- 段亚彤;王燕;李萌;方兴;
目的 分析2018—2024年辽宁省非免疫规划（non-national immunization program,nNIP）疫苗使用情况，对全省nNIP疫苗接种现状进行评估，为制定公共卫生政策和优化疫苗接种策略提供科学依据。方法 通过“中国免疫规划信息管理系统”和“辽宁省免疫规划综合信息平台-预防接种信息系统”提取2018—2022年以及2023—2024年nNIP疫苗接种数据，其中包括nNIP疫苗替代记录。利用SPSS 13.0软件进行Pearson相关系数矩阵分析，并采用描述性分析方法对数据进行综合分析。结果 2018—2024年辽宁省nNIP疫苗共接种25 726 024剂次，人均接种剂次为866剂次/万人，nNIP疫苗人均接种剂次、占所有疫苗接种总剂次比例均为逐年递增趋势。使用量居前3位的nNIP疫苗品种为人用狂犬病疫苗（rabies vaccine for human use,Rab）、流感疫苗（influenza vaccine,InfV）、水痘减毒活疫苗（varicella attenuated live vaccine,VarV）。在NIP中，替代率最高的为脊髓灰质炎疫苗（poliomyelitis vaccine,PV）(30.40%)，其次为甲型肝炎减毒活疫苗（hepayitis A attenuated live vaccine,HepA-L）(29.08%)、无细胞百白破联合疫苗（diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTaP）(16.37%)。结论 nNIP疫苗在公共卫生中的重要性日益凸显，作为预防接种的重要组成部分，需进一步加强监测质量；nNIP疫苗能够弥补NIP疫苗覆盖的不足，还可在一些NIP疫苗供应暂时短缺时发挥重要作用，在优化NIP疫苗的供应及分配的基础上提高nNIP疫苗接种水平，可有效防控疫苗可预防传染病的流行。
2025年12期 v.38 1438-1444页 [查看摘要][在线阅读][下载 901K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 刘泽昊;曹延延;赵欣;葛胜旺;王乐;
目的 探讨2014—2023年石家庄周边地区手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）的流行病学及病原学变化特征，为及时发现病原谱变化，进一步优化治疗方案，提前采取针对性防控措施提供依据。方法 回顾性分析2014年1月1日—2023年12月31日在河北省儿童医院就诊的HFMD患儿临床资料，采用PCR法对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）、柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A group 16 strain,CA16）、通用型肠道病毒（enterovirus undefined,EVU）进行分型鉴定，对年龄、性别、季节等资料进行描述性流行病学统计及病原特征分析。结果 共检测26 563例样本，阳性率48.95%(13 003/26 563)，男女性别比为1.50∶1(15 950例vs.10 613例)，各年份间性别比差异有统计学意义（χ~2=19.61,P<0.05）；男性检出率（50.69%）高于女性（46.34%），差异有统计学意义（χ~2=48.26,P<0.05）。2016年阳性率最高（69.84%）,2020年最低（10.64%），不同年份肠道病毒检出率差异有统计学意义（χ~2=2 648.40,P<0.05）；总体以EVU为本地区感染优势株，构成率为75.37%，其次为EV71(18.42%),2018年后EVU以构成率89%以上成为绝对优势株，不同年份的肠道病毒构成率差异有统计学意义（χ~2=2 217.44,P<0.05）。HFMD全年均有发病，呈现出单高峰，集中于6～8月，不同月份间检出率差异有统计学意义（χ~2=4 050.78,P<0.05）;CA16 5～7月构成比较高（7.11%～7.96%）,EV71 3～5月构成比较高（32.02%～52.16%）,EVU 6～12月构成比较高（71.75%～82.96%），差异有统计学意义（χ~2=541.67,P<0.05）。不同年龄组中，3～6岁组检出率最高（55.53%）,> 6岁组最低（33.42%），差异有统计学意义（χ~2=842.33,P<0.05）;CA16、EV71在1～3岁组构成比最高（8.33%、23.77%）,EVU在> 6岁组构成比最高（91.99%），差异有统计学意义（χ~2=449.69,P<0.05）。结论 EVU是石家庄周边地区常见的感染病原体，3岁以下儿童在6～8月高发，提示应密切监视HFMD的流行趋势、加强疫苗接种，并对重点人群加强防控。
2025年12期 v.38 1445-1450页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K] [下载次数：129 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ]
- 邱冉;张青梅;乐洋;纪德铭;吴东萍;张晓宇;李芳;吴文逸;袁小铃;张琪梦;刘博;张哲罡;
目的 建立一种基于磁珠法及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的MDCK细胞宿主残留DNA(host cell residual DNA,HCD)片段大小的分析方法，并进行验证，以期用于评估大流行流感全病毒灭活疫苗（H5N1）生产过程中HCD的清除效果。方法 采用磁珠法提取样品HCD，通过设计特异性引物与探针，建立可分别定量84、142、204及504 bp DNA片段的qPCR分析方法。验证方法的线性范围、定量限、精密性、准确性、耐用性及专属性。采用建立的方法分析大流行流感全病毒灭活疫苗（H5N1）过程样品HCD片段占比，并检测HCD含量。结果 84、142、204、504 bp标准品在0.003～300 pg/??L范围内，与Ct值呈良好的线性关系，且4条标准曲线决定系数（R~2）均>0.99;84、142、204 bp定量限均为3 fg/??L,504 bp的定量限为1 fg/??L;84、142、204、504 bp对应的高、中、低浓度加标样品回收率均在50%～150%范围内；精密性、耐用性、专属性验证CV均≤40%。大流行流感全病毒灭活疫苗（H5N1）收获液中大片段HCD占比较高（≥204 bp片段占比81.0%），经过酶解和纯化工序，原液中≥204 bp片段占比降至8.9%，且未检出≥504 bp片段，同时HCD总含量由689.9 ng/mL降至10.2 ng/mL。结论 建立了HCD片段大小的qPCR分析方法，该方法具有良好的精密性、准确性、耐用性和专属性，可用于大流行流感全病毒灭活疫苗（H5N1）HCD片段的分析及生产过程的质量控制。
2025年12期 v.38 1451-1456+1468页 [查看摘要][在线阅读][下载 909K] [下载次数：90 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 王丽茹;杨金龙;可志萍;张宇;胡小华;
目的 建立一种可同时测定肺炎球菌多糖蛋白结合物原液中游离蛋白及4-二甲氨基吡啶（4-dimethylaminopyridine,DMAP）残留量的分子排阻高效液相色谱（size exclusion-high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC）法，并对方法进行验证及初步应用。方法 通过对DMAP特征性紫外吸收峰的研究及色谱柱分离方法的优化，建立SEC-HPLC法，实现游离蛋白、DMAP在同一色谱柱上的保留与分离，进行游离蛋白、DMAP的定量。对建立的方法进行专属性（系统适用性）、定量限、准确性、精密性、线性和范围、耐用性验证，并利用建立的方法检测供试品中游离蛋白及DMAP残留量。结果 确定的色谱条件为：色谱柱为TSKgel G5000PWXL分析柱（7.8 mm×300 mm,10??m），柱温35℃，流动相为0.85%氯化钠溶液，pH为（6.2±0.2），流速0.5 mL/min，检测波长280 nm。游离蛋白白喉类毒素（diphtheria toxoid,DT）或破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）峰及DMAP峰与相邻峰的分离度大于1.5;TT、DT和DMAP的定量限分别为0.50、1.20、0.02??g/mL;TT、DT和DMAP的加标回收率分别为98.11%～104.60%、95.43%～103.26%、97.11%～98.42%;TT、DT、DMAP的中间精密度相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）均低于5%;TT和DT在6～24??g/mL范围内，相关系数（R~2）> 0.999 0,DMAP在2～10??g/mL范围内，R~2=1.000;TT、DT和DMAP含量在进样温度为30、35、40℃条件下RSD均小于3%。利用建立的方法测定供试品中游离蛋白和DMAP含量均获得快速而精准的结果。结论 建立的SEC-HPLC法系统适用性、准确性、精密性、线性关系、耐用性良好，实现了同一试验中对游离蛋白与DMAP的双重定量，可用于对结合工艺中的杂质进行监测。
2025年12期 v.38 1457-1468页 [查看摘要][在线阅读][下载 1043K] [下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：12 ] - 余泊杉;胡威严;孙子琪;吴彤;杜末;常军亮;
目的 制备小鼠抗卵清蛋白（ovalbumin,OVA）单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb），建立OVA双抗体夹心ELISA定量检测方法并进行验证，以期用于流感病毒裂解疫苗中OVA残留量的检测。方法 以OVA标准品作为免疫原，采用小鼠杂交瘤技术筛选3株阳性杂交瘤细胞株，体内诱生法制备OVA mAb腹水，并经硫酸铵沉淀法和Protein A亲和层析纯化，Western blot法检测mAb特异性，间接ELISA法测定mAb相对亲和力。以叠加指数为指标，筛选3株杂交瘤细胞株的最佳配对mAb，建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法，并采用棋盘滴定法优化包被抗体的浓度（8.0、4.0、2.0、1.0、0.5??g/mL）及检测抗体的稀释度（1∶100、1∶500、1∶1 000、1∶2 000），再对方法的定量限、线性范围、专属性、准确度、精密度、适用性、稳定性进行验证。分别采用建立的方法及进口OVA检测试剂盒测定7批流感病毒裂解疫苗原液的OVA含量，并计算符合率。结果 共筛选出3株能稳定传代并产生OVA特异性mAb的杂交瘤细胞株，分别命名为3D6、2B11及3H8，腹水效价均高于10~7；纯化后纯度达95%以上，具有良好特异性，相对亲和力排序为：2B11 > 3D6 > 3H8。经配对筛选及优化，确定以2B11为包被抗体，最佳浓度为4??g/mL；以生物素标记的3D6为检测抗体，最佳稀释度为1∶100。该方法的定量限为3 ng/mL;OVA标准品浓度在3.13～50.00 ng/mL范围内时，与A_(450/630)呈良好的线性关系，线性回归方程为：y=0.004 9 x+0.088 7,R~2=0.987 9；该方法与胎牛血清及人血清白蛋白均无交叉反应；3份流感病毒裂解疫苗原液的加标回收率均在90%～110%范围内；精密度验证试验CV均<10%;3批流感病毒裂解疫苗原液的稀释度与A_(450/630)均呈良好的剂量依赖关系；与4℃保存6 d比较，采用37℃放置3和6 d的检测试剂进行检测的结果降幅均<20%,R~2均> 0.97。采用建立的方法与进口OVA检测试剂盒检测结果的符合率在93.96%～100.89%之间。结论 采用制备的OVA mAb建立了OVA双抗体夹心ELISA定量检测方法，该方法具有良好的专属性、准确度、精密度、适用性、稳定性，为鸡胚源性疫苗成品检定要求中OVA残留量的测定提供了可靠的检测方法。
2025年12期 v.38 1469-1475+1482页 [查看摘要][在线阅读][下载 991K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 姚晓东;高星悦;刘姣;徐凯;胡静;肖聪;王登海;李长青;季冲;王鹏;敬玥;
目的 从传统的破伤风抗毒素（tetanus antitoxin,TAT）中选择性地纯化对破伤风毒素C亚基具有高度特异性的抗体。方法 采用NHS-活化的Sepharose 4FF基质，并结合破伤风毒素TeNT-Hc-C869A亚单位为配基，开发一种免疫亲和层析方法。通过在不同条件下存放（4、25、37℃下保存3、10、30 d）以及循环使用监测填料的稳定性和耐用性。在体外以及体内分别检测经免疫亲和柱纯化后的效价变化。结果 在4和25℃下保存长达30 d，不会显著影响色谱柱性能；连续使用免疫亲和柱纯化5次F(ab')_2，每次的装载量、洗脱效率和洗脱抗体的纯度均保持一致，蛋白纯度均在95%以上；连续碱洗5次后再进行纯化，蛋白纯度均在95%以上。纯化的马血浆、酶解后的马源破伤风免疫球蛋白（tetanus immunoglobulin,TIG）F(ab')_2以及人TIG比活性分别提高了5、5和30倍。且在小鼠中和试验中，F(ab')_2纯化后比活性显著增加，达243 902 IU/g。结论 研究开发的免疫亲和层析柱具有广泛的适用性，且使用的层析基质简单、成本低、易于复制，适合大规模工业化应用，极大地提高了安全性，并降低了临床常见的过敏反应风险。
2025年12期 v.38 1476-1482页 [查看摘要][在线阅读][下载 927K] [下载次数：73 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 杨紫薇;田冠芳;陈玥雯;文蕊鑫;苗宇;赵天宇;梁士民;闫凤英;武卫党;
目的 优化组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator,t-PA）改构体（modified t-PA,t-PA）的表达条件，以期提高mt-PA的产量和质量。方法 采用批次补料培养法，分别检测低温培养（37℃培养5 d降温至30℃）和不同浓度丁酸钠（0、0.5、1、2、5 mmol/L）对稳转中国仓鼠卵巢癌mt-PA细胞系（CHOZN-mt-PA）细胞生长状态、细胞中关键代谢产物（葡萄糖、乳酸、氨）浓度及mt-PA表达水平、单/双链比例的影响。并通过气泡法测定mt-PA的体外溶栓活性。结果 采用30℃低温培养及添加2 mmol/L丁酸钠均可抑制细胞增殖，降低葡萄糖消耗、乳酸及氨的积累，并大幅提高mt-PA的表达水平，且单/双链比例稳定。与相应对照组比较，30℃及添加2 mmol/L丁酸钠条件下制备的mt-PA的体外溶栓活性差异均无统计学意义（t分别为0.546 32和0.441 70,P分别为0.613 9和0.681 5）。结论 30℃及添加2 mmol/L丁酸钠可提高mt-PA的表达水平，且不会降低其体外溶栓活性，为mt-PA的高产培养工艺开发提供了可靠策略。
2025年12期 v.38 1483-1489+1497页 [查看摘要][在线阅读][下载 1025K] [下载次数：12 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 刘亿婕;傅鸿鸿;王新金;吴静萍;王馨;陈亮;郑文静;叶燕燕;
目的 建立疫苗中铝含量8-羟基喹啉柱前衍生-高效液相色谱-二极管阵列（high performance liquid chromatography-diode array detection,HPLC-DAD）检测方法，并对方法进行验证，以期用于疫苗质量控制。方法 采用8-羟基喹啉柱前衍生化方法进行测定，对样品前处理条件中的盐酸溶液浓度（0.1、0.5、1、2、5 mol/L）、盐酸消解时间（20、30、40、50、60 min）、衍生试剂8-羟基喹啉浓度（0.5、1、2、3、4 mg/mL）、氨水浓度（1.25%、6.25%、12.50%、18.75%、25%）进行优化。色谱柱为ZORBAX SB-C_8(4.6 mm×150 mm,5??m)，以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为30℃，进样量为10??L。对方法的线性范围、准确度、精密度、专属性和稳定性进行验证，确定方法的检测限和定量限，并采用建立的方法测定16批双价人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）疫苗和3批重组戊型肝炎疫苗中的铝含量。结果 优化后的前处理条件为盐酸浓度1 mol/L，消解时间20 min，衍生试剂8-羟基喹啉浓度2 mg/mL，氨水浓度12.5%。铝元素在2～100??g/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数（r）=0.999 98；加标样品的平均回收率在89.6%～95.7%之间；6份样品铝含量检测结果的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为1.4%；空白试剂对检测无干扰；样品溶液室温放置12 h稳定性良好；方法检测限为0.267??g/mL，定量限为0.820??g/mL。用建立的方法检测16批HPV疫苗和3批重组戊型肝炎疫苗中的铝含量，结果与《中国药典》三部（2020版）通则3106中滴定法检测结果差异较小。结论 建立的HPLC-DAD法准确可靠，精密度、专属性、稳定性良好；流动相仅为甲醇-水，不添加缓冲盐、衍生剂等，操作简便、对仪器和色谱柱友好；取样量少，可实现单支疫苗样品的检测，为疫苗的质量控制提供了参考。
2025年12期 v.38 1490-1497页 [查看摘要][在线阅读][下载 922K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 陆晓伟;郑振;曹明翔;徐华;李斯浩;张浩然;杨二霞;
目的 探索一种适合柯萨奇病毒A组16型（Coxackievirus A16,CAl6）病毒收获液澄清处理与浓缩的工艺技术路线，以达到去除病毒收获液中杂质颗粒、杂质蛋白，并使目的抗原高度浓缩的效果。方法 采用二级过滤预处理病毒收获液，每级分别以抗原回收率、膜通量和浊度作为评价指标，探讨滤膜不同材质、不同孔径和不同结构对澄清效果的影响；澄清后的收获液再经100 KD聚醚砜材质膜包超滤浓缩，分析抗原含量和蛋白含量的变化，以确定浓缩倍数范围、洗滤次数和收样次数。样品规模放大至中试，将收获液按优化后的工艺参数进行澄清过滤并超滤浓缩，以抗原回收率和蛋白去除率为指标，评估本工艺的线性放大可行性。结果 预过滤第1级采用0.45??m玻璃纤维，第2级采用0.45??m聚醚砜。超滤浓缩最佳工艺条件为：30～50倍浓缩，4次洗滤，4次收样。中试规模下，CA16病毒收获液澄清后浊度降低96.00%，抗原回收率为89.49%，超滤浓缩后的抗原回收率为87.23%，蛋白去除率为91.17%。结论 优化的超滤浓缩工艺技术路线既能降低蛋白含量，又可获得较高的抗原回收率，且具有良好的线性放大的可行性。
2025年12期 v.38 1498-1503页 [查看摘要][在线阅读][下载 860K] [下载次数：44 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ]