- 吉元刚;张国利;李泽鸿;岳玉环;吴广谋;田园;刘雨玲;李玉洁;赵鑫;付玉和;王冬冬;张培培;侯天全;徐艳玲;马洪园;
目的制备含有7种血清型肉毒毒素切割位点(SNAP25-VAMP)的特异性绿色荧光融合蛋白,在E.coli中诱导表达,纯化后用于肉毒毒素活性测定。方法根据SNARE蛋白复合物中SNAPE25和VAMP基因序列及各血清型肉毒毒素(Bo NTs)的切割位点,设计合成含有SNAREs中突触小体(SNAP25)和突触小泡膜蛋白(VAMP)的Bam HⅠ-HIS6-SNAP62-Eco RⅠ-VAMP57C-TAA-HindⅢ(以下简称为SV)基因,连接至p ET-28a-GFP载体上,构建重组质粒p ET-28a-GFP-SV,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经DEAE阴离子交换层析、Cu2+金属螯合层析、Q阴离子交换层析3步纯化,BCA法测定纯化产物的蛋白浓度,ELISA法检测B型肉毒毒素轻链蛋白(Bo NT/BL)活性。结果构建的质粒p ET-28a-GFP-SV经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的GFP-SV融合蛋白相对分子量约40 000,主要以可溶形式存在,蛋白浓度为18.4μg/μl,纯度可达70%以上。利用该融合蛋白的荧光强弱变化可测定Bo NT/BL活性大小,同时也可测定其抗体中和活性大小。结论制备的含有SV的特异性绿色荧光融合蛋白在E.coli中获得了高效表达,为后续各型肉毒毒素活性检测及抗体中和毒素活性检测奠定了基础。
2017年09期 v.30 901-905页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 侯朋飞;金宏丽;李岭;曹增国;吴芳芳;闫飞虎;李国华;赵永坤;高玉伟;王化磊;杨松涛;夏咸柱;
目的构建鼠源Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白7种选择性剪接异构体(alternatively spliced isoforms)真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中表达。方法以提取的N2a细胞总RNA为模板,采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法扩增目的基因Bif-1(transcript variant 1、transcript variant 2、transcript variant 3、transcript variant x1、transcript variant x2、transcript variant x3、e),并将目的基因连入真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组质粒。重组质粒经鉴定正确后经脂质体介导转染BHK和N2a细胞,采用荧光显微镜观察及Western blot法检测转染细胞中Bif-1蛋白的表达。结果琼脂糖凝胶电泳可见与预期大小相符的核酸条带;重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定证明构建正确;重组质粒转染BHK或N2a细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;Westen blot可检出相应大小的目的条带。结论成功构建了鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中获得表达。为进一步探索Bif-1蛋白不同选择性剪接异构体的生物学功能,研究其在细胞自噬、细胞凋亡以及抗肿瘤等方面的作用奠定了基础。
2017年09期 v.30 906-911+916页 [查看摘要][在线阅读][下载 529K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王溪;贾硕;佟志敏;胡媛媛;金鹏;张红梅;
目的观察辐射后肺腺癌A549细胞的增殖情况,探讨其与细胞上清外泌体中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1表达的相关性。方法培养肺腺癌A549细胞,分别给予0、0.5、1.0、1.5、2.0 Gy剂量(剂量率1.75 Gy/time,300 Mu/min)辐射,辐射后培养6、12 h。采用CCK8法检测细胞增殖情况,收集细胞上清液,超速离心法提取外泌体,Western blot法检测外泌体膜蛋白GPC1的表达情况。结果辐射后A549细胞增殖能力减弱,与0 Gy组相比,各剂量组A450均减小,且随辐射剂量的增加,A450越来越小;各剂量组上清外泌体GPC1蛋白表达均减少(P<0.001)。结论放疗可抑制A549细胞的增殖,且随辐射剂量增加抑制作用越明显;随着增殖受抑制,肺腺癌A549细胞上清外泌体中GPC1蛋白表达减少。
2017年09期 v.30 912-916页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王欣卉;王颖;徐炳政;张东杰;佐兆杭;刘淑婷;宫雪;
目的测定酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)-1、MT-2体外抗氧化能力。方法以动物源金属硫蛋白(Zn-MT)为对照,测定酵母源MT对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS~+·)、羟基自由基(OH·)、超氧阴离子自由基(·O_2~-)的清除能力、总还原能力及抑制脂质体过氧化能力大小。结果 3种MT均对自由基有良好的清除能力,在20~100μg/ml范围内,酵母源MT-1、MT-2及Zn-MT随质量浓度的增加,对4种自由基的清除能力均不断增强,且增加趋势几乎一致;3种MT随质量浓度增加,对自由基清除能力的增率趋于平缓。3种MT对ABTS~+·、OH·、·O_2~-的清除能力差异有统计学意义(P<0.01),清除能力大小为Zn-MT>MT-1>MT-2;对DPPH自由基清除能力大小为Zn-MT>MT-1>MT-2,MT-2与Zn-MT及MT-1之间差异有统计学意义(P<0.01)。3种MT总还原能力随质量浓度的增加均不断增强,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间的IC_(50)值差异有统计学意义(P<0.01),总还原能力大小为Zn-MT>MT-1>MT-2。3种MT均可有效抑制脂质体过氧化的产生,并随质量浓度的增加对脂质体过氧化的抑制率平缓上升,除酵母源MT-1外,在60~100μg/ml浓度范围内,MT对脂质体过氧化抑制能力的增率小于20~60μg/ml范围,且Zn-MT抑制脂质过氧化的效果优于酵母源MT,其IC_(50)大小为Zn-MT>MT-1>MT-2,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论两种酵母源MT对体外自由基均有良好的清除效果及抑制脂质体过氧化的效果,显示出良好的体外抗氧化特性,且其体外抗氧化能力酵母源MT-1>MT-2。
2017年09期 v.30 917-923页 [查看摘要][在线阅读][下载 300K] [下载次数：263 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 董彬;王震;刘雁霞;孟德梅;樊振川;
目的原核表达及纯化莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT70,并制备其多克隆抗体。方法以质粒p GAD-ift70(含莱茵衣藻ift70基因N-末端编码380个氨基酸的核酸序列)为模板,分别构建带有6×His和MBP标签的原核表达质粒p ET-28A-ift70和p MAL-C2X-ift70,转入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达6×His-IFT70和MBP-IFT70融合蛋白,并进行亲和层析。将纯化的MBP-IFT70融合蛋白免疫2只新西兰大白兔,经耳动脉采血,分离血清,ELISA法测定抗体效价,经两步亲和纯化后进行Western blot及免疫荧光法分析。结果经双酶切及测序鉴定证明原核表达质粒p ET-28A-ift70和p MAL-C2X-ift70构建正确。6×His-IFT70和MBP-IFT70融合蛋白的相对分子质量分别为40 000和80 000,纯化后纯度可达90%。家兔1及家兔2抗血清的效价分别为>128 000及>256 000,纯化的抗血清可与莱茵衣藻IFT70蛋白发生特异性结合,于相对分子质量约70 000处可见特异性结合条带,可与野生型莱茵衣藻CC-125纤毛上的IFT70蛋白发生特异反应,荧光显微镜下可见红色荧光。结论成功制备了抗莱茵衣藻IFT70的多克隆抗体,为IFT70在IFT和纤毛组装中作用的深入研究奠定了基础。
2017年09期 v.30 924-930页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 寇芳;李文杰;沈蒙;宁冬雪;夏甜天;葛云飞;王维浩;曹龙奎;
目的自然发酵筛选对小米改性起主要作用的菌种,并对发酵菌株的特性进行分析。方法用培养基筛选小米自然发酵液中主要菌种,分离纯化后,进行菌株生理生化鉴定、26S r DNA、16S r DNA序列测定,菌株纯培养后的p H、微生物菌落数曲线绘制,发酵菌株有机酸含量检测,并对不同菌株的产酸、产胞外淀粉酶的能力进行检测。结果从自然发酵液中筛选出的菌种主要为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、芽孢菌(Bacillus)。植物乳杆菌在发酵12 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H迅速下降;戊糖片球菌及屎肠球菌在发酵24 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H迅速下降,培养40 h时戊糖片球菌的p H明显低于二者;酿酒酵母及芽孢菌在发酵36 h时菌落数达到生长的指数期,之后p H略有下降。相同时间内,戊糖片球菌的产酸能力>植物乳杆菌>屎肠球菌,而酿酒酵母和芽孢杆菌不具产酸能力;戊糖片球菌有较强的产酒石酸及乳酸的能力,植物乳杆菌具有产酒石酸及乳酸的能力,但弱于戊糖片球菌,而屎肠球菌有较强的产乳酸的能力;植物乳杆菌、戊糖片球菌、屎肠球菌、酿酒酵母不能产胞外淀粉酶,而芽孢杆菌具有较强的淀粉降解能力。结论确定了自然发酵小米中的主要菌种,为研究自然发酵小米淀粉老化特性等奠定了基础。
2017年09期 v.30 931-935+942页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K] [下载次数：419 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ]
- 李红;李亚南;石刚;陈琼;王春娥;唐静;陈翠萍;叶强;
目的对8、10A、11A及15B型肺炎链球菌荚膜多糖血清Ig G抗体定量ELISA检测方法进行验证。方法以第二代国际参考血清007sp为标准,检测国际参考血清89SF的8、10A、11A及15B型Ig G抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性(R~2)及最低检测限;以第二代国际参考血清007sp为标准,测定肺炎国际质控血清盘(12/278)共12份血清的各型抗体水平3次,以第一代国际参考血清89SF为标准,测定第二代国际参考血清007sp的各型抗体水平10次,计算回收率;连续测定质控血清2009S、QC5、QC6及第二代国际参考血清007sp的各型Ig G抗体各10次,计算变异系数(CV);利用质控血清920进行抑制试验,验证方法的特异性。结果国际参考血清89SF的8、10A、11A及15B型Ig G抗体的最低检测限分别为0.58、0.85、0.46及0.67 ng/ml,检测范围分别为0.15~35.60、0.13~32.50、0.05~12.70及0.17~42.40 ng/ml,线性R~2均>0.99;除10A型的准确度较低外(46.15%),8、11A及15B型均较高(分别为76.92%、84.62%及84.62%);连续10次测定质控血清2009S、QC5、QC6及国际参考血清007sp各型Ig G抗体的CV值为6.44%~18.19%;多糖抗原与血清抗体的反应具有特异性。结论该方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。
2017年09期 v.30 958-962页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K] [下载次数：410 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 屈哲;张硕;吕建军;霍艳;王雪;袁力勇;马霄;李波;
目的通过构建原代大鼠神经细胞混合培养模型,体外评价减毒活疫苗的神经毒力作用。方法取1~3日龄SD大鼠大脑组织,无菌分离获得神经细胞,于DMEM/F12培养基5%CO2培养箱培养7~9 d至混合培养体系稳定。Anti-MAP2、Anti-GFAP抗体免疫细胞技术鉴定神经元、星形胶质细胞。细胞分组:空白对照组,高、中、低剂量非疫苗对照组(β-淀粉酶和长春新碱)、麻疹减毒活疫苗组、腮腺炎减毒活疫苗组、吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(简称联合疫苗)组。CCK8增殖毒性试验检测细胞活力;免疫荧光标记GFAP、MAP2观察神经细胞形态学变化;ELISA法检测细胞培养上清中促炎性细胞因子TNFα、IL-1β、IL-6浓度。结果原代神经细胞混合培养体系由约50%GFAP(+)星形胶质细胞和约50%MAP-2(+)神经元组成。联合疫苗、长春新碱给药各时间点存在剂量效应关系,麻疹疫苗、腮腺炎疫苗未见细胞毒性。联合疫苗、长春新碱各剂量组神经细胞存活率降低,神经细胞胞体变形,核浆比增大;麻疹疫苗、腮腺炎疫苗各剂量组神经细胞密度和形态未见异常;β-淀粉酶各剂量组未见细胞毒性和形态学改变。联合疫苗和β-淀粉酶组神经细胞培养上清中IL-1β、TNFα浓度显著升高,麻疹疫苗组IL-6浓度显著升高。结论构建了原代大鼠神经细胞培养模型,可用于体外评价减毒活疫苗的神经毒力作用。麻疹和腮腺炎减毒活疫苗未见神经细胞毒性作用。联合疫苗、麻疹疫苗和β-淀粉酶作用于神经细胞与潜在的神经炎症反应发生相关。长春新碱可见神经细胞毒性作用,但未见促炎性细胞因子IL-1β、TNFα、IL-6的显著性改变。
2017年09期 v.30 963-968页 [查看摘要][在线阅读][下载 371K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 董国霞;田霖;晁哲;侯启明;马霄;
目的建立破伤风抗体体外结合ELISA检测方法,并进行初步验证。方法将破伤风疫苗免疫后获得的小鼠血清与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)在体外进行结合,将结合后的血清转移至已包被的酶标板中,分别加入二抗、酶标抗体和底物等进行检测,建立破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法。对建立的方法进行特异性、线性范围、检测限、重复性和准确性初步验证。结果建立的破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法的标准曲线在浓度为0.016~1 U/ml之间时,可获得最佳线性,相关系数R=0.999 8;检测限为0.009 U/ml;与白喉-百日咳抗体无交叉反应;重复性验证中高浓度和低浓度质控血清的变异系数(CV)分别为4.467%和5.419%;准确性验证中高浓度和低浓度质控血清的相对偏差分别为-8.03%和-14%。结论建立的破伤风抗体体外结合ELISA检测方法具有良好的特异性、重复性和准确性,为破伤风疫苗效价检测新方法的建立奠定了基础。
2017年09期 v.30 969-972+976页 [查看摘要][在线阅读][下载 199K] [下载次数：488 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 毕华;郭莹;刘兰;李永红;丁有学;饶春明;
目的建立新型胃癌治疗性疫苗的细菌内毒素检查方法。方法依据《中国药典》三部(2015版)通则1143细菌内毒素检查法,使用细菌内毒素分散剂消除供试品的干扰作用,检测新型胃癌治疗性疫苗的细菌内毒素含量。结果新型胃癌治疗性疫苗在使用细菌内毒素分散剂稀释2倍后,对细菌内毒素实验无干扰作用,其细菌内毒素限值符合规定。结论所建立的方法可用于该新型胃癌治疗性疫苗的细菌内毒素检查,该方法对同类产品的细菌内毒素检查具有借鉴意义。
2017年09期 v.30 973-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K] [下载次数：273 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 谭亚军;杨邦玲;肖詹荣;潘海龙;田霖;刘亚丽;张建灵;曲芙莲;董国霞;晁哲;侯启明;马霄;
目的建立第三批吸附白喉类毒素国家标准品,用于效价测定。方法选用白喉疫苗生产菌株(PW8,CMCC38007),经复苏传代和产毒培养后,收获白喉毒素,采用先精制后脱毒的方法获得精制白喉类毒素原液,再加入氢氧化铝吸附后分装冻干,作为备选品。按《中国药典》三部(2010版)要求对原液和冻干品进行检定。以WHO国际标准品(07/216)和中国国家标准品(002)为标准,采用小鼠Vero细胞法在3个实验室进行协作标定。结果该批标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定;经协作标定,获得的20个效价单位标定结果合并统计后几何均值为289.3 IU/ml,95%可信区间为276.0~303.2;同时用WHO国际标准品(07/216)和中国国家标准品(002)进行标定比较,两者差异无统计学意义(P>0.05);标准品效价稳定性考核结果证明,我国白喉类毒素国家标准品在保存期内效价稳定。结论所制备的标准品各项指标均符合要求,其效价定为289.3 IU/支,可作为第三批吸附白喉类毒素国家标准品用于效价测定。
2017年09期 v.30 977-980+985页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K] [下载次数：226 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 高帆;毛群颖;卞莲莲;姚昕;张洁;徐苗;梁争论;
<正>近年来,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)引起的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)已成为我国严重的公共卫生问题~([1-2])。为防控EV71引起的严重HFMD流行,在国家科技支撑项目和重大新药项目的支持下,历经8年攻关,由中国医学科学院医学生物学研究所(简称昆明所)和北京科兴生物制品有限公司(简称科兴公司)研发的创新型
2017年09期 v.30 990-992页 [查看摘要][在线阅读][下载 123K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 李丽莉;白东亭;
<正>免疫组织化学(immunohistochemistry,简称免疫组化)技术于20世纪70年代逐渐应用于病理诊断。在常规肿瘤病理诊断中,应用HE染色进行形态学诊断,准确率较低且局限性大,而免疫组化技术可大大提高肿瘤病理诊断及鉴别诊断的准确率(约50%~70%)~([1])。目前,免疫组化技术准确、快速的特点使其逐步在临床病理诊断中得到普遍认可和广泛应
2017年09期 v.30 993-998页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K] [下载次数：340 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 毛群颖;高帆;卞莲莲;姚昕;梁争论;
<正>甲型肝炎(以下简称甲肝)是由甲肝病毒(hepatitis A virus,HAV)引起的急性自限性疾病,患者以低龄儿童为主。HAV在人群中主要通过粪口途径传播,全球每年约有150万人罹患甲肝~([1])。接种甲肝疫苗是预防和控制甲肝流行的最有效措施。首支甲肝灭活疫苗于1992年上市,已在多个国家纳入儿童计划免疫,明显地降低了甲肝的暴发和流行~([2])。
2017年09期 v.30 999-1002+1008页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K] [下载次数：567 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 温岚;李峰;杨宇;姚昱旻;
<正>生物医药作为《中国制造2025》重点发展领域之一,迎来了国家政府全面支持发展的重大机遇。基因检测属于生物医疗领域,是指为了检测与基因型、基因突变、表型或核型有关的遗传病,对个体DNA、RNA、染色体、蛋白质和某种代谢产物进行分析,基因检测与人类健康息息相关~([1])。本文采用In Copat、SIPO等专利检索与分析工
2017年09期 v.30 1003-1008页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] 下载本期数据