- 胡迪超;张爱华;潘勇兵;端义坤;孙可芳;张银川;杨晓明;
目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。
2011年09期 v.24 997-1002页 [查看摘要][在线阅读][下载 368K] [下载次数：284 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：804 ] - 姜自军;楼觉人;
目的研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58晚期蛋白1(L1)羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能。方法分别构建全长HPV58L1基因和缺失羧基端核定位信号的HPV58L1基因与绿色荧光蛋白(Green fluores-cent protein,GFP)基因融合的重组表达质粒,在毕赤酵母中表达相应蛋白,用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在毕赤酵母细胞中的分布情况。结果融合基因表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的融合蛋白没有聚集在毕赤酵母细胞核中,而是随机地分布在毕赤酵母细胞细胞核和细胞质中。结论 HPV58 L1蛋白的羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中不发挥主动入核的功能。
2011年09期 v.24 1003-1006+1012页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：755 ] - 付金奇;郭建强;姚立红;陈爱珺;刘晓宇;张乐萃;张智清;
目的利用昆虫杆状病毒系统表达甲型流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白。方法 PCR扩增去除信号肽的甲型H1N1(A/PR/8/34)流感病毒HA基因,与pFastBacdual载体(pFBd)连接,构建转移载体pFBd-HA,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒rBacmid-HA。rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒rBac-HA。采用噬斑形成法检测病毒滴度,PCR法检测重组杆状病毒基因组HA基因,间接免疫荧光法、Western blot法和ELISA法检测HA蛋白的表达。结果穿梭质粒rBacmid-HA经PCR鉴定构建正确;第3代rBac-HA的滴度为3×107 pfu/ml;感染rBac-HA的sf9细胞经PCR扩增可见4 216 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western blot鉴定与鼠抗甲型流感病毒HA(H1)单抗和鸡抗流感病毒(California株)多抗发生特异性反应,ELISA检测与鼠抗流感病毒(PR8株)多抗特异性结合的能力强于与鸡抗流感病毒(California株)多抗结合的能力。结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了甲型流感病毒HA蛋白。
2011年09期 v.24 1007-1012页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：845 ] - 张磊升;高巍;赵魁;贺文琦;宋德光;陆慧君;高丰;
目的构建小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。方法用Trizol试剂提取原代小鼠神经细胞总RNA,分离、纯化mRNA,经反转录合成其双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,以形成两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端的双链cDNA。经Mini Column进行纯化,收集大小在300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于含有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,体外包装后经BLT5403菌株增殖,进行文库扩增。结果所构建的文库库容量为含有3.04×107个重组子,原始滴度为2.8×107 pfu/ml,重组率为92%,扩增后文库滴度为3.5×1010 pfu/ml。对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,88%的插入片段大于300 bp。结论 成功构建了小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。
2011年09期 v.24 1013-1015+1021页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：128 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：882 ] - 张丽星;张喜珍;王玉倩;刘晨露;夏秋;孔维;于湘晖;张海红;
目的构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率。方法以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上,构建双顺反子表达载体DV。另以质粒pshuttle-luciferase为模板,PCR扩增报告基因luciferase片段,分别连接至DV的两个启动子后,得到质粒DV-luc1和DV-luc2。将质粒DV-luc1、DV-luc2和阳性质粒pshuttle-luciferase分别转染COS-7细胞,Western blot检测luciferase蛋白的表达情况,荧光酶标仪检测luciferase降解底物的水平。结果双顺反子表达载体DV经双酶切鉴定证明构建正确;转染重组质粒DV-luc1和DV-luc2的COS-7细胞中均有luciferase的表达,且表达效率DV-luc2略高于DV-luc1。结论 已成功构建了双顺反子表达载体DV,且载体的第2个启动子的启动效率略高于第1个启动子,为基因治疗、转录调控、多价疫苗等的研究奠定了基础。
2011年09期 v.24 1016-1021页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K] [下载次数：254 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：871 ] - 周汛;杨致邦;肖异珠;
目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs),经拼接后获得101条非冗余序列(Unigenes);Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条Unigenes。申克孢子丝菌酵母相和菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论 已成功构建申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库,并筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。
2011年09期 v.24 1022-1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：771 ] - 范东艳;王苹;刘然;陈玉丙;
目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植和直流电刺激对大鼠脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的修复作用。方法采用脊椎骨破坏法制备大鼠SCI模型,将模型大鼠随机分为模型组、BMSCs移植组、电刺激组和电刺激+BMSCs移植组,通过BBB评分、体感诱发电位(Somatosensory evoked potential,SEP)测定和免疫组化法观察不同方法治疗SCI的效果。结果 BMSCs移植后7和14 d,模型组和电刺激组BBB评分与BMSCs移植组和电刺激+BM-SCs移植组相比,差异有统计学意义(P<0.05);电刺激+BMSCs移植组脊髓功能恢复最好。SEP检测,BMSCs移植后14 d,BMSCs移植组和电刺激+BMSCs移植组与其他两组比较,潜伏期幅有明显差异(P<0.05)。采用NF-200标记脊髓神经元,模型组在损伤14 d后,仅见少量的NF阳性细胞;而电刺激组和BMSCs移植组可见大量NF阳性细胞和轴突分布于损伤区周围;电刺激+BMSCs移植组NF阳性细胞明显多于电刺激组和BMSCs移植组(P<0.05)。BMSCs移植组在移植后7 d,局部组织脑衍生的亲神经因子(Brain-derived neurotropic factor,BDNF)表达量明显高于模型组(P<0.05),14 d最强,21 d减弱,电刺激+BMSCs移植组BDNF表达最强(P<0.05)。结论 BMSCs移植联合电刺激能够最大程度地促进SCI修复。
2011年09期 v.24 1028-1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 388K] [下载次数：284 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：697 ] - 徐艳华;李敏;刘俊;姜蓉;汪维伟;
目的观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植对大鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的治疗作用。方法分离、培养、鉴定大鼠MSCs,并以DAPI标记第3代MSCs。将大鼠随机分为3组,A、B组采用免疫复合法诱导UC模型,C组为正常对照组。A组移植标记的MSCs,B组移植PBS。移植后3、7、14 d各组均处死大鼠5只,取结肠组织,光镜观察病理变化,荧光显微镜观察标记细胞的分布,激光共聚焦显微镜观察标记细胞细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)的表达。结果 MSCs生长迅速,呈均一的成纤维样细胞,表达CD29和CD90,不表达CD45。移植后7、14 d,A组结肠的修复明显优于B组;移植后3 d,A组结肠即可见移植细胞,至14 d时最多(P<0.05);移植后7、14 d,A组少量移植细胞表达CK。结论 MSCs移植可促进UC大鼠损伤结肠的修复;部分MSCs可分化为结肠上皮细胞,参与损伤的修复。
2011年09期 v.24 1033-1037页 [查看摘要][在线阅读][下载 424K] [下载次数：174 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：865 ] - 李晓冬;赵金鹏;孙岩岩;
目的分析中国人群细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4)+49位点A>G基因多态性与结直肠癌发生和进展的相关性。方法选取结直肠癌患者248例(疾病组)、结直肠腺瘤患者380例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)检测CTLA-4+49位点基因型。结果疾病组CTLA-4+49位点出现GG纯合子或至少出现1个G等位基因的频率显著高于对照组;与携带CTLA-4+49A/A基因型患者相比,携带CTLA-4+49G/G基因型患者发生结直肠癌的危险性为OR=3.684(95%CI:1.670～8.128);携带A等位基因的患者发生远处转移的几率较高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CTLA-4+49A>G基因多态性与中国人群结直肠癌易感性具有一定的相关性,但对结直肠癌进展的影响不明显。
