- 崔春博;刘春雨;武刚;徐刚领;杜加亮;崔永霏;俞小娟;喻钢;杨雅岚;王兰;
目的 对帕妥珠单抗关键质量控制项目进行趋势分析，为单抗药物的质量评价及监督提供依据。方法 通过建立警戒线（■±2 SD）、行动限（■±3 SD）和绘制趋势分析图，对中国食品药品检定研究院（National Institutes for Food and Drug Control,NIFDC）及企业质控实验室2019—2022年89批帕妥珠单抗的生物学活性、蛋白质含量、单体含量、p H等质量控制项目进行趋势分析和统计学分析。结果 NIFDC与企业生物学活性均值分别为（1.06±0.15）×10~4U/mg和（1.04±0.06）×10~4U/mg；蛋白质含量均值分别为（30.57±0.49)mg/m L和（30.84±0.20)mg/m L；分子排阻色谱单体峰面积均值分别为（99.80±0.00）%和（99.80±0.01)%;p H均值分别为6.06±0.06和6.07±0.04。对上述结果进行连续性趋势分析，总体趋势较平稳。结论 对帕妥珠单抗的部分关键质量属性的趋势分析，间接反映出该制品生产工艺稳定、批间一致性良好。趋势分析可有效对单抗药物生产和质量控制起到监测和提示作用。
2024年11期 v.37 1319-1326页 [查看摘要][在线阅读][下载 1072K] [下载次数：164 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：22 ] - 王勇;吴运桥;邓任强;靳宜静;
目的 探讨白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞T98G增殖、黏附、迁移、侵袭、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导和转录启动因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路的调控作用，为白藜芦醇治疗脑胶质瘤的相关研究提供理论依据。方法 体外培养T98G细胞，分为对照组（不干预）、试验组（12.5、25、50μmol/L白藜芦醇）、阳性药物组（50 mg/L 5-氟尿嘧啶）、抑制剂组（50μmol/L白藜芦醇+50μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490）和激活剂组（50μmol/L白藜芦醇+0.5μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂colivelin），干预24 h。采用活细胞计数（CCK-8）、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）、黏附试验、划痕试验、Transwell小室及Western blot法对细胞活力、增殖率、黏附能力、迁移能力、侵袭能力、EMT及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达水平进行分析。结果 与对照组比较，12.5、25μmol/L白藜芦醇组细胞活力无显著变化（t分别为1.501和2.167,P> 0.05）,50μmol/L白藜芦醇组和阳性药物组细胞活力显著降低（t分别为7.918和8.020,P <0.05）,12.5、25μmol/L白藜芦醇组较阳性药物组细胞活力显著升高（t分别为6.519和5.853,P <0.05）,50μmol/L白藜芦醇组细胞活力接近50%且与阳性药物组差异无统计学意义（t=0.102,P=0.921）。与对照组相比，50μmol/L白藜芦醇组和阳性药物组T98G细胞增殖率、黏附、迁移、侵袭能力及N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、纤维黏连蛋白（fibronectin,FN）及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均显著降低（t=4.090～28.510,P <0.05），而E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平显著增加（t分别为16.782和17.291,P <0.05）。与50μmol/L白藜芦醇组相比，抑制剂组T98G细胞增殖率、黏附、迁移、侵袭能力、N-cadherin、Vimentin、FN及pJAK2和p-STAT3蛋白表达水平均显著下降（t=3.801～17.980,P <0.05），而E-cadherin蛋白表达水平显著升高（t=15.256,P <0.05）；激活剂组T98G细胞增殖率、黏附、迁移、侵袭能力、N-cadherin、Vimentin、FN及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均显著升高（t分别为4.235～27.951,P <0.05），而E-cadherin蛋白表达水平显著下降（t=14.748,P <0.05）。结论 白藜芦醇可显著抑制T98G细胞增殖、黏附、迁移及侵袭，其作用机制可能与通过抑制JAK2/STAT3通路的信号转导进而抑制EMT进程相关。
2024年11期 v.37 1327-1333页 [查看摘要][在线阅读][下载 1066K] [下载次数：236 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ]
- 鲁卫卫;刘善茹;郭会杰;郝春生;王潇潇;吴蕴怡;张中洋;李秀玲;
目的 建立柯萨奇病毒A组（Coxsackievirus A,CV-A）6型抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证及初步应用，以用于CV-A6生产过程和四价手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）疫苗的质量控制。方法 分别以纯化的CV-A6羊多抗作为包被抗体、小鼠抗CV-A6单抗作为检测抗体，进行配对筛选研究，建立CV-A6抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法，并对试验条件进行优化。对方法的线性、范围、专属性、准确性、精密性、耐用性进行验证。采用建立的方法检测CV-A6抗原生产过程样品和成品抗原含量。结果 羊多抗和单抗16D1-1E5具有中和抗体活性，其他3株单抗均无中和抗体活性；所有抗体的ELISA效价均不低于1.00×105；除单抗2B6-4F9为IgG3亚型外，其他3株单抗均为IgG2a亚型。以羊多抗作为包被抗体、单抗16D1-1E5作为检测抗体进行配对，可用于方法的建立。确定包被抗体的稀释比例为1∶2 000～1∶6 000，检测抗体的稀释比例为1∶4 000～1∶6 000。建立的CV-A6抗原定量检测方法线性范围为0.664～21.263 U/mL，线性R2≥0.99；该方法仅能特异性检测CV-A6抗原，与CVA10、CV-A16和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV-71）抗原无交叉反应，生产过程中可能存在的M199、DMEM、Vero细胞蛋白、牛血清蛋白对方法测定无干扰；该方法测定高（21.00 U/mL）、中（10.50 U/mL）、低（1.70 U/mL）浓度样品的测定值/理论值在95%～105%之间，相对标准偏差在15%以内；在0.664～21.263 U/mL范围内，线性R2≥0.99，测定值/理论值在95%～105%之间，精密性验证相对标准偏差在15%以内；该方法在不同孵育温度（35、37、39℃）下测定样品的准确性和精密性无差别。采用建立的方法检测CV-A6抗原生产过程样品及成品抗原含量，可有效反映工艺过程样品及成品抗原浓度变化趋势。结论 建立了CV-A6抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法，该方法线性、范围、专属性、准确性、精密性、耐用性均较好，可用于CV-A6抗原工艺过程和成品的质量控制，为CV-A6抗原的体外效力评价奠定了基础。
2024年11期 v.37 1341-1348页 [查看摘要][在线阅读][下载 957K] [下载次数：290 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：11 ] - 王光裕;于雷;史新昌;周勇;
目的 以重组人单纯疱疹病毒-1(recombinant human herpes simplex virus-1,rhHSV-1)作为溶瘤病毒，建立溶瘤病毒选择增殖活性测定方法，并进行优化及验证，以期用于溶瘤病毒相关制品的质量评价。方法 将rhHSV-1按相同的MOI分别感染正常细胞及肿瘤细胞，培养一段时间后，提取病毒核酸，以其为模板进行qPCR扩增，获得病毒基因组拷贝数，计算病毒增殖比值，以其作为选择增殖活性的评价指标。优化方法中的细胞种类（正常细胞为MRC-5及HEK-293，肿瘤细胞为Hep3B及Fadu）、MOI(0.1、0.01、0.001、0.000 1、0.000 01)、培养时间（2 h及2、3、4 d），并验证方法的精密性及专属性。采用优化的方法检测溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的选择增殖活性。结果 以Hep3B作为肿瘤细胞、MRC-5作为正常细胞时，rhHSV-1的增殖效果最佳，最适MOI为0.000 1，最佳培养时间为72 h。采用优化的方法重复3次检测rhHSV-1的增殖比值分别为260.68、336.65及259.14，均> 100,CV为15.52%；采用优化的方法检测rhHSV-1可见明显扩增，检测人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）和5型腺病毒（adenovirus 5,Ad5）未见明显扩增。溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的增殖比值为727。结论 建立的用于检测rhHSV-1选择增殖活性的方法具有良好的精密性及专属性，可用于溶瘤病毒选择增殖活性的评价。
2024年11期 v.37 1349-1353页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K] [下载次数：73 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 胡小华;付泓斌;王国东;刘益豪;朱卫华;杜琳;
目的 为评价痢疾双价结合疫苗的免疫效果，建立痢疾血清抗体特异性体外血清杀菌试验（serum bactericidal assay,SBA）方法，并进行验证。方法 参考美国阿拉巴马大学研究的痢疾特异性SBA方法，进行菌种鉴定及工作菌库的构建、冻存工作菌复活率测定、补体筛选，建立本实验室痢疾血清抗体特异性SBA方法，并对方法的精密性、特异性、线性、耐用性进行验证。采用建立的方法对20对痢疾临床血清样本进行SBA检测。结果 确定菌株分别为福氏2a志贺菌（S.flexneri 2a）和宋内志贺菌（S.sonnei），成功构建了工作菌库，2个血清型工作菌冻存2 h以上冻存复活率分别为92%和94%，冻存6个月冻存复活率分别为91%和96%；确定工作稀释度均为20 000，在该稀释度下，存活的菌数分别为115和109 CFU/spot。2批（07634EL和011834EL）补体均可作为工作补体。该方法重复性变异系数（CV）<30%，试验间CV <50%，表明方法的重复性和中间精密性较好；两种血清型的杀菌滴度在同源痢疾多糖浓度分别为50和40μg/mL时达到完全抑制，而异源痢疾多糖浓度即使增加至200μg/mL，抑制均仍低于20%，表明方法的特异性较好；两种血清型杀菌滴度的对数值与起始稀释倍数的对数值均呈显著负相关，R2分别为0.997 4、0.996 2。福氏2a志贺菌、宋内志贺菌抗体杀菌滴度与免疫前相比均明显增加。结论 成功建立了标准化的痢疾特异性抗体体外SBA方法，此方法可用于评价痢疾双价苗的免疫效果。
2024年11期 v.37 1354-1360+1366页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：13 ] - 郭莹;李响;毕华;裴德宁;李学普;秦玺;陶磊;史新昌;杨靖清;周勇;
目的 建立重组蛋白药物罗米司亭中聚山梨酯80含量高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）-电雾式检测器（charged aerosol detector,CAD）检测方法，并对方法进行验证及初步应用，以期为重组蛋白药物制剂的质量控制提供参考。方法 通过对流动相的筛选以及方法洗脱梯度和CAD参数的优化建立聚山梨酯80含量的HPLC-CAD方法，并对方法的专属性、重复性、准确性进行验证，确定方法的检测限、定量限和线性范围。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中的聚山梨酯80含量。结果 方法优化后的色谱条件如下：色谱柱为Acclaim Surfactant Plus(150 mm×4.6 mm,3μm)；流动相A为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B为含0.1%甲酸的异丙醇；洗脱梯度为0 min 80%A,1.8 min 80%A,2.0 min 66.5%A,3.0 min 66.5%A,3.5 min 0%A,8.5 min 0%A,9.0 min 80%A,15.0 min 80%A；流速为0.6 mL/min；进样量为10μL；柱温为25℃；CAD雾化温度为50℃，幂律函数值（power function value,PFV）为1.25。该方法样品基质和空白溶液中无其他色谱峰干扰；检测低（10 mg/L）、中（50 mg/L）、高（80 mg/L）浓度聚山梨酯80峰面积的RSD分别为4.32%、1.97%和3.46%，平均加标回收率分别为95.7%、99.0%和98.9%；聚山梨酯80在浓度5.0～100.0 mg/L范围内具有良好的线性关系（R2=1.000 0），方法的检测限和定量限分别为1.0和2.0 mg/L。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中聚山梨酯80含量分别为33.20和32.28 mg/L。结论 建立的罗米司亭中聚山梨酯80含量HPLC-CAD检测方法灵敏度高，专属性、重复性、准确性良好，可用于重组蛋白药物质量控制过程中聚山梨酯80含量的检测。
2024年11期 v.37 1361-1366页 [查看摘要][在线阅读][下载 872K] [下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：22 ] - 何亮;徐海燕;申瑷琳;石艳红;罗敏;施金荣;
目的 建立口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）中蔗糖含量的高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）检测方法，并进行验证，以期为以蔗糖为辅料疫苗中蔗糖含量的测定提供可靠的方法。方法采用HPLC法测定口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）中蔗糖含量，色谱柱为Luna~?5μm NH_2 100?（LC Colum 250 mm×4.6 mm），示差检测器温度为30℃，流动相为乙腈，流速为0.5 mL/min，进样体积为10μL，柱温箱温度为30℃。验证方法的系统适用性、专属性、线性范围、精密性、准确性及耐用性。同时对HPLC法与旋光度法测得供试品中蔗糖含量结果的一致性进行比较。结果 系统适用性溶液中乳糖和蔗糖的分离度良好，乳糖不干扰蔗糖的含量测定；枸橼酸、枸橼酸钠、氯化锌氯化钙混合物对蔗糖含量测定无干扰；蔗糖浓度在6～14 mg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，线性方程为：y=142 189 x+2 182.4，相关系数（r）=0.999 9；重复性及中间精密性验证相对标准偏差（RSD）分别为0.55%和0.49%;80%、100%、120%浓度样品平均回收率均在99%～101%之间；流速、柱温、流动相比例、检测器温度发生微小变动或更换不同批号色谱柱对检测结果无影响，与原条件测得供试品蔗糖含量的相对偏差（RD）均<1%。采用HPLC法与旋光法测得多批供试品中蔗糖含量的RD均<1%。结论 建立的HPLC法具有良好的专属性，精密性、准确性及耐用性，可用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）中蔗糖含量的检测。
2024年11期 v.37 1367-1372页 [查看摘要][在线阅读][下载 885K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：17 ]