- 刘金花;董关木;安祺;曹守春;孔艳;
目的在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)Sabin2株结构蛋白VP1。方法从Sabin2疫苗原液中RT-PCR扩增PV结构蛋白VP1基因,克隆入pFastBac1质粒,转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-VP1。将第2代rBac-VP1感染sf9细胞,间接免疫荧光法检测VP1蛋白的表达,并优化感染条件。结果重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1转化子可扩增出3 203 bp的目的片段;第2代rBac-VP1的滴度为6×107 pfu/ml,其感染的sf9细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,以不同MOI的rBac-VP1感染sf9细胞,VP1蛋白表达量差别不大,而在96 h内,随着感染时间的延长,VP1蛋白的表达量逐渐升高。结论在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了PV Sabin2株结构蛋白VP1,为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。
2011年06期 v.24 625-628页 [查看摘要][在线阅读][下载 268K] [下载次数：230 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：743 ] - 莫雪梅;孙晗笑;贾忠伟;李秀英;张光;
目的在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性。方法通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用。结果重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P﹤0.05),其IC50值为1.35 ng/ml。结论已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性。
2011年06期 v.24 629-633页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：790 ] - 吴燕;刘北忠;王翀;朱丹;王春光;金丹婷;高艳军;黎亮;
目的探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制。方法将pGene-Sil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化。结果抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调。结论抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡。
2011年06期 v.24 634-638页 [查看摘要][在线阅读][下载 548K] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：728 ] - 王景龙;屈海龙;杨延玲;孙春辉;王秀然;郎需龙;李晓艳;卜昭阳;王兴龙;
目的构建羊布氏菌超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)基因重组酿酒酵母菌株,并进行鉴定。方法 PCR扩增羊布氏菌16M株SOD基因,与psos载体连接,构建重组表达质粒psos-SOD,转化酿酒酵母菌cdc25H,并进行PCR鉴定、表型验证、自激活及定位情况检验。结果重组真核表达质粒psos-SOD经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR可扩增出525 bp的SOD基因条带,其表型正常,无自激活宿主菌的作用,表达蛋白定位正确。结论已成功构建了羊布氏菌SOD基因重组酿酒酵母菌株,为研究布氏菌致病的分子机制奠定了基础。
2011年06期 v.24 639-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 236K] [下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：721 ] - 张玲玲;刘增长;肖培林;苏立;殷跃辉;
目的研究携带TGF-βRⅡ胞外区基因的重组腺病毒pAd-sTGF-βRⅡ对大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后心室重塑的影响,并探讨其可能的机制。方法结扎SD大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠MI模型,将模型大鼠随机分为MI组(生理盐水)、pAd-sTGF-βRⅡ组(pAd-sTGF-βRⅡ病毒上清液)、空载体组(pAdTrack),并另设假手术组。4周后,取冰冻切片,荧光显微镜下观察sTGF-βRⅡ在大鼠心肌组织中的表达;HE染色观察心肌组织结构;天狼猩红-饱和苦味酸染色法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;RT-PCR法检测凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA的表达。结果与MI组比较,pAd-sTGF-βRⅡ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平均明显降低(P<0.01),α-SMA阳性细胞数亦明显减少,bcl-2基因mRNA表达水平增加(P<0.01)。与假手术组比较,pAd-sTGF-βRⅡ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平明显升高(P<0.01),bcl-2基因mRNA的表达水平无明显差异(P>0.05)。结论重组腺病毒pAd-sTGF-βRⅡ干预可改善大鼠MI后心室重塑,其机制可能是通过抑制TGF-β介导的心肌纤维化和心肌细胞凋亡实现的。
2011年06期 v.24 643-648页 [查看摘要][在线阅读][下载 499K] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：720 ] - 李鹏;马艳娇;赵娜;袁婷;宫鹏涛;李建华;欧阳红生;张西臣;
目的构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达。方法将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达。结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAXⅠ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAXⅠ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1。结论已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异。
2011年06期 v.24 649-652页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：729 ] - 张丹;杨春;何永林;靳志栋;佘茜;徐蕾;张鹏;
目的构建GalR2基因真核表达质粒,并在HeLa细胞中表达。方法从C57BL∕6J小鼠海马组织中提取总RNA,RT-PCR法扩增GalR2基因,克隆至pEGFP-C1载体中,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2。将重组表达质粒转染至HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位,RT-PCR和Western blot分别检测GalR2基因的转录及表达。结果从C57BL∕6J小鼠海马组织扩增出1 116 bp的GalR2基因;重组表达质粒pEGFP-GalR2经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;转染细胞融合基因的表达产物定位于细胞核,GalR2基因在mRNA及蛋白水平上均有表达。结论已成功构建了GalR2基因真核表达质粒pEGFP-GalR2,并在HeLa细胞中成功表达了GalR2蛋白,为进一步探讨GalR2的生物学活性奠定了基础,也为寻找抗抑郁药物的靶点提供了新的思路。
2011年06期 v.24 653-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：758 ] - 邓欣;Sven Klussmann;李亘松;聂志伟;宋阳;张国利;朱平;
目的探讨Spiegelmer NOX 1255对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素40(Luteinizing hormone-releasing hor-mone-Pseudomonas aeruginosa exotoxin 40,LHRH-PE40)与HeLa细胞上促黄体激素释放激素(LHRH)受体结合的抑制作用。方法分别将25μmol/L的LHRH-PE40、PEA和PE40与HeLa细胞共孵育24 h后,观察细胞的形态学变化;用Spiegelmer NOX1255特异性结合LHRH-PE40上的LHRH,光学显微镜观察Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40的抑制作用,ELISA检测Spiege-lmer NOX 1255对LHRH-PE40与LHRH受体结合的抑制作用。结果 LHRH-PE40和PEA可直接杀伤HeLa细胞,而PE40不能对HeLa细胞产生毒性作用;Spiegelmer NOX 1255能够结合LHRH-PE40中的LHRH,抑制LHRH-PE40与LHRH受体的结合及PE40的毒性作用。结论 LHRH-PE40对HeLa细胞的毒性作用是通过细胞表面的LHRH受体产生的;Spiegelmer NOX 1255可阻断LHRH-PE40与HeLa细胞表面LHRH受体的结合。
2011年06期 v.24 657-659+664页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K] [下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：815 ] - 隆玲;邓华瑜;韩铭;陈黎;姜蓉;
目的探讨Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响及其机制。方法应用Hedgehog信号转导通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)处理MDA-MB-231细胞,Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞体外侵袭和转移能力;明胶酶谱实验检测细胞MMP-9和MMP-2的活性;Western blot法检测细胞P-c-Jun和MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达。结果经Cyclopamine处理后,MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力明显下降;MMP-9的活性降低;P-c-Jun和MMP-9蛋白表达降低;Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达水平下降。结论 MDA-MB-231细胞存在Hedgehog信号转导通路的激活;活化的Hedgehog信号转导通路可通过上调c-jun和MMP-9的表达,促进肿瘤细胞的侵袭转移。
2011年06期 v.24 660-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 496K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：835 ] - 赵朴;赵坤;贾贝贝;王三虎;刘兴友;姚四新;郑玉姝;
目的克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础。方法从 H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,扩增的NS1基因与国内外多株SIV NS1基因序列同源性达98%以上,表达的重组蛋白相对分子质量约为27 000,能与SIV感染猪阳性血清发生特异性反应。结论已成功克隆了H3N2 SIV河南分离株NS1基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达了重组NS1蛋白,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定了基础。
2011年06期 v.24 665-667页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：748 ] - 彭阳;吴小翎;连海峰;陈鹏飞;芦曦;
目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。
2011年06期 v.24 668-671页 [查看摘要][在线阅读][下载 478K] [下载次数：248 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：729 ] - 刘志强;王栋;陈禹保;
