- 杜末;乔永波;尹婷;徐艳玲;夏青娟;李爽;赵大鹏;吴业红;
目的 利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统制备甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV )病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)，并检测其对小鼠的免疫效力。方法 根据草地贪夜蛾卵巢细胞(Spodoptera frugiperda cells)的密码子偏嗜性，优化并合成HAV LA-1株的P1-2A和3CD基因，将其克隆至pFastBac1~(TM)载体，重组质粒转化大肠埃希菌DH10Bac感受态细胞，构建重组杆粒Bacmid-P1-2A和Bacmid-3CD，分别转染昆虫细胞获得重组杆状病毒(rBV)，流式细胞术测定rBV-P1-2A和rBV-3CD的滴度后，共感染昆虫细胞Sf-RVN~?，培养60 h后收获表达产物，采用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot及透射电子显微镜对VLPs进行表征检测；表达产物经蔗糖密度梯度离心纯化，使用辅以Al(OH)_3佐剂的VLPs免疫30只雌性BALB/c小鼠，初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果 重组质粒和重组杆粒分别经双酶切和PCR鉴定证明构建正确；rBV-P1-2A和rBV-3CD的滴度分别为3.6×10~8和4×10~8ivp/mL;rBV-P1-2A和rBV-3CD共感染Sf-RVN~?昆虫细胞后获得HAV VLPs，经间接免疫荧光和Western blot鉴定证明均有蛋白表达，且分别与小鼠抗HAV多克隆抗体及小鼠抗HAV单克隆抗体发生特异性反应，透射电镜观察可见直径约为11 nm的VLPs，略小于天然HAV颗粒；ELISA结果表明，免疫HAV VLPs小鼠可显著产生针对HAV结构蛋白的特异性抗体(anti-VP1:t=12.250,P=0.000 3;anti-VP0:t=7.867,P=0.001 4;anti-VP3:t=4.323,P=0.012 4)，且Western blot结果可间接证明VLPs结构的完整性。结论 应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统成功制备了HAV VLPs，为新型甲型肝炎疫苗的研发奠定了基础。
2025年10期 v.38 1153-1161+1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 1108K] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ] - 张丽;潘玥;龙明望;王涵;陈俊英;徐建宇;孙强明;
目的 分析Ⅰ型登革病毒(Dengue virus,DENV)低温减毒株24-22-25的生物学特性及其全基因组序列，并与Ⅰ型DENV临床分离株24-22-37进行比较，确定其毒力减弱的相关位点。方法 用Vero细胞培养Ⅰ型DENV 24-22-25及24-22-37株，观察细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况，收获CPE稳定的病毒上清，观察病毒空斑形态；CCID_(50)法检测病毒滴度，并绘制病毒生长曲线。取培养5～10代的Ⅰ型DENV 24-22-25株，PCR分段扩增全长基因组序列，并与Ⅰ型DENV 24-22-37株进行对比。结果 与Ⅰ型DENV 24-22-37株比较，Ⅰ型DENV 24-22-25株在Vero细胞上形成的空斑较小；感染前5 d，Ⅰ型DENV 24-22-25株病毒滴度低于Ⅰ型DENV 24-22-37株，且前者发生CPE慢于后者。两个毒株共有11个核苷酸位点发生突变，其中包括4个同义突变和7个错义突变，导致7个氨基酸位点发生变化。结论 Ⅰ型DENV 24-22-25株存在的7个氨基酸突变可能是其毒力减弱的分子基础，该毒株有望作为DENV减毒活疫苗的候选病毒株。
2025年10期 v.38 1162-1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 1007K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 苗会;刘振成;张冬雪;何铖;张健;刘晨阳;王颖;拱小棠;李景良;
目的 分析森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞适应株的分子生物学特性，评估其遗传稳定性，以期为疫苗候选株的筛选提供实验依据。方法 将主代“森张”株鼠脑适应的TBEV(鼠脑毒种)在PHK细胞上适应性传代10次(PT-1～PT-10)。采用动物法测定各代次病毒滴度；对PT-1～PT-10代病毒的E蛋白基因及PT-1、3、4、7、10代病毒的全基因组进行扩增和测序。应用生物信息学软件进行序列比对、同源性分析及E蛋白结构预测。结果 TBEV经PHK细胞适应后病毒滴度稳定在(8.89±0.07)lgLD_(50)/mL。TBEV PHK适应株基因组全长为10 782 bp，共编码3 414个氨基酸；E蛋白基因长度为1 488 bp，编码496个氨基酸。与鼠脑毒种比较，在PHK细胞适应传代过程中共发现4处氨基酸突变位点，分别位于E-203(PT-8、PT-9、PT-10代由天冬氨酸突变为丙氨酸)、NS2A-163(PT-3和PT-4代由谷氨酰胺突变为赖氨酸)、NS4B-110(PT-3和PT-4代由异亮氨酸突变为苯丙氨酸)、NS4B-40(PT-4代由色氨酸突变为精氨酸)。TBEV PHK适应株与主代鼠脑病毒氨基酸序列一致性为99.99%,E蛋白模拟三级结构、理论跨膜区数量与位置、病毒多聚蛋白二级结构完全一致；且与远东亚型代表株同源性最高。结论“森张”株TBEV经PHK细胞适应后遗传稳定性良好，关键抗原结构保守，有望成为TBEV疫苗候选株。
2025年10期 v.38 1168-1174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1011K] [下载次数：16 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 孙跃秋;刘洪涛;刘娜;范丽丽;刘阳;刘昶;双慧;蔡岩;
目的 纯化筛选滴度高且遗传稳定的F基因型腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)2BS细胞适应株，并进行检定，为F基因型MuV疫苗研发提供候选毒株。方法 将分离的MuV-QBB毒株在2BS细胞株上进行适应性传代后，经2次克隆纯化，挑选多株空斑进行扩增传代，根据细胞病变形态及病毒滴度检测结果筛选病变典型且滴度高的毒株。对分离的毒株扩增传代后进行病毒滴度、基因序列及关键蛋白HN和NP表达检测，并按照《中国药典》三部(2020版)要求对筛选的毒株进行质量检测。结果 MuV-QBB毒株在2BS细胞上连续适应传代5次后，病毒滴度达6.23 lgCCID_(50)/mL；经2次克隆纯化获得4株MuV-QBB 2BS适应株，扩增传代后病毒滴度均稳定在6.0 lgCCID_(50)/mL;Western blot结果显示，4株毒株关键蛋白HN和NP正常表达；全基因组序列比对结果显示，4株MuV-QBB 2BS适应株均发生5～6处非同义突变。4株MuV-QBB毒株无菌、支原体和外源病毒因子检测结果均为阴性。结论 成功筛选出4株F基因型MuV 2BS细胞适应株，可作为F基因型腮腺炎候选疫苗株。
2025年10期 v.38 1175-1180页 [查看摘要][在线阅读][下载 900K] [下载次数：17 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ]
- 巩丽萍;杭宝建;石峰;薛云丽;赵艳霞;咸瑞卿;
目的 建立病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)新冠疫苗受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)蛋白含量超高效液相色谱-串联质谱(ultra high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry,UHPLCMS/MS)检测方法，并进行验证及初步应用，为其质量控制提供技术支持。方法 以高分辨质谱仪筛选出新冠疫苗RBD蛋白的特征肽，采用UHPLC-MS/MS方法测定RBD蛋白含量，色谱柱：Thermo Fisher Hypersil GOLD C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm)；流动相A:0.1%甲酸水溶液；流动相B:0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱：0～3 min,2%B;3～10 min,2%→50%B;10～10.1 min,50%→90%B;10.1～12 min,90%B;12～12.1 min,90%→2%B;12.1～15 min,2%B；流速：0.3 mL/min；柱温：40℃，进样量：1μL。对方法的专属性、稳定性、仪器精密度、线性及定量限、回收率及重复性进行验证。采用建立的方法检测VLP新冠疫苗原液和成品各6批中RBD蛋白含量，同时与氨基酸分析仪测定结果进行比较。结果 空白溶液不干扰特征肽含量的测定；供试品溶液在室温放置24 h内稳定；特征肽对照品溶液连续进样6次特征肽峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.0%；特征肽浓度在0.008 954～0.358 200μg/mL范围内，标准曲线线性关系良好，定量限为0.008 954μg/mL；原液和疫苗样品特征肽检测结果的回收率RSD均<10%。6批疫苗原液和6批疫苗的含量分别为0.169 40～0.196 60 mg/mL和0.014 35～0.020 50 mg/mL。氨基酸分析仪和特征肽法测定VLP新冠疫苗原液中RBD蛋白含量的偏差为5.3%，测定结果基本一致。结论 建立的UHPLC-MS/MS法专属性强，操作简便，定量准确，可用于VLP新冠疫苗中RBD蛋白含量的检测。
2025年10期 v.38 1211-1218+1225页 [查看摘要][在线阅读][下载 947K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：12 ] - 杨柏峰;吕溪琳;陶含章;付慧;陈辉;於洋;陈丝丝;张霖阳;李世慧;
目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(high-performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)检测以吸附无细胞百(三组分)白破(diphtheria,tetanus and component acellular pertussis vaccine,DTacP)为基础的联合疫苗中甘油含量，并对方法进行验证和初步应用，以期为联合疫苗中甘油的检测及质量控制提供更好的手段。方法 离心去除样品中氢氧化铝佐剂，上清过0.22μm膜后，采用MA-1色谱柱分离，使用安培检测器检测，外标法建立标准曲线。对方法进行专属性、线性、检测限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ)、准确度、精密度及耐用性验证。采用建立的方法检测9批次以DTacP为基础的联合疫苗的甘油含量。结果 乙二醇、甘油和核糖醇可有效分离，方法专属性较强；在0.9～28.7μg/mL浓度范围内，甘油参考品质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，R~2均> 0.999；方法的LOD为110 ng/mL,LOQ为500 ng/mL；该方法检测高(25.0μg/mL)、中(15μg/mL)、低(1.5μg/mL)质量浓度甘油参考品的加标回收率均在95%～105%之间；精密度验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<2%；改变流速(0.4→0.3 mL/min)、柱温(30→32℃)、流动相浓度(450→580 mmol/L)，检测结果差异小。建立的方法可准确检测DTacP、吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTacP-sIPV)和吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎与b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(DTacP-sIPV-Hib)中的甘油含量，RSD最大仅为0.78%。结论 建立的HPAEC-PAD法专属性、线性、准确度、精密度及耐用性良好，可定量分析DTacP系列联合疫苗中的甘油含量，为DTacP系列联合疫苗的质量控制提供了更好的手段。
2025年10期 v.38 1219-1225页 [查看摘要][在线阅读][下载 871K] [下载次数：24 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 申瑷琳;金玉翠;潘俊杰;唐微;郝鹏亮;何亮;程小玲;罗敏;石艳红;施金荣;喻刚;
目的 建立一种可快速、有效去除Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin inactivated poliovirus vaccine,sIPV)单价病毒灭活液中甲醛的方法，以期用于该疫苗的病毒灭活验证试验。方法 采用亚硫酸氢钠中和法去除sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价病毒灭活液中的甲醛，并优化35%亚硫酸氢钠溶液与病毒液的中和比例(1∶80、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800)及中和时间(0.5、1、2 h)，以D抗原回收率和甲醛去除率为指标，评估去除效果。分别采用建立的方法及透析法去除3批sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价病毒灭活液中的甲醛，并比较去除效果。结果 确定最佳中和条件为：按1∶800的中和比例于2～8℃中和1 h。在该条件下，sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型的D抗原回收率分别为95%、95%和87%，甲醛去除率均达76%以上。2种方法均可充分去除甲醛，细胞生长良好，均未发生细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况，检验结果一致。结论 亚硫酸氢钠中和法能快速、有效去除sIPV单价病毒灭活液中的甲醛，且不影响病毒抗原性和细胞检测，适用于该疫苗的病毒灭活验证试验。
2025年10期 v.38 1226-1230页 [查看摘要][在线阅读][下载 1023K] [下载次数：36 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 王文通;冯雪;马红;吕洋冰;张宏宇;杨红育;
目的 建立冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液、半成品中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)残留量的气相色谱检测方法，并进行验证，以期为疫苗的质量控制提供实验依据。方法 气相色谱条件：色谱柱为Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.250 mm×1.40μm)，进样口温度为180℃，检测器温度为250℃，柱温箱温度为120℃，分流比为30∶1，载气气体为氮气，流速为1.0 mL/min，自动进样，进样量为1μL。对方法的专属性、检测限、准确度、重复性、线性范围、耐用性进行验证。用建立的方法检测2批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及半成品中BPL残留量。结果 以乙腈为稀释剂，采用等温程序进样，BPL标准溶液与疫苗原液混合样品分离度> 1.5,BPL峰保留时间与标准溶液一致；6份BPL标准溶液进样后，峰面积、保留时间及回收率的RSD均<5%;BPL浓度在10～200μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为y=0.241 6 x+0.024 7，相关系数(r)为0.999 93，检测限为2μg/mL；不同柱温条件下，BPL标准溶液检测结果、峰面积及保留时间的RSD均<10.0%；疫苗原液及半成品中均未检测到BPL。结论 建立了冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液、半成品中BPL残留量的气相色谱检测方法，该方法专属性、准确度、重复性、耐用性良好，可用于疫苗原液及半成品中BPL残留量检测。
2025年10期 v.38 1231-1234+1240页 [查看摘要][在线阅读][下载 848K] [下载次数：33 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 杨海燕;齐乃松;王娟;周继春;刘英;陈维鹏;
目的 评价微量动态显色法用于定量检测流感病毒裂解疫苗细菌内毒素含量的可行性，以期建立一种节约鲎试剂用量的检测方法。方法 采用微量动态显色法检测细菌内毒素工作标准品，建立细菌内毒素标准曲线，验证其可靠性；通过干扰试验确定供试品不干扰检测结果的最小稀释倍数。采用微量动态显色法检测7批流感病毒裂解疫苗的细菌内毒素含量，并与常规动态显色法进行比较。结果 微量动态显色法标准曲线在0.05～5.0 EU/mL范围内线性良好，相关系数(r)为-0.999 7。流感病毒裂解疫苗稀释16及16倍以上时，对检测无干扰作用，回收率在50%～200%之间。微量动态显色法检测7批流感病毒裂解疫苗的细胞内毒素含量均符合企业规定(<10 EU/mL)，且与常规动态显色法检测结果一致。结论 微量动态显色法可用于流感病毒裂解疫苗细菌内毒素的定量检测，该方法准确可靠，在保证质量控制的前提下，可大幅减少鲎试剂的用量，对保护濒危鲎资源具有重要意义。
2025年10期 v.38 1235-1240页 [查看摘要][在线阅读][下载 862K] [下载次数：33 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
- 倪毅;王胜伟;朱丽玮;
生物制药行业是科技创新的前沿，传统药物研发模式面临着研发周期长、成本高及成功率低的缺点，难以满足社会对新药的迫切需求，人工智能(artificial intelligence,AI)技术的快速发展为解决这些难题提供了新路径。其中，大型语言模型(large language model,LLM)与智能体(Agent)技术的发展为生物制药研发全流程的智能化与自动化带来了革命性机遇。LLM凭借强大的自然语言处理能力，可高效理解与生成科学文献；Agent技术则赋予系统自主决策与执行能力，能够在复杂实验环境中完成规划与操作。二者的结合可显著提升药物研发中知识管理、实验设计、实验执行、数据分析与决策支持等关键环节的效能。本文就LLM及Agent技术在生物制药研发全过程中的应用与作用作一综述，系统阐述其实现方法、典型应用场景及实际案例，突出其在提升研发效率、降低成本和加速创新方面的重要价值，以期为相关领域的科学研究与产业化推进提供参考，并推动AI技术在药物研发中更广泛的应用。