2011年09期 v.24 1038-1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：807 ] - 汤鑫;万家余;鞠传静;李莎;郝镯;刘文森;李忠义;孟轲音;张晓晶;刘林娜;沈景林;马永和;钱军;
目的无细胞表达人178位点突变朊蛋白PrP(D178N),并分析其抗原性及结构。方法提取人血液基因组DNA,应用PCR法突变人PrP 178号位点。以正常的PrP为对照组,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1上,利用无细胞真核表达系统进行表达。Western blot分析表达的重组蛋白的抗原性,电镜观察抗原结构。结果突变基因重组表达质粒构建正确;表达的PrP(D178N)蛋白相对分子质量约为28 000,对PK酶具有抗性,电镜下可见氧病相关纤维(Scrapie associated fibrils,SAF)存在。结论 已成功无细胞表达了PrP(D178N),为后续其突变后空间构象及致病机理的研究奠定了基础。
2011年09期 v.24 1042-1045页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K] [下载次数：178 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：981 ] - 陈丹;刘娟;黄健;刘新颖;王冉;史洪娜;王维龙;沈林;李鼎锋;
目的人工合成恒河猴白细胞介素-4(Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达。通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定。结果双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上;Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合。结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础。
2011年09期 v.24 1046-1049+1053页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K] [下载次数：67 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：858 ] - 陈国庆;姚珍薇;秦兴发;
目的构建并鉴定靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体。方法设计合成靶向人FOXM1基因的shRNA序列,通过基因重组技术将其连接到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pLL3.7中,构建shRNA重组质粒pLL-FOXM1-shRNA。重组质粒经XbaⅠ和NheⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,与慢病毒包装质粒混合,与脂质体Lipofec-tamineTM 2000共转染至293T细胞中,孵育72 h后收集上清液,高速离心纯化病毒颗粒,并采用逐孔稀释法测定慢病毒滴度。结果双酶切鉴定及测序结果证实,靶向人FOXM1基因的shRNA序列已成功插入pLL3.7中;在293T细胞中成功包装出慢病毒颗粒,病毒滴度为1×108 TU/ml。结论 已成功构建了靶向人FOXM1基因的shRNA慢病毒载体,为进一步研究FOXM1的分子功能奠定了基础。
2011年09期 v.24 1050-1053页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：699 ] - 谭为;聂映;吴仁彪;程黎庆;闫广谋;张西臣;张瑞;
目的原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白。方法以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白。结果获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确;表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%;纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应。结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测。
2011年09期 v.24 1054-1056+1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：790 ] - 林晓;林青;唐俐;刘斌;李昱;
目的检测髓母细胞瘤中PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达,探讨PI3K/AKT信号传导通路在髓母细胞瘤中的作用机制及其临床意义。方法应用免疫组化Envision二步法检测33例髓母细胞瘤及17例对照脑组织中PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达,分析3种蛋白之间表达的相关性及其与髓母细胞瘤临床病理特征及类型的相关性。结果在33例髓母细胞瘤中,PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达率显著高于对照脑组织(P<0.05);PI3K、AKT及Nrf2蛋白的表达显著相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤类型均无显著相关性(P>0.05)。结论 PI3K/AKT信号传导通路可能对髓母细胞瘤的发生、发展起重要作用,可能成为髓母细胞瘤诊治的新靶点。
2011年09期 v.24 1057-1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：308 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：709 ] - 张树君;陈建斌;杨春秀;李芳菲;姜蓉;徐强;
目的探讨小鼠胚胎早期造血发育阶段Notch1信号的表达。方法采用RT-PCR和Western blot法对小鼠胚胎9.5 d(E9.5)、E10.5、E11.5和E12.5的主动脉-性腺-中肾(Aorta-gonad-mesonephros,AGM)区和胎肝中Notch1信号基因和蛋白的表达水平进行检测。结果 AGM区Notch1基因mRNA的表达量较高,且随孕龄的增大而递减;胎肝中Notch1基因mRNA的表达水平有明显的差异,其中E10.5表达量最低,E11.5表达量最高;在各个时相,AGM区与胎肝中Notch1基因mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。Notch1蛋白与Notch1基因mRNA的表达规律相同,但除E9.5外,其他3个时相AGM区与胎肝中Notch1蛋白的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Notch1信号在造血祖细胞的发育分化中具有重要作用,规律是由AGM区向胎肝区迁移。
2011年09期 v.24 1061-1063+1067页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K] [下载次数：121 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：916 ] - 王玉;朱艳平;郭霄峰;
目的修饰犬干扰素α1(Canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,提高其在毕赤酵母中的表达水平及抗病毒活性。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统对密码子的偏爱性,将CaIFNα1基因改造后,克隆至分泌表达载体pPICZαC中,电转化巴斯德毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和氨基酸测序后,检测重组蛋白的表达量及抗水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性。结果重组表达质粒pPICZαC-CaIFNα1经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组CaIFNα1蛋白相对分子质量约为24 000,蛋白氨基酸序列与天然的CaIFNα1氨基酸序列相同,3批重组酵母菌表达产物的蛋白含量分别为0.253、0.198和0.224 mg/ml,在Vero细胞上均无抗VSV活性,在MDCK细胞上的抗VSV活性分别为1.58×108、1.30×108和1.50×108 U/mg。结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为大量发酵生产干扰素奠定了基础。
2011年09期 v.24 1064-1067页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：746 ] - 田茗源;王林辉;张雄;罗红池;李昱;
目的探讨肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达及其与上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关性。方法采用免疫组化SP法检测44例肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达,并分析二者与肺癌临床特征及EMT之间的相关性。结果肺癌组织中E-cadherin和Vimentin的表达率分别为40.9%和25.0%;中晚期肺癌(Ⅲ-Ⅳ)中E-cadherin的表达率(16.7%)明显低于早期肺癌(Ⅰ-Ⅱ)(50.0%),有淋巴结转移肺癌组织中E-cadherin的表达率(17.6%)低于无淋巴结转移肺癌组织(55.6%),且差异均有统计学意义(P<0.05);中晚期肺癌组织中Vimentin的表达率(58.3%)明显高于早期肺癌组织(12.5%),在有淋巴结转移组的表达率(41.2%)高于无淋巴结转移组(14.8%),且差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组织中E-cadherin与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.397,P<0.05)。结论 E-cadherin的表达降低和Vimentin的表达升高与肺癌的淋巴结转移、病理分期相关,E-cadherin和Vimentin参与了EMT过程,在肺癌转移中具有重要作用。
2011年09期 v.24 1068-1071页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：1162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：66 ] |[阅读次数：1741 ]
- 周雁翔;端义坤;李策生;彭良俊;张爱华;邹汉武;
目的采用低温乙醇法分离正常人血浆组分Ⅳ沉淀(FractionⅣ,FⅣ)中提取α1-抗胰蛋白酶(α1-Antitrypsin,α1-AT),制备较高纯度的α1-AT制剂。方法 FⅣ沉淀经过滤、ConA Sepharose 4B亲和层析、DEAE Sepharose Fast Flow一步离子交换层析提纯α1-AT,采用SDS-PAGE及区带扫描法分析纯化α1-AT的纯度;紫外分光光度计测定纯化α1-AT蛋白的浓度及回收率;Western blot检测其反应原性;胰蛋白酶抑制实验(TICT)检测纯化α1-AT的活性。结果纯化α1-AT的纯度为97.3%;纯化过程中α1-AT蛋白的平均回收率为20.4%;纯化的α1-AT能与抗人α1-AT抗体特异性结合;平均比活为0.833 PU/mg。结论 从FⅣ中成功纯化获得了纯度较高、具有生物学活性的α1-AT制剂。
2011年09期 v.24 1090-1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K] [下载次数：356 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：880 ] - 王娟;赵莉;吴刚;许丽锋;徐静;
目的建立免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法。方法分别应用酸性缓冲液Gly-HCl、HAc-NaAc、Na2HPO4-CA、CA-NaCA和表面活性剂DEA-T处理免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗,采用ELISA法检测处理后疫苗中的HBsAg和HBIG,筛选最佳缓冲液;对鉴别试验的反应条件(pH值、反应时间、反应温度)进行优化;并对鉴别试验的精密性进行验证。结果选择CA-NaCA缓冲液作为免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验的样品处理缓冲液,其既具有解离抗原抗体复合物的作用,又能使铝佐剂与吸附的蛋白质解离;鉴别试验最适pH值为3.0,最佳反应温度为25℃,最佳反应时间为30 min;该鉴别试验方法精密性良好。结论 建立了免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法,为该疫苗的检定方法提供了必要的补充。
2011年09期 v.24 1094-1097页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：742 ] - 谷铁军;张海玉;段冶;韩明明;卫巍;姜春来;吴永革;孔维;
目的通过凝胶免疫法制备抗狂犬病病毒糖蛋白单链抗体Fv57的多克隆抗体。方法诱导表达Fv57蛋白,SDS-PAGE分离后,分别以KCl和考马斯亮蓝R-250染色,切取含目的蛋白的凝胶,经背部皮下免疫家兔,共免疫4次。第4次免疫后1周采血,分离血清,Western blot分析Fv57蛋白多克隆抗体的特异性,ELISA检测抗体效价。结果表达的Fv57蛋白相对分子质量约26 000;两种染色方法制备的多抗均能与Fv57蛋白特异性结合,与考马斯亮蓝R-250染色法相比,KCl法的非特异性杂带较少,结合效果更好;两种方法制备的多抗效价均在1∶10 000以上。结论 已成功采用凝胶免疫法制备了Fv57多克隆抗体,为检测Fv57与狂犬病病毒糖蛋白的特异性结合奠定了基础。
2011年09期 v.24 1098-1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：683 ] - 陈显久;解军;张悦红;牛勃;
目的建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础。方法常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法获取Kringle 5蛋白洗脱液,分段收集洗脱样品,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western blot鉴定其反应原性。结果咪唑梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度达98%以上,得率为21.3 mg/柱体积,但不能充分将Kringle 5蛋白与杂蛋白分离;pH梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度在98%以上,得率为62.7 mg/柱体积,且可与杂蛋白充分分离。结论 已建立了重组Kringle 5蛋白的纯化方法,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定了基础。
2011年09期 v.24 1101-1104页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：855 ] - 方爱平;陈德珩;文景丽;范海波;王英兰;张悦;胡泓;
目的应用母血浆中AIRE基因作为胎儿DNA遗传学标记,探讨无创性产前筛查唐氏综合征(Down syndrome,DS)的可行性。方法提取随机选取的45名正常孕妇血浆中游离DNA,同时以15名非妊娠健康妇女血浆游离DNA作为对照,通过巢式甲基化特异性PCR检测游离DNA中AIRE基因的甲基化状态;提取15名产妇胎盘组织和母血单核细胞中的DNA,检测AIRE基因的甲基化状态;采集20例确诊为DS胎儿的高危孕妇外周血,以45名正常孕妇外周血作为对照,检测AIRE基因甲基化状态。结果正常孕妇血浆中AIRE基因的甲基化率比非妊娠健康妇女高(P<0.01);所有产妇胎盘组织中均能检测到AIRE基因的甲基化,而在母血单核细胞中未检测到;在确诊为DS胎儿的高危孕妇外周血中,AIRE基因的甲基化率远远低于正常胎儿孕妇外周血(P<0.01)。结论 应用巢式甲基化特异性PCR技术检测妊娠期母血浆中AIRE基因的甲基化状态对胎儿DS进行非创伤性产前诊断是可行的。
2011年09期 v.24 1105-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：678 ]