- 韩子泊;雷泽华;袁润余;孙振璐;杨森森;唐芳;张浩;杜丽芳;张靖;李启明;梁宇;
目的 建立诺如病毒（Norovirus,NoV）GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法，并进行验证，为NoV疫苗的免疫原性评价和血清流行病学研究提供更准确的抗体检测手段。方法 将高滴度NoV GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体阳性人血清混合后分装冻干，制成实验室参考品，采用四参数拟合计算半数有效浓度（EC_(50)）进行多次独立标定。以标定后的实验室参考品为工作标准品，建立基于四参数法的NoV GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法，并进行线性、测定范围、精密度、准确度验证。以GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体阴阳性人血清为供试品，采用接受者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线法，基于检测结果的特异性和灵敏度，确定检测方法中用于阳性结果判定的cut-off值。结果 实验室参考品GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体效价标定结果分别为434.2和456.5。基于实验室参考品，建立了四参数法NoV GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法，9次重复试验标准曲线R~2值均大于0.99;GⅠ.1型IgG抗体效价测定范围为2.714～0.042,GⅡ.4型为5.706～0.045；重复性试验相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）≤10%，中间精密度RSD≤25%；加标试验回收率范围为75%～125%。确定GⅠ.1型cut-off值为6.705（特异性为96.6%，敏感性为96.3%）,GⅡ.4型为12.70（特异性和敏感性均为100%）。结论 通过制备和标定实验室NoV GⅠ.1和GⅡ.4型IgG阳性人血清，建立了一种基于四参数拟合标准曲线的NoV人IgG抗体定量ELISA检测方法，并初步确定了GⅠ.1和GⅡ.4型血清IgG结果判定的cut-off值，该方法测定范围较大，线性、精密度、准确度、特异性和灵敏度均良好。
2025年06期 v.38 691-698页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K] [下载次数：91 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：13 ] - 任珍芸;周海飞;李正宇;苏春阳;李慧清;任浩锋;刘月萍;谭小梅;
目的 建立伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中己二酰肼（adipic acid dihydrazide,ADH）残留量的反向高效液相色谱（reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）检测方法，并进行优化、验证及初步应用，以期用于伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液或其他结合疫苗中ADH残留量的检测。方法 采用RP-HPLC法检测伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中ADH残留量，并优化检测波长（全波长）、流动相[10 mmol/L PBS(pH 7.0)+10%乙腈、10 mmol/L PBS(pH 7.0)+0.8%氯化钠溶液+10%甲醇+5 mmol/L乙酸铵溶液]、流速（0.8及1.0 mL/min），验证方法的专属性、线性范围、准确性、精密性，确定检测限及定量限。采用建立的方法检测3批伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中的ADH残留量。结果 确定最佳检测波长为202 nm，流动相为10 mmol/L PBS(pH 7.0)+0.8%氯化钠溶液+10%甲醇+5 mmol/L乙酸铵溶液，流速为1.0 mL/min。该方法能特异性测定结合物原液中的ADH残留，结合疫苗原液中其他成分对ADH峰的检测无干扰；对照品溶液ADH浓度在2～10μg/mL范围内，与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程y=30 617 x+1 296.5，相关系数（R~2）=0.999 7；伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液ADH的加标回收率为91.70%～106.00%；精密性验证RSD均<8%；检测限及定量限分别为0.2和0.5μg/mL。3批伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液均未检出ADH残留。结论 建立的方法具有良好的专属性、精密性、准确性，且方便快捷，可应用于伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中AOH残留量的检测。
2025年06期 v.38 699-704页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K] [下载次数：30 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：5 ] - 石刚;卢旭;郭丽娜;刘文宾;毛琦琦;李红;
目的 探讨肺炎链球菌疫苗免疫后人血清中溶血、乳糜血以及反复冻融对ELISA检测抗肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体的影响，以期促进肺炎链球菌疫苗临床血清IgG抗体含量评价方法的不断发展和完善。方法 将同批复溶后以不同体积分装的实验室内质控血清09CS反复冻融1～12次，与单次冻融血清分别进行24个型别的IgG抗体检测，执行检测肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体含量ELISA试验，对检测结果进行系统分析；用实验室内质控血清09CS分别与免疫后溶血、乳糜血血清按照不同体积分数进行配制，分别进行24个型别的IgG抗体检测，重复3次，计算回收率。结果 单次和反复冻融血清分别检测24个型别IgG抗体，检测结果 R~2> 0.99，线性关系良好；对检测结果进行林氏一致性相关系数（Lin's concordance correlation coefficient,r_c）分析，得到r_c为0.992 3(95%CI:0.990 2～0.993 9)，单次和反复冻融血清检测结果高度一致。溶血血清准确度回收率为74.65%，乳糜血血清准确度回收率为70.48%，均符合准确度±40%范围。结论 肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体含量的ELISA检测过程中，溶血和乳糜血血清以及血清反复冻融12次均不影响检测，均可满足肺炎链球菌疫苗临床血清抗体评价检测的要求。