2025年10期 v.38 1241-1246+1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 888K] [下载次数：226 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 张旋旋;郝晓甜;梁争论;吴星;
互换性作为确保标准物质在不同检测体系中结果准确与可比的关键属性，日益受到相关研究领域的重视。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布多份技术报告与指南明确了其定义、评估要求。美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)、国际临床化学和检验医学联合会(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)及我国相关部门也相继发布了相关指南与规范。目前，互换性评估在诊断试剂标准物质中已有较多实践，但在疫苗及治疗性生物制品标准物质领域仍缺乏系统研究。本文系统梳理了标准物质互换性研究的相关文件，并总结了该领域的研究进展，以期为生物标准物质互换性的深入研究提供思路与参考。
2025年10期 v.38 1247-1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 900K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 郭全娟;张振;朱孟沼;
在传统的静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)制备过程中，IgM和IgA通常被作为污染物丢弃，但已有研究表明，这些抗体对治疗败血症或感染性休克有效。考虑到对人类血浆衍生产品的需求增加和原材料的稀缺性，工业化生产中需进一步提高血浆的利用率，因此，在IVIG生产废料中进一步纯化富含IgA和IgM的IgG产品非常有价值。目前，国内尚未批准任何一款同类型产品上市。本文通过对已上市IVIG产品中IgA和IgM含量、富含IgA和IgM的IgG产品纯化工艺、国外已上市或临床研究阶段产品的临床应用进展作一综述，以期为富含IgA和IgM的IgG产品工艺开发及临床应用提供参考。
2025年10期 v.38 1253-1257+1262页 [查看摘要][在线阅读][下载 865K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 侯光华;江春燕;胡启江;邱雯雯;
噬菌体是一类能特异性感染细菌、真菌等微生物的病毒的总称。近年来，随着“超级耐药细菌”的出现和流行，噬菌体疗法再次受到关注。噬菌体疗法可作为生物制剂替代抗生素用于细菌感染性疾病的治疗。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性菌细胞外壁的主要组成部分，是由1个疏水的类脂质A区域和长链分支糖类组成的大分子糖脂。革兰阴性菌LPS O抗原和核心寡糖区域是噬菌体尾丝蛋白的受体，决定了噬菌体的感染能力和宿主范围。本文对噬菌体尾丝蛋白与革兰阴性菌表面受体LPS的特异性结合介导噬菌体吸附及感染的研究进展作一综述，旨在为后续LPS介导噬菌体吸附机制的研究提供参考，同时也为进一步探讨噬菌体对宿主菌的相互作用机制提供新思路。
2025年10期 v.38 1258-1262页 [查看摘要][在线阅读][下载 991K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 余璨;
手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是严重影响儿童健康的急性传染病之一，该病传染速度快，易引发大规模流行。HFMD是我国2024年重点关注的突发公共卫生事件之一，已成为我国儿童疾病预防控制工作的重点。接种疫苗是防控HFMD的重要且有效措施，为了解HFMD疫苗相关技术研发重点，本文利用专利数据库，通过专利视角对HFMD疫苗研究进展与发展趋势进行分析，就全球专利发展现状、我国研究成果及重要申请人等方面对HFMD疫苗专利技术作一综述，以期更好地掌握HFMD疫苗研究发展脉络和研究重点，为我国HFMD防控工作提供科学依据。
2025年10期 v.38 1263-1268页 [查看摘要][在线阅读][下载 959K] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 卞新华;郑朝辉;
细胞自噬是一种细胞自我消化的过程，通过形成自噬体来降解和回收细胞内的受损细胞器和蛋白质。在肿瘤生物学中，自噬扮演着复杂的角色，既可作为抑制肿瘤发生的保护机制，也可能促进肿瘤细胞的存活和进展。本文综述了细胞自噬在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中的作用，探讨了自噬对肿瘤发生、发展以及治疗的影响。
2025年10期 v.38 1269-1273+1280页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ]