噬茵体展示短肽模拟腺病毒表位的研究

目的为了获得含有中和抗体相关的３型腺病毒模拟表位短肽的噬菌体克隆，并观察其对该病毒 感染Ｈｅｌａ细胞的保护效应，为设计新疫苗提供新的思路。方法用３型腺病毒中和抗体筛选噬菌体随机十五肽 库，经三轮筛选后，随机挑取了２２个噬菌体克隆，分别加入３型腺病毒感染的Ｈｅｌａ细胞，用结晶紫染色法观察Ｈｅｌａ 细胞的病变程度。并选择一个有明显保护作用的阳性噬菌体克隆进行测序。结果８／２２个克隆噬菌体短肽对３ 型腺病毒感染 Ｈｅｌｄ细胞具有保护作用。其中一个有明显保护作用的噬菌体短肽的序列为： ｌｅｕ－ Ｖａｌ－ Ｇｌｙ－ Ｉｌｅ－ Ｔｒｐ －Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｌａ，即ＬＶＧＩＷＨＲＬＰＧＡＨＲＧＡ。结论噬菌体短肽可以模拟中和 抗体相关的腺病毒表位，对３型腺病毒感染Ｈｅｌａ细胞有一定的保护作用。

腺病毒载体介导的HSV-tk基因杀伤肿瘤细胞的研究

目的 探讨ＨＳＶ－ｔｋ基因对各种肿瘤细胞的杀伤作用及人、鼠瘤细胞对其敏感性及瘤细胞表面的αｖ 整合素对腺病毒载体转染的影响。方法用同源重组法构建 ＡｄＣＭＶ ｔｋ基因；蚀斑形成法对重组腺病毒进行扩增、 滴定；Ｘ－ｇａｌ染色法观察腺病毒转染率，结晶紫染色法检测 ＡｄＣＭＶｔｋ／ＧＣＶ的杀伤作用。结果 ＡｄＣＭＶｔｋ对肿瘤细胞 的杀伤强度在一定范围内与ＡｄＣＭＶｔｋ的剂量呈正相关；对人类的Ｈｅｌａ、ＧＲＣ、Ｈｅｐ－２瘤细胞达１００％转染所需的腺病 毒感染复数量（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｍ．ｏ．ｉ）较鼠Ｌｅｗｉｓ、ＢＴＴ７３９瘤细胞的ＭＯＩ量低；在相同ＭＯＩ病毒量时，有αｖ整合 素的瘤细胞转染率高于无αｖ整合素的瘤细胞。结论ＡｄＣＭＶｔｋ／ＧＣＶ具有较明显的杀伤肿瘤细胞的作用，且有种属 差异，对人瘤细胞作用大于鼠瘤细胞，瘤细胞表面的αｖ整合素有利于腺病毒的转染。

中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究

目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体，构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ，通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，诱导特异性 ＣＴＬ反应，当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平，构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。

HCV C区基因片段的克隆、表达及纯化

目的研究 ＨＣＶ Ｃ区片段在大肠杆菌中的表达及纯化工艺。方法采用 ＲＴ－ＰＣＲ技术，从ＨＣＶ感 染者血清中克隆Ｃ区基因片段，插入ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒中，并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。采用亲和层析或 Ｓａｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ－２００柱层析纯化抗原。结果两种纯化工艺的收率分别为５８ｍｇ／Ｌ和９５ｍｇ／Ｌ发酵液。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯 度分别为９８％和９０％。ＥＬＩＳＡ检测纯化抗原具有较好的抗原性和特异性。结论两种纯化工艺简便，重组蛋白纯 度高，可用于ＥＬＩＳＡ试验。

人角质细胞生长因子的克隆及表达

目的为获得高表达的重组人角质细胞生长因子生物工程菌。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人胚 胎肺成纤维细胞中，扩增出ＫＧＦ ｃＤＮＡ基因，并插入ｐＵＣ１８－Ｔ载体，构建成了重组人ＫＧＦ基因，经ＤＮＡ测序证实与 文献报道一致。将ＫＧＦ基因定向插入大肠杆菌表达载体ＰＥＴ１１ｂ内，转化大肠杆菌ＨＢ１０１。结果获得的重组子 经ＩＰＴＧ诱导，在相对分子质量为１９０００处表达重组蛋白，约占菌体蛋白的１０％。结论建立了制备重组人ＫＧＦ表 达系统，为今后进一步研究ＫＧＦ的生物学功能奠定可靠的物质基础。

口服双歧杆菌、酪酸梭菌活菌制剂(肠康平)的药效作用

目的研究口服双歧杆菌、酪酸梭菌活菌制剂（肠康平）调整肠道菌群的药效作用。方法利用氨 苄青霉素引起ＳＰＦ－ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肠道菌群失调腹泻作为模型，口服肠康平与同类单价制剂，比较其药效作用。结果 肠康平对小鼠肠道菌群失调腹泻具有治疗作用，高剂量组的治疗效果优于低剂量组，肠康平制剂缓解ＳＰＦ－ＢＡＬＢ／ ｃ小鼠肠道菌群失调后腹泻的时间较单价制剂略快。结论肠康平是治疗肠道菌群失调腹泻的有效制剂。

外源3型呼肠孤病毒污染原代地鼠肾细胞的光镜及电镜诊断

目的 检测原代地鼠肾细胞（ＰＨＫＣ）是否潜伏外源呼肠孤病毒（Ｒｅｏｖ）污染。方法制备ＰＨＫＣ涂 片及单层细胞盖玻片进行ＨＥ及吖啶橙染色，供光镜观察；收集ＰＨＫＣ培养物，经冻融浓缩及超速离心，制备负染、 ＩＥＭ及超薄切片样品，供电镜观察。结果光镜下在ＰＨＫＣ胞浆内发现具有Ｒｅｏｖ包涵体特征的核周嗜酸性包涵 体，该包涵体经吖啶橙染色后呈苹果绿色。电镜下病毒仅在胞浆内复制，形成特征性包涵体，病毒粒子均呈圆球 形，双层衣壳，无囊膜，平均直径６５ｎｍ，核心平均直径３８ｎｍ，常见空衣壳。病毒常散在或呈类晶格状，或聚集成堆位 于胞浆内或包涵体内。也见少数病毒粒子位于胞浆空泡内。细胞间隙也见多少不等的病毒粒子。结论光镜细 胞病理学与电镜超微结构结合观察，是检测哺乳动物原代细胞或传代细胞潜伏外源病毒污染的可靠和有效手段。

冻干麻疹、流行性腮腺炎、风疹三联活疫苗的中量试制

目的中量试制麻疹、腮腺炎和风疹（ＭＭＲ）三联活疫苗。方法应用麻疹沪１９１株、流行性腮腺 炎Ｓ７９株和风疹 ＢＲＤ Ⅱ株三种病毒疫苗，按不同配比混合后进行病毒滴定，检测是否存在干扰现象，并将混合疫苗 放置不同温度观查其稳定性，并送国家检定部门进行全面质量检定。结果三种病毒混合后滴度不受干扰，５批 ＭＭＲ中量疫苗自检各项质量指标全部合格，。连续３批送国家检定部门检定，各项指标也均达合格标准。稳定性 良好。结论可以进行临床观察。

第一批人凝血因子浓制剂国家标准品的协作标定

目的标定第一批人凝血因子Ⅸ浓制剂国家标准品。方法用 ＷＨＯ ９６／８５４批人凝血因子Ⅸ国 际标准品标定我国人凝血因子Ⅸ国家标准品，再用此标准品作对照检测国内生产的冻干人凝血酶原复合物，并分 别将标准品置４℃、３７℃和４５℃保存６个月考查其稳定性。结果各项检测指标均达到国家标准品要求，９．３ＩＵ／支； 检测１４批冻干人凝血酶原复合物ＦⅨ效价，其中１１批达到瓶签标示效价的５０％以上；标准品的稳定性良好。结论 已成功地制定第一批人凝血因子Ⅸ浓制剂国家标准品。

原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗中残余细胞基质的检测

目的找出多批原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗高过敏反应发生率的原因，提出解决方案。方 法利用ＨＰＬＣ排阻层析结合ＥＬＩＳＡ方法相对定量地分析高反应性和无反应性疫苗的残余细胞基质成分，并利用 凝胶过滤柱层析去除疫苗中细胞源性杂质。结果高反应性疫苗中地鼠肾细胞基质成分的残留量偏高；利用常压 凝胶过滤柱层析法可将残留的细胞基质成分几乎完全去除。结论本次过敏反应事件是由部分疫苗中地鼠肾细 胞基质成分残留量偏高所致，用一步分子筛柱层析处理疫苗是一种简单有效的解决办法。

麻疹疫苗毒种制备工艺的改进

昆明小鼠生物学特性标准化研究

目的建立中国昆明小鼠标准化生物学指标。方法在昆明小鼠繁殖群中随机抽取１２０窝小鼠， 测定０～２５２日龄生长发育指标，采用生化分析仪测定２８、５６、１１２日龄小鼠血常规数据、血液生化值以及生理学、解 剖学等参数。结果昆明小鼠２５２日龄平均体重为４８．８１± ７．３１１０ｇ，１１２日平均体全长为雄２０１．５０±６．５９７０ｍｍ，雌 ２０４．１５±５．７７００ｍｍ，３０日初配产仔率为９４％，平均胎产仔数为１１．９±１．９６７８只，平均离乳成活率为８８．６０± ７．８３５０％，平均胎间距为３３．１４±４．１４９０日，整体粗脂肪含量为２１．０３± ７．０７０９％。结论查清了长春地区昆明小鼠 生物学等方面的特性，为中国昆明小鼠标准化提供可靠数据。

重症肌无力患儿免疫状态及静注免疫球蛋白的疗效

目的观察重症肌无力（ＭＧ）患儿机体免疫状态，比较静脉注射免疫球蛋白（ＩＶＩｇ）与免疫调节疗法 对ＭＧ的疗效。方法对８３例ＭＧ患儿分别于治疗前和缓解后，采用单项免疫扩散法检测血清免疫球蛋白（Ｉｇ），用 ＥＩＪＳＡ法检测乙酸胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）和可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ），以２４名健康儿童为对照组；并 对上述患儿中的６８例采用免疫调节疗法，２５例采用ＩＶＩｇ疗法。结果初发和复发的ＭＧ患儿ＩｇＧ、ＡｃｈＲａｂ、ＳＩＬ－２Ｒ 明显高于对照组（Ｐ＜０．００１），缓解后与对照组差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）；ＩＶＩｇ治疗组和免疫调节治组疗缓解率均 为９２％，复发率ＩＶＩｇ组为８％，免疫调节组为１８％，两组比较差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。结论ＩｇＧ、ＡｃｈＲａｂ、ＳＩＬ－ ２Ｒ随ＭＧ的病情而变化，可作为预测ＭＧ病情的依据；ＩＶＩｇ疗法在降低复发率方面优于免疫调节疗法。