌握程度不仅会正向影响研究对象对HPV疫苗功效的态度（β_(21)=0.557,P <0.001），也会直接影响研究对象HPV疫苗的接种行为，表现为促进作用（β_(31)=0.274,P=0.004）。研究对象对HPV疫苗功效表示赞同的态度与HPV疫苗实际接种行为呈正向作用（β_(32)=0.175,P=0.016）。结论 浦东新区16～45岁常住女性接种HPV疫苗的意愿积极，但实际接种率较低，建议增强HPV疫苗宣传的同时增强宫颈癌及HPV感染相关知识的教育，并考虑将适龄男性纳入疫苗接种范围的必要性。

  2024年02期 v.37 202-208+214页 [查看摘要][在线阅读][下载 929K]
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技术方法

• 组分百日咳抗原中间品中内毒素含量动态显色定量检测方法的建立及验证

  赵明;刘婷;马昱;吴丽洁;付慧;李世慧;

  目的 建立组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的动态显色定量检测方法，并对方法进行验证，以期更好地对组分百白破疫苗进行质量控制。方法 建立动态显色法（美洲鲎试剂）检测百日咳各抗原中间品脱毒后的内毒素含量，对方法的线性、专属性、准确性、重复性、中间精密度进行验证，并对动态显色法定量检测结果与凝胶法检测结果进行对比。结果 动态显色法线性相关系数的绝对值（|r|）大于0.99；最大有效稀释倍数下中间品的干扰试验回收率在50%～200%之间，脱毒后百日咳类毒素（pertussis toxin,PT）稀释至10、100、1 000倍，丝状血凝素（filamentous hemagglutinin,FHA）稀释至3 000、5 000、10 000倍，百日咳黏附素（pertussis adhesin,PRN）稀释至50、75、100倍对试验均无干扰作用；PT、FHA和PRN的准确性验证回收率分别为125%、110%和99%，重复性验证变异系数（CV）分别为7.21%、8.31%和5.84%，中间精密度验证CV分别为6.04%、16.29%和12.23%。动态显色法检测3批百日咳抗原中间品细菌内毒素含量与凝胶法检测结果一致，均小于脱毒后百日咳抗原中间品中细菌内毒素限值。结论 建立的动态显色法具有良好的线性、专属性、准确性及精密性，检测结果准确，可用于脱毒后组分百日咳抗原中间品中内毒素含量的检测。

  2024年02期 v.37 209-214页 [查看摘要][在线阅读][下载 826K]
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• 重组人白细胞介素-1受体拮抗剂免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性检测方法的建立及验证

  彭炳淮;刘景会;刘玉林;孙中涛;孙基伟;梁冠桥;俞露;

  目的 建立用于检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra）免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性的方法，并进行验证。方法 分别用3、20、100 mg/kg的rhIL-1Ra注射液经皮下免疫SD大鼠，10只/组，雌雄各半，每天给药2次，间隔至少4 h，连续给药13周，于给药期及恢复期经大鼠颈静脉采血，分离血清，ELISA法检测血清抗体效价，Protein A层析柱纯化经ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性的血清样本。以D10G4·1细胞生物学活性试验为基础建立中和抗体活性检测方法，并验证方法的专属性、灵敏度及精密性。采用建立的方法检测ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性血清的中和抗体活性。结果 随着给药次数的增加，各剂量组大鼠血清抗体滴度逐渐增强，至恢复期时仍有抗体存在，且滴度仍较高。兔抗rhIL-1Ra单抗对rIL-1Ra有明显的中和作用，兔抗rIFN-2b单抗与rIL-1Ra无剂量效应关系；该方法的灵敏度为171.93μg/mL；精密性验证CV均≤20%。ELISA筛选为阳性抗体血清对rhIL-1Ra注射液均可产生中和效应，与ELISA法检测结果相符。结论 本研究建立了用于检测rhIL-1Ra免疫大鼠血清中和抗体活性的方法，具有良好的特异性、专属性及较高的灵敏度，可用于rhIL-1Ra重复给药动物血清中和抗体活性的检测。

  2024年02期 v.37 215-220页 [查看摘要][在线阅读][下载 858K]
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• 生物制剂工艺特异性残留宿主蛋白ELISA检测方法的建立及验证

  田易晓;王新月;窦向雅;韩翠翠;高珂;邵东燕;段苏杨;白岳丘;赵雯;黄庆生;

  目的 建立基因重组生物制剂中工艺特异性大肠埃希菌残留蛋白双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法 以大肠埃希菌表达胰高血糖素样肽（glucagon-like peptide,GLP）的生产与纯化工艺为特定工艺模型，采用同一工艺用于空载大肠埃希菌（不表达重组蛋白的正常大肠埃希菌）残留蛋白的截取。将获得的残留蛋白作为免疫原分别免疫1只雌性新西兰白兔和6只雌性昆明小鼠，以兔免疫血清纯化IgG抗体为包被抗体，鼠免疫血清为第二夹心抗体，抗鼠IgG-HRP为酶标二抗，建立工艺特异性大肠埃希菌残留蛋白双抗体夹心ELISA方法。对建立的方法进行特异性、准确性、精密性验证，并确定方法的检测限。同时采用建立的方法和市售大肠埃希菌宿主蛋白残留检测试剂盒对纯化的GLP制剂进行残留蛋白定量测定。结果 对已知浓度的工艺特异性残留蛋白进行系列梯度稀释后，建立的ELISA方法检测的灵敏度可达338 pg/mL；该方法检测CHO和酵母细胞裂解蛋白无交叉反应，检测低、中、高3个浓度样品的回收率均在80%～120%范围内，检测低、中、高浓度空载大肠埃希菌截留液标准品的试验内和试验间CV均<15%。针对GLP制剂中的残留蛋白，与建立的方法检出的GLP制剂中残留蛋白总量相比，约有62%的残留蛋白未被市售非工艺特异性ELISA试剂盒检出，这些残留蛋白应为本工艺特异的残留蛋白。结论 建立的双抗体夹心ELISA法检测工艺特异性大肠埃希菌残留蛋白灵敏度高，特异性强，准确性和精密性良好，可满足残留蛋白在生物制剂中低于0.01%～0.1%标准的检测要求。

  2024年02期 v.37 221-226页 [查看摘要][在线阅读][下载 848K]
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综述

• Ⅰ型人免疫缺陷病毒调控蛋白顺式转录激活因子的功能及其与疾病的相关性

  李远航;陈睿鑫;杜娟;

  获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome,AIDS），又称艾滋病，一直是全球范围内公共卫生关注的重大传染病之一。Ⅰ型人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）是导致AIDS的病原体，即使目前广泛采用的高效抗逆转录病毒疗法（鸡尾酒疗法）可有效抑制HIV-1的感染和复制，感染者依然会罹患其他疾病，如HIV-1相关的神经认知紊乱症（HIV-associated neurocognitive disorder,HAND）。本文主要探讨HIV-1中重要的调控蛋白顺式转录激活因子（trans-activator of transcription,Tat）的功能，以及其与HIV-1复制及HAND的相关性，以明确研发靶向Tat蛋白的抗AIDS药物的重要性。

  2024年02期 v.37 227-233页 [查看摘要][在线阅读][下载 919K]
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• 壳聚糖及季铵化壳聚糖作为疫苗佐剂的研究进展

  马淑敏;项婷婷;沃恩康;

  佐剂是当前诸多新型疫苗发挥保护作用的关键因素。佐剂的添加既可减少抗原使用量，又可增加抗原的免疫原性，激发机体强有力的免疫反应。壳聚糖作为天然多糖甲壳素脱除部分乙酰基的产物，具有黏附性、渗透性、生物相容性等特性，其有作为疫苗佐剂的优势，被广泛研究和应用。壳聚糖作为新型佐剂不仅可协助诱导细胞免疫和体液免疫，也可激活黏膜免疫。本文就壳聚糖及季铵化壳聚糖作为疫苗佐剂的最新研究进展以及相关机制作一综述。

  2024年02期 v.37 234-238页 [查看摘要][在线阅读][下载 810K]
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• 骨肉瘤细胞生长的自分泌和旁分泌调节的研究进展

  杜少文;刘翔;叶凯山;

  骨肉瘤（osteosarcoma,OS）为骨组织中最常见的恶性肿瘤之一，其具体发生机制目前尚未完全明确。研究证明，OS细胞在肿瘤发展阶段表达不同的细胞因子（cytokine,CK）及其受体，通过自分泌和旁分泌作用使其能够自主生长并赋予转移能力。参与作用的CK主要包括胰岛素样生长因子-1、转化生长因子-β、趋化因子5、白细胞介素-8，它们可调节肿瘤微环境，有利于肿瘤的生长、侵袭和转移。本文对CK的作用、作用方式及其与OS细胞的生物学相关性作一综述，以期为OS的临床治疗提供有效的新标志物和治疗靶点。

  2024年02期 v.37 239-244页 [查看摘要][在线阅读][下载 822K]
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• 乳铁蛋白在临床领域应用的研究进展

  马小梅;彭乔烽;张海霞;马忠仁;

  乳铁蛋白（lactoferrin,LF）作为一类功能广泛的铁结合型天然转铁糖蛋白，成为近年来国内外研究热点。LF广泛应用在治疗及预防等领域，具有多种生物活性，本文就LF近年来在免疫调节、抗肿瘤、调节发胖机制、抗菌、抗阿兹海默症（Alzheimer disease,AD）及骨再生机制等方面临床作用的研究作一综述，为后续LF的临床应用及研究提供方向。

  2024年02期 v.37 245-250页 [查看摘要][在线阅读][下载 826K]
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• 单克隆抗体治疗炎性肠病耐药的研究进展

  顾家博;韦平;王俊;金黑鹰;

  炎性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）是由免疫介导的一种复杂性炎性疾病，该病的治疗以维持疾病缓解和预防复发为目标。随着对炎性肠病发生发展分子机制的深入研究，发现了许多相关的靶点分子，相应靶点的单克隆抗体（简称单抗）已用于治疗该病，但治疗时产生的耐药现象严重影响治疗效果。本文对英夫利昔等单抗治疗炎性肠病耐药作一综述，以期了解其可能的机理，探索有效的治疗和预防措施。

  2024年02期 v.37 251-256页 [查看摘要][在线阅读][下载 834K]
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