目的原核表达并纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)黏附蛋白P1羧基末端。方法提取MP FH型基因组DNA,以其为模板,PCR扩增P1羧基末端基因,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定。结果重组表达质粒pET-32a-MP-P1C经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约55 900,以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的47%;纯化的重组蛋白纯度达94%以上,浓度为3.77 mg/ml,可与支原体肺炎患者血清特异性反应,经3 000倍稀释后,仍可与支原体肺炎患者血清发生阳性反应。结论原核表达并纯化了MP黏附蛋白P1羧基末端,为进一步研究MP的致病机制及研发诊断试剂和基因疫苗奠定了基础。
2011年06期 v.24 672-675页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：750 ] - 邱红梅;张颖;周岐新;赖舒;
目的探讨白芨多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSPS)对小鼠免疫功能的调节作用。方法提取白芨多糖并测定其含量。通过腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg.d),连续3 d,建立免疫功能低下小鼠模型,观察灌服不同剂量白芨多糖溶液对免疫功能低下小鼠碳廓清试验的影响;采用MTT法测定白芨多糖对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)和脂多糖(Lipopoly-saccharide,LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果提取的3批白芨多糖中的多糖含量分别为93.490%、92.280%和92.629%。在碳廓清试验中,与模型组相比,500 mg/(kg.d)白芨多糖能显著提高免疫抑制小鼠的吞噬指数,其作用与100 mg/(kg.d)的左旋咪唑大致相当。淋巴细胞增殖试验中,1、3、10μg/ml的白芨多糖均可显著提升Con A诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的能力,白芨多糖终浓度为3μg/ml时,提升作用最为显著;3μg/ml白芨多糖可显著提升LPS诱导的小鼠B淋巴细胞增殖的能力。结论白芨多糖对小鼠的非特异性免疫和特异性免疫反应均有促进作用。
2011年06期 v.24 676-678页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K] [下载次数：1041 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：79 ] |[阅读次数：1685 ] - 巴彩凤;谢建中;宋立先;
目的建立猪附红细胞体感染BALB/c小鼠模型,检测小鼠血清IgG和IgE水平的变化。方法将未感染猪附红细胞体的BALB/c小鼠随机分为3组:A组注射猪附红细胞体阳性血液,B组注射猪附红细胞体阴性血液,C组注射生理盐水。采用镜检和PCR法检测各组小鼠猪附红细胞体感染情况;ELISA法检测各组小鼠血清IgG和IgE水平。结果镜检观察A组小鼠血液中可见猪附红细胞体。PCR结果显示,A组小鼠血液中可扩增出602 bp的特异性条带。在接种后第7和19天,3组小鼠血清IgG水平差异无统计学意义(P>0.05),至第10、13和16天,A组小鼠血清IgG水平明显高于B组和C组(P<0.01),B组明显高于C组(P<0.01);在接种后第10、13和22天,3组小鼠血清IgE水平差异无统计学意义(P>0.05),至第16和19天,A组小鼠血清IgE水平明显高于B组和C组(P<0.01),B组明显高于C组(P<0.01)。结论已成功建立猪附红细胞体感染小鼠模型,IgG和IgE在小鼠抗猪附红细胞体免疫应答中发挥重要作用。
2011年06期 v.24 679-681页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：774 ] - 景志杰;刘田福;师锐赞;
目的构建靶向人原癌基因c-fos的短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)重组真核表达质粒,并进行鉴定。方法构建靶向人c-fos基因的shRNA重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos,转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中c-fos基因mRNA的表达。结果重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos经PCR、双酶切及测序证明构建正确;重组表达质粒在mRNA水平明显抑制了MCF-7细胞c-fos基因的表达(P<0.05)。结论已成功构建了人c-fos基因shRNA重组表达质粒,为深入研究c-fos基因在肿瘤发生、发展过程中的作用提供了技术手段。
2011年06期 v.24 682-684页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：708 ] - 王全华;陈加飞;承欧梅;吴芹;蒋青松;
目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)/一氧化氮(Ni-tric oxide,NO)信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngiotensinⅣ,AngⅣ)诱导血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法体外培养大鼠VSMCs,将细胞分为6组:对照组(只加培养基)、AngⅣ组、AngⅣ+非诺贝特(Fenofibrate,FF)组、AngⅣ+FF+MK 886组、AngⅣ+L-arg组和AngⅣ+L-arg+L-NAME组,MTT法检测细胞的增殖;BCA法测定细胞总蛋白含量;Real-time PCR法检测细胞中PPARα和eNOS基因mRNA的表达;Western blot法检测细胞中PPARα蛋白的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养上清中一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,eNOS)活性和NO浓度。结果 0.1 nmol/L AngⅣ可诱导VSMCs增殖,增加细胞总蛋白含量,PPARαmRNA及蛋白表达明显降低,eNOS基因mRNA表达减少,细胞上清中NOS活性及NO浓度降低;FF和L-arg可逆转AngⅣ的上述作用,并被相应的阻断剂(MK 886和L-NAME)抑制。结论 AngⅣ诱导VSMCs的增殖作用可能与PPARα/NO信号通路受损有关。
2011年06期 v.24 685-688页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：792 ]
- 孙成金;王健;崔春青;郭鹏;陈祥鹏;张振龙;
目的建立重组靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺。方法优化EGF-E4orf4工程菌二级种子培养时间,按5%的比例接种于20 L发酵培养基,设定培养阶段温度为30℃,诱导表达阶段温度为28℃,在发酵过程中通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施使DO维持在20%～35%,采用三步发酵法进行发酵,优化诱导pH值及诱导时间,并在已优化的工艺条件下,稳定发酵3批。结果确定二级种子的培养时间为15 h,最适诱导pH值为6.0,最适诱导时间为48 h;中试发酵3批,菌体A600均值达(327.67±17.96),菌体湿重均值达(308.33±9.07)g/L,EGF-E4orf4表达量均值为(200.00±5.57)mg/L。结论已初步建立了重组EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺,为EGF-E4orf4的产业化奠定了基础。
2011年06期 v.24 711-714页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K] [下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：927 ] - 谢奎;雷云;黄鹂;王一婷;熊盛;
目的优化高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞的条件,提高蛋白表达量。方法采用Tubespin生物反应器在不同转速(160、180和200 r/min)和培养体积(5、10、20和35 ml)条件下振荡悬浮培养CHO细胞,测定不同条件下的气体交换速率、细胞密度、细胞活力及蛋白相对表达量,优化细胞培养条件。在最佳培养条件下,向培养基中分别添加30、60和90 mmol/L氯化钠,观察不同浓度氯化钠对细胞密度、细胞活力、摄氧率、溶氧及重组蛋白表达的影响。结果 Tubespin具有良好的气体交换速率,可满足高密度细胞培养的需要;经优化,细胞培养最佳条件为:摇床转速180 r/min,培养体积10 ml,此时细胞生长密度高,较快进入稳定期进行重组蛋白的表达。细胞培养72 h时向培养基中添加60 mmol/L氯化钠,能使重组蛋白的表达量提高1倍。结论优化了Tubespin培养CHO细胞的条件和氯化钠诱导浓度,提高了重组蛋白的产量,为大规模发酵生产奠定了基础。
2011年06期 v.24 715-719页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] [下载次数：410 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：936 ] - 郭常伟;唐勇;向军俭;邹军辉;杨红宇;
目的制备重金属铜离子单克隆抗体,并建立间接竞争ELISA检测方法。方法利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA将Cu(Ⅱ)与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫抗原Cu(Ⅱ)-DTPA-BSA和检测抗原Cu(Ⅱ)-DTPA-OVA,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合筛选稳定分泌抗重金属Cu(Ⅱ)-DTPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水,测定抗体效价,鉴定抗体亚型,并检测其特异性;建立间接竞争ELISA检测方法,并与ICP-AES检测结果进行比较。结果共筛选出3株稳定分泌抗重金属Cu(Ⅱ)-DTPA单克隆抗体的杂交瘤细胞,选择其中的4C2E7株制备腹水。腹水抗体效价为1×106,抗体亚类为IgG1,该抗体除与Co(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)和Hg(Ⅱ)存在17.5%、8.75%和1.46%的交叉反应外,与其他7种金属离子的交叉反应率均较低。该法最低检测限为2.0 ng/ml,与ICP-AES法检测结果的总符合率超过94%。结论已成功制备了重金属铜离子单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA检测方法。
2011年06期 v.24 720-723页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K] [下载次数：468 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：924 ] - 朱虎;何长川;张宗举;张帅帅;褚庆环;
目的利用响应面法对桑黄菌液体发酵培养基进行优化,提高胞外多糖产量。方法应用Plackett-Burman设计和响应面法,对桑黄菌液体发酵培养基成分及其含量进行优化。用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(蛋白胨、酵母粉和磷酸二氢钾)与多糖产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行3次验证实验。结果通过快速"登高法"对3个显著因素进行寻优,培养基中3因素最佳浓度为:蛋白胨14.72 g/L、酵母粉11.04 g/L、磷酸二氢钾1.472 g/L,胞外多糖产量最高可达7.04 g/L。3次验证实验所测得的多糖产量分别为6.92、6.86和7.04 g/L,平均值为6.94 g/L,与预测结果基本一致。结论优化的桑黄菌发酵培养基可显著提高胞外多糖产量。
2011年06期 v.24 724-727页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K] [下载次数：449 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：744 ] - 华承伟;于江傲;谢凤珍;
目的采用响应面法对红色链霉菌(Streptomyces erythreus)发酵产红霉素培养基进行优化。方法利用Design-Expert 8的Min Run Res IV多因子两水平设计,对发酵培养基的有机碳源和氮源的组成进行因素的效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利用响应面分析得到优化培养基组成。结果淀粉、糊精、豆饼粉和玉米浆因素对红霉素产量有显著影响,其最佳组成为:淀粉5.24%,糊精1.43%,豆饼粉4.56%,玉米浆1.47%。结论利用响应面法已成功优化了红霉素发酵培养基组成的碳源和氮源,摇瓶发酵产红霉素化学效价为6 192 U/ml。
2011年06期 v.24 728-731+736页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K] [下载次数：888 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：591 ]