- 张佶;罗忠瑞;何春艳;茶青卿;刘野;
目的 构建一种基于铁基金属有机框架（metal organic framework,MOF）材料，并探讨其作为佐剂在小鼠体内对免疫反应的影响。方法 利用水热反应合成法合成铁基MOF材料，采用透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）、扫描电子显微镜（scanning electron microscope,SEM）、动态光散射粒度分析仪（dynamic light scattering particle analyzer,DLS）、X射线光电子能谱仪（X-ray photoelectron spectrometer,XPS）、比表面积分析测试仪（Brunauer Emmett Teller,BET）对材料的形貌和成分进行表征。以卵清蛋白（ovalbumin,OVA）为免疫原，将20只雌性BALB/c小鼠随机分为铁基MOF+OVA组（60μg铁基MOF+20μg OVA）、铝佐剂（Alu）+OVA组（50μg Alu+20μg OVA）、OVA组（20μg OVA）、空白组（0.9%生理盐水），分别于0、14、28 d经大腿外侧肌内注射，100μL/只。初次免疫后7、21、42 d经小鼠尾静脉采血，分离血清，ELISA法检测特异性IgG抗体水平；初次免疫后42 d,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG亚型抗体水平，ELISPOT法检测小鼠脾细胞分泌IFNγ的情况，流式细胞术检测小鼠脾CD4~+和CD8~+T细胞分泌IFNγ、IL-2和IL-4的水平。分别测量初次免疫后0、7、14、21、28、35、42 d的小鼠体质量，并观察各组小鼠的行为。结果 合成的铁基MOF材料均呈均一类圆形，水合粒径约129.4 nm；含有C、N、S和Fe元素，且Fe元素含量较多；比表面积为16.7 m~2/g，孔径为7.73 nm。初次免疫后42 d，与Alu+OVA组比较，铁基MOF+OVA组IgG抗体水平差异无统计学意义（F=1.00,P > 0.05）,IgG2a和IgG2b抗体水平显著升高（F分别为16.90和16.57,P均<0.05）；脾细胞分泌IFNγ水平显著升高（F=19.47,P均<0.05）;CD4~+T细胞分泌IFNγ的水平显著升高（F=14.94,P<0.01），但CD8~+T细胞分泌IFNγ水平差异无统计学意义（F=1.00,P > 0.05）,CD8~+T细胞分泌IL-2和IL-4水平均显著升高（F分别为100.00和945.80,P均<0.001）。免疫过程中小鼠未出现脱毛或拒食等异常行为，各组小鼠体质量变化较小。结论 制备的铁基MOF材料易于合成，结构稳定，具备纳米级别的尺径，可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答，有望成为一种新型疫苗佐剂。
2025年09期 v.38 1035-1042页 [查看摘要][在线阅读][下载 1003K] [下载次数：225 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨雅雯;程玮;靳莉武;张震宇;杨迪;王家敏;陈建国;乔自林;
目的 对人胚肺细胞系MU-L2、转染SV40-LT基因的MU-L2细胞系MU-SVL2与国际上已建立的人胚肺细胞系MRC-5的生物学特性进行比较，以期将MU-L2细胞系应用于生物医学研究及疫苗生产。方法 采用含10%NBS的MEM培养基培养MU-L2、MU-SVL2、MRC-5细胞，并按《中国药典》三部（2020版）的要求进行传代。镜下观察3种细胞的生长特性，CCK-8法检测细胞的增殖能力，qPCR法检测相对端粒长度，软琼脂克隆形成试验分析细胞成瘤性，吉姆萨染色核型分析法检测染色体的稳定情况，并进行比较。结果 培养72 h后，3种细胞均长成致密单层，细胞呈现典型的漩涡状排列形态，生长状态良好；MU-L2、MU-SVL2细胞在培养3～6 d时增殖速度显著高于MRC-5细胞（F=1.893,P<0.05）；随着代次的增加，相对端粒长度随之缩短，且MU-L2、MU-SVL2细胞相对端粒长度均长于相近代次的MRC-5细胞；3种细胞均未见细胞集落形成，且均属于正常人二倍体核型。结论 MU-L2及MU-SVL2细胞增殖能力强、端粒稳定性更佳、无成瘤性且染色体稳定，有望应用于生物医学研究和疫苗生产。
2025年09期 v.38 1043-1048+1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 927K] [下载次数：44 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 吴雪伶;樊金萍;范珊珊;赵翔;孟淑芳;
目的 建立细胞种属鉴别DNA条形码法，对方法的适用性进行分析并进行验证，以用于生物制品生产用细胞的种属鉴别。方法 以线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1(cytochrome C oxidase subunit 1,COI)基因为靶基因，选取2套引物（V和L引物）针对靶基因进行特异性扩增，对扩增产物进行测序，并将测序结果与数据库进行比对，确定待测细胞种属。结果 2套引物对不同种属的细胞扩增能力不同，V和L引物均可成功用于小鼠、仓鼠、豚鼠、地鼠、土拨鼠、猫、牛、鸡和鸭来源的细胞检测，V引物还可用于猴、大鼠、犬、水貂、猪、兔和人来源的细胞检测，L引物还可用于昆虫来源的细胞检测。该方法检测灵敏度可达到10个细胞，当主细胞与污染细胞比例达到10∶1时可检测到交叉污染。4家复核验证单位均可利用该方法成功鉴定8种未知细胞的种属。结论 建立的DNA条形码法可成功用于17个物种来源细胞的种属鉴定，为确保生物制品生产用细胞的正确使用提供了新的技术手段。
2025年09期 v.38 1056-1062+1071页 [查看摘要][在线阅读][下载 936K] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 李雅静;高帆;徐艳玲;张旋旋;贺倩;李娜;王茜;刘明琛;王颖;李璐;吴星;李秀玲;马霄;
目的 基于ICH Q2(R2)和Q14，建立冻干甲型肝炎减毒活疫苗（简称冻甲疫苗）感染性滴度细胞培养-RT-qPCR快速检测方法，并对方法进行优化及验证。方法 采用分析质量源于设计（Analytical Quality by Design,AQbD）理念，通过分析目标概况（Acceptance Test Procedure,ATP）设定、风险识别与实验设计（Design of Experiment,DoE），建立细胞培养-RT-qPCR联合检测平台。以病毒核酸扩增循环阈值（cycle threshold,Ct）为响应指标，优化细胞密度、病毒培养温度和时间等关键参数。验证方法的专属性、线性、中间精密度，确定定量范围，Bland-Altman分析与传统滴度检测方法的一致性。结果 共识别13个主要风险因素，确定方法的最适反应条件为：细胞密度（1～2）×10~5个/mL；病毒稀释梯度间距4倍；96孔细胞培养板有边缘效应；病毒吸附温度和时间为37℃吸附60 min，病毒培养温度和时间为35℃培养72 h;PCR无位置效应；变性温度和时间为90℃变性63 s；逆转录温度和时间为60℃逆转录15 min；计算模型为双对数线性模型。该方法具有良好的专属性（灭活病毒对照Ct值> 28）、线性（R~2=0.966）及中间精密度[几何变异系数（geometric coefficient of variation,GCV）≤9.28%]，定量范围覆盖5.0～8.0 lgCCID_(50)/mL。该方法与传统方法检测结果差值的95%一致性界限（95%limits of agree-ment,95%LoA）为-0.06～0.41 lgCCID_(50)/mL。结论 建立的细胞培养-RT-qPCR检测方法将检测周期由传统方法的21～28 d缩短至3 d，且具有定量准确、通量高等优势，为冻甲疫苗工艺过程中及成品甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）滴度检测和批签发效率提升提供了关键技术支持。
2025年09期 v.38 1063-1071页 [查看摘要][在线阅读][下载 1059K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王绿音;孙铭健;李懿;张孝明;胡馨月;吕萍;梁成罡;李晶;
目的 建立并验证重组人葡萄糖脑苷脂酶（recombinant human glucocerebrosidase,rhGCase）酶活性的生色底物测定方法，以期用于rhGCase及其他重组酶替代疗法（enzyme replacement therapy,ERT）酶类产品的酶活性评价。方法 基于酶反应动力学原理建立用于检测我国自主研发的rhGCase药物CAN103酶活性的生色底物法，并优化底物溶液浓度（0.125、0.375、1.000、2.000、3.500、6.250、8.500、10.000、12.500 mmol/L）、酶稀释倍数（16 000、4 000、1 000、500、400、300、200、100倍稀释）、反应时间（2、5、10、12、15、18、20、30 min）、稀释缓冲液pH(3.0、4.0、5.0、5.5、5.9、6.2、6.5、7.0、8.0)，验证方法的精密性、准确性、线性范围、对硝基酚的检测范围、耐用性、稳定性、专属性。采用建立的方法检测3批注射用伊米苷酶和3批注射用维拉苷酶α的酶活性。结果 确定最佳底物溶液浓度为15 mmol/L，酶稀释倍数为300倍，反应时间为12 min，稀释缓冲液pH为5.9。精密性验证CV均<10%;50%、75%、100%、150%及200%共5个相对浓度CAN103样品的回收率均在95%～105%范围内；供试品溶液的酶促反应速率测定值在50%～200%，相对浓度（1.67～6.67μg/mL）范围内，与理论值呈良好的线性关系，线性方程为Y=0.928 6 X+0.411 0,R~2=0.999 9；对硝基酚在0.01～0.20 mmol/L浓度范围内可被准确定量；耐用性验证CV均<5%；供试品溶液可于2～8℃存放48 h；稀释缓冲液和制剂缓冲液对检测结果无影响。批号为CW3060、CW3493、CW4109的注射用伊米苷酶的比活性分别为42.32、43.08、40.77 U/mg，批号为TVWE04A02、TVVA01A02、TVVA01A01的注射用维拉苷酶α的比活性分别为42.58、41.26和41.41 U/mg。结论 建立的生色底物法具有良好的精密性、准确性和耐用性，可用于注射用rhGCase酶活性的测定。
2025年09期 v.38 1072-1078页 [查看摘要][在线阅读][下载 861K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘艳;周蓉;邹文琪;罗敏;程小玲;申瑷琳;王梅珂;李榆杨;胡忠玉;施金荣;
目的 建立轮状病毒（rotavirus,RV）疫苗病毒滴度半数荧光灶形成量（50%fluorescence focus dose,FFD_(50)）检测方法，并进行验证，为多价RV减毒活疫苗病毒滴度检测的应用奠定基础。方法 在96孔板贴壁培养MA104细胞，接种10倍系列稀释的RV培养后，80%冷丙酮固定风干，用特异性单克隆抗体与荧光抗体孵育，在细胞成像多功能监测系统下观察荧光灶，计算病毒滴度。比较不同的病毒接种量、接种病毒后不同的培养时间以及检测用荧光抗体的稀释倍数，确定最佳试验条件。对建立的方法进行专属性、精密度、准确度和耐用性验证，并用于六价RV疫苗成品病毒滴度的检测。结果 病毒接种量100μL培养3 d，用1∶250稀释的特异性荧光抗体检测，RV感染细胞后的荧光灶清晰可见；该方法仅在供试品与特异性荧光抗体血清型相同时产生荧光；6个血清型RV疫苗单价原液和1批RV疫苗成品重复检测6次，组内相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）均<5%，同一样品不同实验人员检测的RSD<5%;3种不同浓度（10~1～10~3）的同一样品，回收率分别为98.47%、97.12%和96.24%；增加或减少荧光抗体孵育时间，组内和组间RSD均<5%。该方法可用于六价RV疫苗成品病毒滴度的检测。结论 初步建立了检测RV疫苗病毒滴度的FFD_(50)法，该方法专属性强，精密度、准确度和耐用性良好，可用于多价RV减毒活疫苗病毒滴度的检测。
2025年09期 v.38 1079-1085+1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 953K] [下载次数：70 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张旭凡;王辉;
目的 建立定量检测单克隆抗体中N-糖谱分布的亲水相互作用超高效液相色谱（hydrophilic interaction ultrahigh performance liquid chromatography,HILIC-UPLC）RapiFlior-MS荧光检测法，并进行验证。方法 采用GlycoWorks RapiFluor-MS N糖分析试剂盒，用N-糖苷酶（PNGase F）和衍生试剂对N糖链快速酶切释放，再对游离N糖进行标记衍生，最后经UPLC进行分离检测：激发波长265 nm，发射波长425 nm，进样量10μL，柱温60℃。按峰面积归一化法计算，各N糖型峰面积占所有峰面积之和的百分比即为该N糖的相对百分含量。对建立的方法进行系统适用性、专属性、线性及范围、定量限、精密度、准确度、溶液稳定性和耐用性验证。用建立的方法检测6批单克隆抗体的N-糖谱分布。结果 建立的方法系统适用性、专属性良好，抗体浓度在0.002～5.2 mg/mL范围内，糖型G0F标准曲线线性较好，R~2> 0.99；定量限为0.09%；中间精密度验证中，G0F的相对百分含量的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.33%；准确度验证中，G0F、G1Fa、G1Fb、G2F各N糖型的回收率在90%～110%范围内；抗体原液在（5±3）℃放置48 h，各糖型相对百分含量的RSD均≤2.0%；对色谱柱批次、流动相pH、柱温、试剂盒批次均具有一定的耐用性。6批抗体原液中，G0F、G1Fa、G1Fb相对百分含量的RSD均<5.0%,G2F相对百分含量的RSD<10.0%，生产过程工艺稳定，批间一致性良好。结论 建立的GlycoWorksRapiFluor-MS N糖分析试剂盒检测抗体中N-糖谱分布的方法专属性强，系统适用性、精密度、准确度、耐用性、稳定性良好，可用于抗体研发及生产过程中N-糖谱的监测。
2025年09期 v.38 1086-1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张小刚;张秀华;於怀龙;刘英梅;郭新艳;安杨;李兆明;刘飞;
目的 筛选针对人缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)不同结合位点的单克隆抗体，并建立Cx43蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法，以期应用于全长及截短Cx43蛋白结构、功能及其亚细胞定位的深入研究。方法 采用生物信息学方法分析人Cx43蛋白序列，设计并合成针对不同结构域的多肽片段，偶联血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）作为免疫原免疫15只雌性BALB/c小鼠。通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌抗Cx43蛋白单克隆抗体的细胞株。采用Protein G亲和层析纯化抗体，并鉴定其亚型、亲和力及特异性。以2株高亲和力单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体（用HRP标记），建立双抗体夹心ELISA检测方法，并优化方法的封闭液（5%牛奶-PBS、3%BSA-PBS）、清洗液[0.01 mol/L PBS(pH 7.2)、0.01 mol/L PBS-0.5%Tween 20(pH 7.2)（即PBST）]、样品稀释液[3%BSA-PBS及0.01 mol/L PBS(pH 7.2)]，验证方法的线性范围及灵敏度、专属性、精密度、准确度。采用建立的方法检测小鼠脑组织、肠组织、股骨组织、MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞裂解液中的Cx43蛋白含量。结果 共筛选获得3株稳定分泌抗Cx43单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1-1E2、2-1G11和3-2G12，抗体亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2b，抗体灵敏度均达0.002μg/mL，其中2-1G11和3-2G12高亲和力更高。以2-1G11为捕获抗体、HRP标记的3-2G12为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA法。最佳封闭液为3%BSA-PBS，清洗液为PBST，样品稀释液为0.01 mol/L PBS(pH 7.2)。Cx43蛋白标准品浓度在3.12～200 ng/mL范围内，与A_(450)均值呈良好的线性关系，R~2> 0.98；该方法可特异性检出Cx43蛋白，与KLH蛋白、重组人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及重组人谷氨酰胺转氨酶2(transglutaminase 2,TGM2)均无交叉反应；精密度验证CV为7.72%；高、中、低3个浓度供试品的回收率均在85%～115%范围内。MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞中Cx43蛋白含量较高（58.03 ng/mL），小鼠成骨组织中Cx43蛋白含量较低（38.4 ng/mL）。结论 成功制备了针对人Cx43不同结合位点的特异性单克隆抗体，并建立了灵敏度高、特异性强的双抗体夹心ELISA定量检测方法，为Cx43蛋白的结构与功能研究提供了可靠的检测方法。
2025年09期 v.38 1094-1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 1081K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李秋睿;康远航;张慧影;李春雷;丛丹;陈锡铜;陶大伟;徐艳玲;
目的 优化冻干甲型肝炎（简称甲肝）减毒活疫苗纯化工艺，以提高疫苗的质量和安全性。方法 优化甲肝病毒（hepatitis A virus,HAV）收获物抽提次数（6次）和离心力（2 990、4 070、5 316、6 728×g），检测不同抽提次数和离心力下的病毒滴度。将抽提液混匀，检测超滤前三氯甲烷残留量；使用截留相对分子质量为300 KD的膜包进行超滤浓缩，检测原液三氯甲烷残留量、蛋白质含量及病毒滴度及膜下病毒含量。分别采用两种工艺制备原液，取样检测病毒滴度、蛋白质含量和三氯甲烷残留量。结果 随着抽提次数的增加，抽提上清液的病毒滴度呈递减趋势，前4次抽提上清液的病毒滴度平均值均大于7.00 lgCCID_(50)/mL，第5和6次均小于7.00 lgCCID_(50)/mL，选择病毒收获物抽提次数为4次；4组不同离心条件制备的原液病毒滴度均值在8.11～8.39 lgCCID_(50)/mL范围内，差异无统计学意义（F=1.319,P=0.334）。使用300 KD的膜包进行超滤浓缩，膜下病毒检测均为阴性；三氯甲烷残留量显著降低（t=4.975,P=0.037），原液病毒滴度和蛋白质含量检测结果均在合格范围内。优化前、后工艺制备的原液病毒滴度及三氯甲烷残留量差异均无统计学意义（t分别为-0.970和2.306,P分别为0.369和0.082），但优化后工艺制备的原液三氯甲烷残留量低于优化前工艺；两种工艺制备的原液蛋白质含量稳定，远低于内控合格标准。结论 成功对冻干甲肝减毒活疫苗的纯化工艺进行了优化，进一步提高了疫苗质量。
2025年09期 v.38 1101-1104+1110页 [查看摘要][在线阅读][下载 847K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 王瑜;孔维臣;王玉霞;
人血小板裂解液（human platelet lysate,HPL）是一种含有丰富的诱导细胞增殖的生长因子和修复相关生物活性物质的新型生物材料，在促进组织修复、细胞增殖、炎症控制等方向被广泛研究。本文主要介绍了HPL在多领域的发展，其应用范围已远超出传统血液制品的临床应用；通过总结HPL在再生医学、细胞治疗以及干细胞培养等领域的应用，分析了其发展潜力及优势；同时针对国内外关于HPL的制备标准尚未进入标准化流程，通过对原材料来源、控制标准、制备工艺等关键要素的阐述，为后续HPL制备的标准化工艺提供参考。
2025年09期 v.38 1105-1110页 [查看摘要][在线阅读][下载 842K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张欣明;王琪;李媛媛;
流感病毒因具有高变异性和季节性流行特点，对人类健康构成持续威胁。目前的季节性流感疫苗由于靶向病毒高度变异的血凝素（hemagglutinin,HA）头部结构域，常因抗原漂移或抗原转换导致疫苗与流行株不匹配，保护效果受限。为解决该问题，研究者正致力于开发通用型流感疫苗，通过靶向病毒保守表位[如HA茎部、M2离子通道的胞外结构域（M2 ectodomain,M2e）、核蛋白（nucleoprotein,NP）等]，并结合新型技术平台[如mRNA、纳米颗粒、病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）等]诱导广泛的免疫保护。本文就通用型流感病毒疫苗的最新研究进展，包括基于HA保守表位的设计策略[如嵌合HA、马赛克HA、计算优化广谱反应性抗原（computationally optimized broadly reactive antigen COBRA）]、基于其他病毒蛋白的疫苗（如NA、M2e、NP和M1）及新兴技术平台（如mRNA疫苗、纳米颗粒递送系统）的应用等方面作一综述，以期为流感病毒的防控提供新思路。
2025年09期 v.38 1111-1116页 [查看摘要][在线阅读][下载 856K] [下载次数：394 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王欣怡;胡云章;孙静;
色氨酸（tryptophan,Trp）是哺乳动物的必需氨基酸，主要通过犬尿氨酸途径（kynurenine pathway,KP）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）途径分解，其余的被肠道菌群代谢，其中KP是主要途径，由限速酶Trp-2,3-双加氧酶（tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO）和干扰素反应性吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）共同启动。经以上途径产生得到的Trp分解产物通过与芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AhR）结合，在免疫调控和维持肠道稳态方面发挥关键作用。本文通过目前对Trp代谢的研究，系统探讨了Trp途径与免疫系统的联系，并着重关注了肠道免疫以及新的潜在治疗靶点。
2025年09期 v.38 1117-1124页 [查看摘要][在线阅读][下载 876K] [下载次数：1028 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 郭方正;李柏青;许涛;汪洪涛;
结核病（tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）引起的慢性消耗性传染性疾病，其发病率及致死率呈逐年上升趋势，已成为全球公共卫生系统的一大挑战。目前，用于预防TB唯一有效的疫苗卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）对成人的保护非常有限，因此，加快新型结核疫苗的研发是防治TB的当务之急。本文就进入临床试验阶段的TB候选疫苗的研究进展作一综述，为后续疫苗研发和TB的防控提供参考。
2025年09期 v.38 1125-1136页 [查看摘要][在线阅读][下载 964K] [下载次数：768 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]