2025年06期 v.38 705-712页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K] [下载次数：52 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 郭依依;申瑷琳;李娟娟;贾静波;张娟;李思雨;潘俊杰;程小玲;金玉翠;罗敏;段凯;马环;
目的 建立细菌内毒素动态显色检测方法，探讨其在不同生物制品中应用的可行性。方法 使用动态显色法鲎试剂，进行标准曲线可靠性试验，通过干扰预试验确定稀释倍数，再进行正式干扰试验，同时对5种不同生物制品进行测定，并与凝胶法检测结果进行比较。结果 标准曲线的线性范围为0.005～0.5 EU/mL，标准曲线的相关系数（r）为0.999，肠道病毒71型灭活疫苗（Vero细胞）无干扰稀释倍数至少为800倍，Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Vero细胞）无干扰稀释倍数至少为400倍，乙型脑炎减毒活疫苗无干扰稀释倍数至少为500倍，吸附无细胞百白破联合疫苗无干扰稀释倍数至少为1 000倍，A群脑膜炎球菌多糖疫苗无干扰稀释倍数至少为10 000倍，各制品在无干扰稀释倍数下加标回收率均在50%～200%之间，符合药典要求，检测结果与凝胶限度法一致性较好，并符合企业限定标准。结论 动态显色法可用于定量检测生物制品中细菌内毒素的含量。
2025年06期 v.38 713-718+724页 [查看摘要][在线阅读][下载 818K] [下载次数：45 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 王鸣人;吴利红;田清雅;段徐华;邵泓;
目的 探讨等效性检验法应用于胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)受体激动剂药物生物学活性测定中标准品与样品相似性评价的可行性，以期提高各类产品生物学活性的测定标准。方法 采集25批历史产品放行生物学活性检测数据，获得四参数拟合模型的各参数估计值及其标准误，以样品与标准品的斜率比值和动态范围比值（样品上下渐近线差值与标准品上下渐近线差值的比值）作为相似性评价指标，利用容忍区间法设定各指标的等效性界值。另采集86批GLP-1受体激动剂药物的生物学活性测定数据（57份标准品与样品生物学行为相似，29份标准品与样品生物学行为不相似），分别采用等效性检验法及F检验进行相似性判定，比较两种方法的真阳性率（通过率）和真阴性率（未通过率），并通过Kappa检验评价一致性。结果 样品与标准品斜率比值的等效性区间为0.64～1.56，动态范围比值的等效性区间为0.87～1.15。等效性检验的真阳性率为95%(54/57)，真阴性率为86%(25/29);F检验的真阳性率为88%(50/57)，真阴性率为72%(21/29)。两种方法一致性一般（Kappa=0.417）。结论 等效性检验法适用于GLP-1受体激动剂药物生物学活性测定法的相似性评价，且优于F检验。
2025年06期 v.38 719-724页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 王丽梅;王鑫;胡伟;詹建萍;吕淑敏;张永明;
目的 比较含血小板裂解液（platelet lysate,PL）的新生牛血清（newborn calf serum,NBCS）与胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）培养BHK-21、Vero、HEK293T细胞的促生长效果，为探究PL-NBCS替代FBS培养细胞的可行性提供实验依据。方法 分别用PL-NBCS和FBS培养BHK-21、Vero和HEK293T细胞，通过对连续传代培养细胞的形态观察、细胞平均增殖密度、活率、倍增时间等动力学分析检测PL-NBCS对细胞的促生长作用。结果 PL-NBCS培养的3种细胞形态特征与FBS培养的细胞无显著差异。在两种培养条件下，细胞生长均呈“S”型。PL-NBCS与FBS培养的BHK-21细胞平均增殖密度、活率、倍增时间差异均无统计学意义（t分别为0.734、0.432和0.029,P分别为0.472、0.671和0.977）;PL-NBCS培养的Vero细胞平均增殖密度和活率均高于FBS组，且平均倍增时间显著高于FBS组（t=2.228,P=0.042）;PL-NBCS培养的HEK293T细胞平均增殖密度、活率及倍增时间均显著高于FBS组（t分别为2.309、2.848和2.682,P分别为0.033、0.011和0.015）。结论 PL-NBCS培养细胞促生长效果较好，可替代FBS传代培养细胞。
2025年06期 v.38 725-730页 [查看摘要][在线阅读][下载 984K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 王梦涵;侯安奇;谭仕明;董翔;李爽;张夫坤;
目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证，以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7原核蛋白，经Ni~(2+)亲和层析柱进行纯化；以ORF7原核蛋白为免疫原，采用小鼠杂交瘤融合技术，筛选单抗杂交瘤细胞株，制备单抗，间接ELISA法检测抗体效价，Western blot法鉴定抗体特异性；叠加ELISA试验分析单抗抗原表位，经抗体配对筛选建立VZV-ORF7抗原的双抗体夹心ELISA检测方法，对方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证；用建立的方法检测3批VZV Oka-7S株收获物。结果 共获得4株稳定分泌抗VZVORF7的杂交瘤细胞株，分别命名为M2B5、M2G5、8C2和1C4，细胞培养上清效价均为10~4～10~5，腹水效价均为10~6～10~7；纯化的单抗在还原和非还原状态纯度均约为97%。4株单抗均可与VZV全病毒蛋白和纯化的ORF7原核蛋白发生特异性结合；确定M2G5为捕获抗体，M2B5-HRP为酶标抗体，二者最佳工作浓度分别为4μg/mL和1∶8 000；确定临界值为A_(450)=0.111,A_(450)≥0.111判定为阳性，<0.111判定为阴性。本方法标准曲线范围为3.9～250 ng/mL，拟合方式为四参数，标准曲线方程y=(0.049 5-2.24)/(1+x/97.8)~(1.27)+2.24，相关系数（R~2）为0.999，最低检测限为2.2 ng/mL；与四价流感病毒裂解疫苗、腮腺炎病毒、麻疹病毒均无交叉反应；批间及批内CV均<10%。3批VZV Oka-7S株检测结果均为阴性，符合率为100%。结论 建立的VZV-ORF7双抗体夹心ELISA法灵敏度高，特异性好，重复性高，适用于VZV-ORF7蛋白以及VZV Oka和Oka-7S株的快速检测。
2025年06期 v.38 731-737+745页 [查看摘要][在线阅读][下载 877K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ]