- 张青梅;马继华;吴文逸;邱冉;乐洋;吴东萍;李芳;蔡铭;刘博;张哲罡;
目的 对流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）单价病毒收获液（简称：单价病毒收获液）和单价原液中重组胰蛋白酶（recombinant trypsin,RT）残留量双抗体夹心ELISA检测方法进行验证。方法 利用双抗体夹心ELISA法检测单价病毒收获液和单价原液中RT残留量，对该方法进行定量限、专属性、重复性、中间精密度、准确度和耐用性验证。结果 在10～0.156 ng/mL浓度范围内，该方法线性关系良好，线性相关系数（R~2）=1.000；定量限为0.156 ng/mL；用样品稀释液和磷酸盐缓冲液将单价病毒收获液稀释2倍后测得的RT含量变异系数（CV）为1%，用样品稀释液和磷酸盐缓冲液将单价原液稀释2倍后测得的RT含量均小于0.156 ng/mL；不同浓度RT溶液加标回收率在81%～105%之间，其变异系数（CV）在1%～6%之间；不同试验人员测得的单价病毒收获液RT含量CV为3%，单价原液RT含量均小于0.156 ng/mL；不同显色时间下单价病毒收获液的RT残留量CV为5%，单价原液的RT残留量均小于0.156 ng/mL，该方法对不同显色时间耐受性较好。结论 流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）单价病毒收获液和单价原液RT残留量双抗体夹心ELISA检测方法具有较好的线性和范围、定量限、专属性、重复性、中间精密度、准确度及耐用性，可用于流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）RT残留量的检测。
2026年02期 v.39 174-179+188页 [查看摘要][在线阅读][下载 846K] [下载次数：52 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 吴雪伶;张琪梦;纳涛;魏山山;范珊珊;宗伟英;孟淑芳;杨志行;
目的 对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证，使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法 对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量进行优化，对优化后的方法进行灵敏度、交叉污染检测限度及不同实验室间的复核验证。结果 优化后的方法可成功用于10个种属的细胞鉴别检测，方法灵敏度可达50～5 000个细胞，交叉污染的检测水平可达1∶100～1∶10 000,4家不同实验室均能利用该方法成功对细胞进行检测。结论 优化后的细胞种属鉴别多重PCR法具有较好的专属性及检测细胞交叉污染的能力，可用于不同实验室的细胞种属鉴别检测，耐用性好，将为生产及检定用细胞的质量控制提供有效的技术手段。
2026年02期 v.39 180-188页 [查看摘要][在线阅读][下载 944K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 邹文琪;罗敏;郭旭梦;申瑷琳;何亮;赵佩文;李小翠;程小玲;施金荣;
目的 建立口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）猪胰蛋白酶残留量ELISA检测方法，并对方法进行验证，以期更全面地对该产品进行质量控制。方法 在波长450 nm处测定标准品和供试品溶液的吸光度值，以标准品浓度值为自变量X，其对应吸光度值的均值为因变量Y，建立四参数线性回归方程，利用线性回归方程计算供试品溶液中的猪胰蛋白酶含量。对建立的方法进行线性范围及检测限、精密度、专属性、耐用性、准确度验证。结果 猪胰蛋白酶浓度在1.56～100 ng/mL范围内线性良好（R~2> 0.99）；重复性验证单次病毒收获液及单价原液的变异系数（coefficient of variation,CV）分别为5%和8%，中间精密度验证单次病毒收获液和单价原液的CV分别为5%和6%；检测限验证猪胰蛋白酶浓度为1.56 ng/mL时回收率为102%～112%,CV为4%，定量限为1.56 ng/mL；专属性验证牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）稀释供试品的回收率在101%～102%之间，蔗糖-磷酸盐-谷氨酸缓冲液（sucrose-phosphate-glutamate,SPG）和DMEM稀释供试品的回收率在90%～101%之间，辅料对检测无干扰；耐用性验证不同温度孵育和显色时间结果的CV均小于15%；准确度验证单次病毒收获液和单价原液的回收率分别在86%～105%和109%～117%之间。结论 建立的ELISA法线性范围及检测限、精密度、专属性、耐用性和准确度均符合可接受标准，适用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）猪胰蛋白酶残留量的检测及质量控制。
2026年02期 v.39 189-194+200页 [查看摘要][在线阅读][下载 858K] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 张波;王艺诺;马杉姗;张彦兴;马素永;李尚儒;侯慧丽;
目的 建立特异的重组人肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）裸质粒注射液产品中大肠埃希菌宿主DNA残留量的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法，并进行验证及初步应用，为该药物的质量控制提供可靠依据，同时为同类基因治疗产品的安全性评价提供参考。方法 以大肠埃希菌16SrRNA基因为靶序列，设计特异性引物及探针，通过qPCR法检测DNA残留量。对建立的方法进行专属性、线性与范围、定量下限、准确度、重复性及中间精密度验证，并对3批重组人HGF裸质粒注射液原液的外源性DNA残留量进行检测。结果 该方法DNA浓度在0.01～100 pg/??L范围内时，线性关系良好，R~2为0.999，定量下限为0.01 pg/??L；该方法对CHO细胞的DNA无特异性扩增曲线；高、中、低浓度DNA加标量样品的回收率分别为104.0%、105.1%和100.0%；重复性和中间精密度检测值的RSD均小于30%。该方法检测3批原液的外源性DNA残留量均低于2??g/mg质粒。结论 建立的qPCR法灵敏度高，特异性强，准确度和中间精密度良好，适用于重组人HGF裸质粒注射液及其他大肠埃希菌表达产品的外源性DNA残留量检测。
2026年02期 v.39 195-200页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K] [下载次数：44 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 胡艳;寇雅蓉;李镭;闫婧伊;张慧银;张磊;仝鑫;
目的 建立重组腺病毒疫苗免疫后血清中具有中和活性的腺病毒抗体检测方法，并进行验证，以用于腺病毒临床血清中和抗体定量。方法 将荧光标记的重组腺病毒AdC68XY4-GFP与连续系列稀释的免疫血清中和后感染细胞，荧光斑点数降至中和前荧光斑点数的10%所对应的供试血清稀释度，即为该供试血清的腺病毒中和抗体滴度[记为抑制率90(inhibitory concentration 90,IC_(90))]。采用等量病毒接种3种细胞（293A、HeLa和A549细胞），确定敏感性高的检测用细胞；分析重组腺病毒增殖曲线，确定数据判读时间；通过中和试验确定重组腺病毒的滴度使用范围。对建立的方法进行专属性、准确性、重复性、中间精密度、耐用性验证。结果 293A细胞对腺病毒最敏感；结果判读时间为接毒后48 h；不同腺病毒滴度对应的荧光斑点均值呈线性关系（R~2=0.970 3），确定重组腺病毒在接毒量为62.5～500 IFU/50??L范围内结果稳定，选择线性中间点250 IFU/50??L腺病毒进行试验。胎牛血清（FBS）的腺病毒中和抗体IC_(90)<1∶20，阳性对照血清的腺病毒中和抗体IC_(90)为1∶96；阳性对照血清和临床血清003腺病毒中和抗体滴度检测的回收率均在50%～150%之间；阳性对照血清6次检测结果的RSD为8.27%,<50%;3名实验人员不同时间同一样品2次检测结果的RSD为4.52%,<50%；病毒增殖培养时间、铺板细胞量对腺病毒中和抗体滴度的影响符合可接受标准。结论 建立了重组腺病毒疫苗免疫后血清中具有中和活性的腺病毒抗体检测方法，通过重组荧光病毒与免疫血清中和后感染敏感细胞能快速检测腺病毒特异性中和抗体水平，该方法专属性、准确性、重复性、中间精密度、耐用性均符合验证要求。
2026年02期 v.39 201-207页 [查看摘要][在线阅读][下载 908K] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 黄雯茜;华宇琴;周鹏;陈航;周宇;晋竞;邓春平;
目的 建立一种基于生物膜干涉（bio-layer interferometry,BLI）技术定量检测重组呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）融合前F蛋白（prefusion F protein,Pre-F）含量的分析方法，并对其进行初步验证及应用，以期为生产工艺开发及质量控制提供关键技术支持。方法 筛选RSV Pre-F蛋白特异性抗体作为检测抗体，采用Protein G生物传感器，建立基于BLI技术的RSV Pre-F蛋白定量检测方法，对其线性范围、专属性、精密度、准确度、灵敏度及稀释可靠性进行验证；采用建立的方法对重组RSV蛋白疫苗生产工艺各阶段样品进行检测，并与酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、尺寸排阻-高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）法检测结果进行对比。结果 选择RSV Pre-F三聚体蛋白特异性抗体AM14作为检测抗体，构建“Protein G传感器-AM14抗体-Pre-F蛋白”间接检测模式，建立了BLI检测方法。方法的线性范围为1.25～40??g/mL；专属性强，仅检测完整三聚体Pre-F蛋白；准确度验证的回收率在80%～120%之间，重复性与中间精密度验证的CV均小于15%；定量限为1.25??g/mL；在生产工艺各阶段样品中均表现出良好的重复性和可靠性。该方法适用于重组RSV蛋白疫苗生产工艺各阶段样品中Pre-F蛋白含量检测，且与ELISA法相当，整体优于HPLC法。结论 成功建立了RSV Pre-F蛋白定量检测的BLI法，该方法专属性强，具有良好的线性、准确度、精密度、灵敏度及稀释可靠性，具有操作简便、快速、可耐受各种复杂基质等优点。
2026年02期 v.39 208-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 941K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 赵美依;诸珏珉;徐晓竹;高飞霞;邹星;熊斐斐;罗剑;马雷钧;
目的 采用mRNA技术制备抗风疹病毒（rubella virus,RuV）中和血清，并进行鉴定，以期用于麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗（measles, mumps and rubella vaccine,MMR）鉴别和病毒滴度检测。方法 构建表达RuV BRDⅡ疫苗株及2B基因型野毒株E1蛋白的mRNA脂质纳米颗粒（lipid nanoparticle,LNP）疫苗，并通过Western blot和间接免疫荧光法验证其在293T细胞中的表达。用2种mRNA-LNP疫苗及风疹减毒活疫苗分别免疫豚鼠，制备抗血清，采用间接ELISA法检测血清中RuV E1蛋白特异性IgG抗体效价，微量中和法测定中和抗体效价，并评估血清对腮腺炎病毒和麻疹病毒的交叉干扰作用。结果 2种mRNA-LNP疫苗粒径分别为71.69和70.77 nm，包封率均> 85%，可在293T细胞中有效表达E1蛋白。2种mRNA-LNP疫苗免疫豚鼠后产生的E1蛋白特异性IgG抗体效价及中和抗体效价均显著高于风疹减毒活疫苗（F分别为20.38～37.94和10.63～21.59,P分别为<0.001和<0.05），且该血清仅特异性中和RuV，对麻疹病毒和腮腺炎病毒无交叉干扰。结论 基于mRNA技术成功制备了高效价、高特异性的抗RuV中和血清，适用于MMR疫苗的质量检定，并为风疹疫苗的研发提供了新策略。
2026年02期 v.39 217-221+228页 [查看摘要][在线阅读][下载 953K] [下载次数：24 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 周建森;纪颖;刘树滔;
目的 以重组毕赤酵母发酵液冻干粉为原料，分离纯化超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒表达的反式转录激活因子（trans-activator of transcription,TAT）蛋白转导结构域的融合蛋白TATSOD。方法 利用乙醇沉淀、大孔树脂柱层析、SP-650离子交换柱层析、TritonX-114相分离法去除TAT-SOD中的色素和细菌内毒素。结果 70%乙醇沉降TAT-SOD的酶活力回收率达（98.50±1.71）%，纯化倍数为（1.04±0.02）倍。大孔树脂分离纯化TAT-SOD的效果总体优于SP-650；纯化倍数为（3.07±0.06）倍，略高于SP-650[(2.78±0.05)倍]；色素去除率为（95.16±1.65）%，远高于SP-650[(44.73±0.77)%]；酶活力回收率为（61.17±1.06）%，略低于SP-650[(69.93±1.21)%]。TritonX-114相分离法纯化TAT-SOD，细菌内毒素去除率为（99.89±1.73）%，酶活力回收率为（95.02±1.66）%。最后获得的TAT-SOD的比活力为（10 110±175）U/mg。结论 乙醇沉降-大孔树脂柱层析-TritonX-114相分离法对TAT-SOD有良好的分离纯化效果，有望为TAT-SOD工业化分离纯化提供新的选择。
2026年02期 v.39 222-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 915K] [下载次数：48 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]