中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 乙型脑炎减毒活疫苗和灭活疫苗免疫效果评价

    刘欣玉;那瑞;俞永新;赵丹华;赵欣;徐宏山;李玉华;

    目的对目前市场上的乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫效果进行评价。方法将乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗以相同剂量免疫小鼠14 d后,采集一部分小鼠血液,分离血清,检测中和抗体水平;另一部分用乙脑病毒强毒P3株进行腹腔攻击,观察小鼠存活情况,计算疫苗的保护率。结果乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗原倍免疫小鼠后,抗体阳转率均为100%,乙脑病毒强毒攻击后保护率均为100%;乙脑减毒活疫苗1∶20稀释免疫小鼠后,抗体阳转率为90%,攻击保护率为100%。乙脑灭活疫苗1∶20稀释免疫小鼠后抗体阳转率为80%,乙脑病毒强毒攻击后保护率为70%。结论目前市场上应用的乙脑减毒活疫苗和乙脑灭活疫苗均是有效的,乙脑减毒活疫苗的保护效果更好。但通过接种不同的抗原量和采用不同的免疫程序,均可消除免疫保护效果的差异。

    2018年09期 v.31 929-931+935页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 伤寒甲型副伤寒结合疫苗质量标准的建立

    梁昊宇;周富昌;胡玥;任晓莉;王斌;曾明;

    目的建立国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的质量控制标准。方法参照《中国药典》三、四部(2015版)、《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》、《结合疫苗质量控制和临床研究技术指导原则》及《世界卫生组织生物制品规程续编Ⅱ》(1995年版)等中的相关原则及方法,对4批国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的各项质量指标进行检测。结果 4批国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的各项质量检测指标均符合国家拟定的质量标准。结论建立的国产伤寒甲型副伤寒结合疫苗的质量控制标准适用于该疫苗工艺的质量控制。

    2018年09期 v.31 932-935页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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基础研究

  • 基孔肯雅病毒E2蛋白的原核表达及纯化

    郭丹丹;曹亮;田明尧;鲁会军;孙文超;张涵;汪伟;刘云霞;金宁一;郭焱;

    目的原核表达并纯化基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)E2主要结构蛋白,为预防CHIKV感染及亚单位疫苗的研究奠定基础。方法根据Gen Bank上公布的CHIKV基因序列合成E2基因,并进行密码子优化,以提高原核表达效率。设计引物并以合成的E2基因为模板,PCR扩增CHIKV E2,连接到原核表达载体p ET-28a上,构建重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后进行纯化。结果重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2经双酶切鉴定构建正确,测序结果与原序列一致。表达的CHIKV E2融合蛋白相对分子质量约为47 000,可与His标签抗体特异性结合,纯化后纯度达95%以上。结论成功在大肠埃希菌中表达了CHIKV E2蛋白,纯化后蛋白纯度较高,为CHIKV亚单位疫苗的免疫试验奠定了基础。

    2018年09期 v.31 936-940页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K]
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  • BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析

    李军丽;付丽丽;王国治;杨晓明;赵爱华;

    目的初步分析BC02(BCG Cp G DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用。方法采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01(BCG Cp G DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)细胞因子水平和m RNA转录水平的影响。信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况。结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,最佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/m L BC01+20μg/m L Al(OH)3]和24 h。Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力。信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-κB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平。结论 BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用。

    2018年09期 v.31 941-948页 [查看摘要][在线阅读][下载 514K]
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  • 大豆膳食纤维对糖尿病大鼠模型血糖的影响

    佐兆杭;王颖;刘淑婷;宫雪;张艳莉;张东杰;张玉先;于寒松;曹龙奎;

    目的探讨大豆膳食纤维对糖尿病大鼠模型血糖的影响。方法腹腔注射链脲佐菌素溶液(150 mg/kg)构建糖尿病大鼠模型。建模成功后,灌胃给予低、中、高大豆膳食纤维溶液(1.35、2.70、5.40 g/kg),同时设对照组(灌胃给予10 mg/kg的格列本脲),空白组及模型组灌胃给予0.9%生理盐水,每日给药1次,连续给药42 d。测定各组大鼠体重、空腹血糖值、血清中糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)、胰岛素(insulin,INS)、肝糖原(glycogen)含量及胰腺/体比,并取胰脏组织,制作H&E染色病理学切片进行观察。结果与空白组比较,模型组大鼠体重、INS、glycogen及胰腺/体比明显下降(P<0.05),空腹血糖值及GSP含量明显升高(P<0.01),且胰腺组织损伤严重,胰岛萎缩,细胞水肿变形,细胞间隙存在出血点及炎性细胞浸润现象。与模型组比较,除低剂量大豆膳食纤维剂量组外,中、高剂量组大鼠体重及INS均明显升高(P<0.01),GSP明显下降(P<0.01);各剂量大豆膳食纤维剂量组及对照组大鼠空腹血糖值明显下降(P<0.05),glycogen含量明显升高(P<0.05);高剂量大豆膳食纤维剂量组及对照组大鼠胰腺/体比明显升高(P<0.05);且各剂量组大鼠胰腺组织损伤程度明显减轻,胰岛细胞数目增多,且细胞水肿变形程度减轻。结论大豆膳食纤维可降低糖尿病血糖含量、修复氧化损伤,且可改善糖尿病对大鼠胰腺的损伤情况,改善效果与剂量呈正相关。

    2018年09期 v.31 949-954页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K]
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  • 一种肺炎链球菌重组蛋白PsaA-PspA23原核表达载体的构建及表达

    甘忠桥;孟祥玉;李博;陈晓瑞;张悦;袁剑文;梁丹虹;吴永革;谷铁军;

    目的优化肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定。方法以肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重组基因进行扩增,得到Psa A-Psp A2和Psp A3的CDR区(亚类决定区)基因片段。利用重叠延伸PCR(Overlap PCR)技术,将Psa A-Psp A2基因片段和Psp A3的CDR区基因片段连接,得到同源区优化后的基因片段。利用PCR技术扩增同源区优化后的基因片段,使该基因3′末端引入终止密码子,阻止Psa APsp A23基因表达载体上His-tag的融合表达。将得到的片段同源区优化且无His-tag融合表达的目的基因连接至p ET20b载体后,转入大肠埃希菌(E.coli)中进行表达,表达产物进行Western blot分析。结果重组表达质粒p ET20b-Psa A-Psp A23经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;转化E.coli中,37℃,IPTG终浓度1 mmol/L诱导5 h,获得可溶性表达的重组蛋白,且无His-tag。结论 Psa A-Psp A23蛋白基因同源区优化及His-tag成功去除,并在原核表达系统E.coli中可溶性表达,可为Psa A-Psp A23蛋白疫苗的进一步研究奠定基础。

    2018年09期 v.31 955-959+964页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K]
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  • 一种生物复合抗菌吸附材料的制备及其性能分析

    江秋云;陈磊;蒋磊;

    目的制备一种生物复合抗菌吸附材料,并对其抗菌和吸附性能进行分析。方法通过两步法煅烧和包埋技术制备天然钙与抗菌多肽结合的生物复合抗菌吸附材料,并采用振荡接触培养法测定该材料体外抗菌效果,甲醛去除率试验和原子吸收分光光度法分别测定其吸附甲醛和重金属的性能。结果通过确定的工艺制得平均粒径为7.83μm,天然钙与抗菌多肽包埋的白色粉末生物复合材料——钙基抗菌多肽复合物(calcium-based antimicrobial peptide compounds,CAPCS)。该复合材料CAPCS对白色念珠菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率均高于99%,对甲醛的去除率高达87.74%及以上。随着溶液p H值的升高和CAPCS用量的增大,吸附重金属Cd~(2+)和Pb~(2+)的能力呈增强趋势。结论制备的生物复合材料CAPCS具有较好的抗菌和吸附性能。

    2018年09期 v.31 960-964页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 2017年黑龙江省禽腺病毒4型分离株Hexon基因的遗传特征分析

    王天;步梦娇;刘增禄;周金玲;刘宇;刘通;岳山;朱战波;

    目的分析2017年黑龙江省禽腺病毒4型(fowl adenovirus-4,FAd V-4)分离株Hexon基因的遗传特征。方法提取疑似心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)的病鸡肝脏DNA,以其为模板,经PCR扩增Hexon基因,并进行测序。采用BLAST软件对Hexon基因序列进行数据库比对;采用Meg Align软件进行核苷酸和氨基酸同源性比对;采用Mega 6软件将分离获得的FAd V-4菌株及35个参考FAd V菌株的全长Hexon基因构建系统进化树。结果 Hexon基因PCR产物长度为1 204 bp,将分离株命名为FAd V-4-DQ。与其他8个FAd V分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为34.6%~98.7%和22.0%~95.7%,其中与中国2015年FAd V-4 HNHB分离株及2016年FAd V-4 HN151025分离株的核苷酸和氨基酸的同源性较高,分别为98.7%、95.7%和98.6%、95.2%;其次是与印度2008年的FAd V-4 PJ-06分离株的核苷酸和氨基酸的同源性较高,分别为98.2%和94.4%。基因进化树分析显示,FAd V-4-DQ株与中国2015及2016年的15个分离株基因型属于同一个进化分枝,并由同一祖先进化。结论本研究获得的FAd V分离株属血清型FAd V-4型,FAd V-C种,与中国2015及2016年流行毒株同属一个基因簇,并推测该分离株起源于印度早期菌株。

    2018年09期 v.31 965-968+973页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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治疗性制剂

  • 姜黄素对睡眠剥夺小鼠血清心肌酶、氧化应激酶和炎症因子表达的影响

    刘刚;侯良绢;

    目的探讨姜黄素(curcumin)对睡眠剥夺小鼠血清心肌酶、氧化应激酶和炎症因子表达的影响。方法将50只C57雄性小鼠随机分为正常对照组、睡眠剥夺模型组和姜黄素低、中、高剂量组。采用改良多平台水环境法(modifid multiple platrorm water environmental method,MMPWM)进行睡眠剥夺连续72 h,姜黄素低、中、高剂量组按50、100、150 mg/kg进行灌胃,正常对照组和睡眠剥夺模型组小鼠在相同时间点给予等体积生理盐水灌胃,连续8周,每天1次。采用BS-220全自动生化分析仪检测血清心肌酶中心肌酶乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、α-羟丁酸脱氢酶(alpha-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBDH)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)含量;黄嘌呤氧化酶法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,硫代巴比妥酸(thiosulfuric acid barbitone,TBA)法检丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量;ELISA法检测心肌组织中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量。结果与睡眠剥夺模型组比较,姜黄素各剂量组小鼠血清心肌酶LDH、CK、α-HBDH、AST含量均下降(P<0.000 1);小鼠心肌组织中SOD、GSH-Px活性逐渐增强(P<0.05),MDA含量逐渐下降(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α含量均逐渐下降(P<0.05)。结论姜黄素可保护心肌组织,其机制可能是通过提高心肌组织的抗氧化能力,减轻氧化应激损伤,抑制或降低炎症因子的释放。

    2018年09期 v.31 969-973页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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诊断制剂

  • 中国15群钩端螺旋体代表菌株分群血清参考品的研制

    徐颖华;李喆;张影;杜宗利;辛晓芳;叶强;

    目的研制中国15群钩端螺旋体代表菌株的分群血清参考品。方法制备1批冻干钩端螺旋体15群候选分群参考血清,与国内15株代表菌株进行显微镜凝集试验,同时组织协作标定,并对冻干候选制剂进行稳定性分析。结果冻干的血清候选参考品外观色泽均匀、形态饱满,水分含量均<3%。每个协作实验室检测结果的室内和室间变异系数(CV)均低于15%。各血清候选参考品于-20℃保存24个月的抗体滴度与协作标定及于-20℃保存12个月的结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论研制的中国15群钩端螺旋体代表菌株分群血清参考品具有良好的稳定性,可用于钩体菌株血清分群和菌体疫苗鉴别试验。

    2018年09期 v.31 974-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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  • ABO反定型试剂特异性检测用国家参考品的制备

    沈舒;马秋平;田亚宾;石大伟;张春涛;

    目的研制检测ABO反定型试剂特异性项目的血清国家参考品。方法收集健康献血员A_1、B、A_1B、O型4种型别血清,经确证实验及8家实验室联合标定,对其进行特异性、效价、不规则抗体、冷凝集抗体及稳定性考核。结果4种血清无冷凝集抗体及不规则抗体,其中A_1、B、O型血清效价均≥1∶8。根据实验结果特异性质量标准制定为A_1型血清与A_1、A_2、O型反定型红细胞反应为阴性,与B、A_2B型反定型红细胞反应为阳性;B型血清与B、O型反定型红细胞反应为阴性,与A_1、A_2、A_2B型反定型红细胞反应为阳性;A_1B型血清与A_1、A_2、A_2B、B、O型反定型红细胞反应均为阴性;O型血清与O型反定型红细胞反应为阴性,与A_1、A_2、A_2B、B型反定型红细胞反应均为阳性。本参考品开瓶12 d及25℃放置3 d、4℃5个月、-20℃半年,保存稳定性均良好,但不能反复冻融。结论已成功制备可用于多种血清免疫方法学的ABO反定型试剂特异性检测用国家参考品。

    2018年09期 v.31 977-981页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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临床研究

  • 广西壮族自治区儿童A群和C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平调查

    李亚南;徐颖华;赵丹;毛琦琦;陈苏京;卢旭;李茂光;叶强;

    目的了解儿童体内流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)自然抗体水平。方法采用血清体外杀菌试验(serum bactericidal antibody,SBA)检测广西壮族自治区3 822份未接种流脑疫苗0~6岁儿童血清样本的A群和C群流脑抗体滴度,计算抗体几何平均滴度(GMT)和易感人群比例,并按不同组别(0~2月龄、3~5月龄、6~23月龄和2~6岁)进行统计分析。结果 6岁以下不同年龄组受试者的A群和C群流脑血清杀菌抗体GMT均小于1∶2;绝大多数受试者的A群和C群流脑血清杀菌抗体滴度低于1∶8,为流脑易感人群。不同年龄组之间A群流脑杀菌抗体滴度≥1∶8人群比例差异程度不同。而在2~6岁人群组中C群流脑杀菌抗体滴度≥1∶8的受试者比例显著高于其他年龄组(P<0.05)。结论 6岁以下儿童体内整体A群和C群流脑血清杀菌抗体水平低,为流脑易感人群,应接受流脑疫苗接种,并持续观察人群中流脑杀菌抗体动态变化。

    2018年09期 v.31 982-984+989页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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技术方法

  • 重组人表皮生长因子生物活性检测方法的建立及与其他显色方法的比较

    于雷;史新昌;刘兰;李响;裴德宁;饶春明;

    目的建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较。方法参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rh EGF生物学活性的检测方法,去除细胞饥饿的步骤,并用10%SDS代替DMSO,同时对培养3T3细胞的PRIM1640培养液的胎牛血清浓度(0、2%、5%、10%)进行优化。采用优化方法及药典方法同时检测rh EGF标准品,对灵敏度、信噪比、线性及孔间变异度进行比较。分别采用优化方法、MTS显色法、CCK-8显色法、结晶紫显色法、Cell Titer-Glo显色法检测同批rh EGF供试品,比较各方法的检测结果。结果优化方法的灵敏度(半数有效浓度为2.84 IU/m L)、信噪比(1.40)、线性(R2>0.99)和孔间变异度(95%可信区间为1.576%~3.334%)均优于药典方法,且实验周期由6 d缩短为5 d。5种显色方法对rh EGF供试品的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),CCK-8显色法检测结果的变异系数(CV)最小(16.8%),结晶紫显色法的CV值最大(23.3%)。结论优化方法更适用于rh EGF制品的常规生物学活性检测,且与其他4种显色方法等效。

    2018年09期 v.31 985-989页 [查看摘要][在线阅读][下载 268K]
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  • 反相高效液相色谱法检测吸附无细胞百白破联合疫苗2-苯氧乙醇含量

    邓海清;尹珊珊;刘杨;张艳红;郝倩;高宇皎;任玉莹;殷建齐;邢盛宇;刘建凯;

    目的建立检测吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTa P)中2-苯氧乙醇含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(1∶1),流速1.0 m L/min,检测波长270 nm,柱温25℃,以外标法测定2-苯氧乙醇含量,并对该方法进行线性、重复性、中间精密度、准确度、专属性、耐用性验证。结果 2-苯氧乙醇浓度在100~500μg/m L范围内,与峰面积线性关系良好,R2大于0.99;3批供试品重复性试验2-苯氧乙醇含量相对标准偏差(RSD)分别为0.8%、0.4%和1.2%,中间精密度验证2-苯氧乙醇含量RSD分别为2.38%、2.36%和2.68%;准确度回收率在97.4%~101.9%之间;供试品中加入戊二醛和甲醛对2-苯氧乙醇含量的检测无干扰,专属性较好;温度变化对检测结果无显著影响,耐用性较好。结论该检测方法简单、快速、可靠,可用于疫苗中2-苯氧乙醇含量检测。

    2018年09期 v.31 990-994页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K]
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  • 人新鲜全血体外热原检测方法对两种疫苗适用性的评价

    张媛;蔡彤;杜颖;吴彦霖;陈晨;高华;

    目的评价人新鲜全血体外热原检测方法对23价肺炎球菌多糖疫苗和双价肾综合征出血热灭活疫苗的适用性。方法分别选取不同厂家的10批23价肺炎球菌多糖疫苗和9批双价肾综合征出血热灭活疫苗,以白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-6为检测指标,采用加样回收干扰试验考察供试品对人新鲜全血体外热原检测法是否存在干扰,同时采用细菌内毒素动态显色测定法检测供试品,比较两种方法的检测结果。结果两种疫苗在最大有效稀释倍数内,干扰试验的回收率均在50%~200%,且热原物质含量均低于标准限值,均为合格样品,与细菌内毒素动态显色测定法结果一致。结论以IL-1β及IL-6为检测指标的人新鲜全血体外热原检测方法适用于两种疫苗。

    2018年09期 v.31 995-998页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K]
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  • 人乳头瘤病毒16型嵌合病毒样颗粒体外形成实验方法的建立

    张飞齐;杨露;杨晓明;

    目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型嵌合病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)体外形成实验的方法。方法以HPV16型L1为模板,将两个L2保守序列(aa56~75,aa108~120)分别插入L1两个可插入位点(DE袢状区,h4状区),构建出4种嵌合蛋白基因,利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统表达嵌合的4种VLP蛋白,经蔗糖密度梯度离心纯化,纯化的目的蛋白进行VLP体外解聚重聚实验,Western blot分析体外解聚重聚前后的蛋白。结果表达及纯化的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白相对分子质量均约60 000,大小与预期相符;经VLP体外解聚重聚实验,使不能很好自组装的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白组装形成VLP,并具有免疫原性。结论建立的方法有助于HPV嵌合VLP的形成,能够明显提高其组装效率,为以L2蛋白为目标的第二代HPV疫苗的嵌合VLP体外组装提供了可行的实验方法。

    2018年09期 v.31 999-1003+1010页 [查看摘要][在线阅读][下载 400K]
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  • 定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨变应原点刺液生物活性

    张影;李喆;鲁旭;幺山山;王斌;辛晓芳;曾明;

    目的建立一种稳定的屋尘螨点刺液生物活性测定方法,以替代现用的放射性吸附抑制测定方法(radio allergosorbent test,RAST)。方法建立定量ELISA竞争抑制法,对屋尘螨点刺液进行生物活性测定,并对该法进行精密性、准确性、适用性验证,确定线性测定范围。应用RAST和定量ELISA竞争抑制法平行测定3批屋尘螨点刺液生物活性,对结果进行比较。结果定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨点刺液制品生物活性,其最佳测定范围为0.052~0.125 HEP/m L;高、中、低3个浓度的日内精密性≤10.3%,日间精密性≤11%,回收率为87%~106%,表明该方法具有较好的精密性;低、中、高3个加标样本的回收率均在73.18%~99.02%之间,表明该方法具有较好的准确性;3批屋尘螨点刺液生物活性最佳测定范围的稀释度为1/48~1/192,所有测定样本的相对活性在80%~110%范围内,表明该方法适用于屋尘螨点刺液生物活性检测。两种方法测定屋尘螨点刺液生物活性,结果差异无统计学意义(P>0.05),且均符合质量标准规定。结论定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨点刺液的生物学活性,重复性好,准确性高,操作简便,可作为现用生物活性测定RAST法的替代方法。

    2018年09期 v.31 1004-1010页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • A群脑膜炎球菌多糖原液中苯酚残留量气相色谱检测方法的建立及验证

    涂晶;王吟;何亮;方舸;杨邦玲;

    目的建立A群脑膜炎球菌多糖原液中苯酚残留量气相色谱检测方法,并进行验证。方法采用标准溶液加入法,以乙酸丁酯为萃取剂制备对照品及供试品溶液,采用气相色谱法进行检测,色谱条件为:Agilent DB-WAX[聚乙二醇(PEG)强极性柱30 m×0.25 mm×0.25μm]色谱柱,柱温165℃,进样口温度250℃,检测器温度300℃,流速2 m L/min,载气为氮气,进样分流比5∶1,进样量1μL。对方法的专属性及系统适用性、检测限和定量限、线性范围、精密度、准确度进行验证。采用建立的方法检测9批A群脑膜炎球菌多糖原液苯酚残留量。结果苯酚的保留时间分别为5.046 min,拖尾因子为1.04,与乙酸乙酯的分离度为33.21,理论塔板数大于5 000;检测限为0.535×10-3mg/m L,定量限为1.070×10-3 mg/m L;浓度在4~20μg/m L范围内,与峰面积呈良好的线性关系,相关系数(r)为0.999 9;同一操作人员连续重复检测6次结果的相对标准偏差(RSD)为0.4%,2名试验员不同时间重复检测6次结果的RSD为1.5%;9份加标供试品溶液的回收率为95.8%~100.0%;9批A群脑膜炎球菌多糖原液中苯酚残留量均符合规定。结论建立的A群脑膜炎球菌多糖原液中苯酚残留量气相色谱检测方法,具有良好的重复性及准确性,可用于A群脑膜炎球菌多糖原液中的苯酚残留量检测。

    2018年09期 v.31 1011-1014页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K]
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  • 牛痘病毒GM-CSF注射液中GM-CSF活性及表达量的检测

    毕华;李永红;韩春梅;秦玺;史新昌;裴德宁;丁有学;饶春明;

    目的建立牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)注射液中GM-CSF活性及表达量的梯度分析法。方法采用TF-1细胞增殖法,四参数方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF生物学活性;采用ELISA法,二次方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF表达量。结果牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF的生物学活性呈量效依赖关系,随着GM-CSF浓度的增加,其GM-CSF的生物学活性增强,数据经四参数方程拟合后呈S型曲线,相关系数分别为0.953和0.997,将剂量反应曲线中直线部分的浓度对数和相应的吸光度值作直线回归,两回归线的斜率b之间差异无统计学意义(P>0.05);用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF活性,平均值为(181±16)GCU,变异系数为8.84%。牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF表达量呈量效依赖关系,随着稀释倍数的增加,GM-CSF的表达量也降低,采用二次方程进行拟合,r2均﹥0.99;用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF表达量,均符合表达量与感染浓度成正比升高的规律和趋势,且均>15 ng/m L。结论建立的方法稳定、可靠、适用性强,能表明病毒感染量与GM-CSF表达活性及表达量间的量效关系,对同类产品的质量控制具有借鉴意义。

    2018年09期 v.31 1015-1018+1023页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K]
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  • 明胶微球缓释系统的构建

    郝建丽;李雨桐;邱野;黄文宇;雷玉晶;李欣;杜伟伟;徐军;

    目的构建载药明胶微球缓释系统,并分析其体外缓释效果。方法以成球率、微球粒径均匀度、不黏连率为考察指标,正交设计优化明胶微球缓释系统的制备工艺,并以干扰素α2b(IFNα2b)为模型药物制备干扰素明胶缓释微球,通过载药试验确认其载药工艺后进行体外缓释效果观察。结果构建的载药明胶微球缓释系统成球率为(92.58±1.18)%,微球粒径均匀度为(82±0.2)%,不黏连率为(4.67±1.15)%;每克干扰素明胶缓释微球最佳载药剂量为每克微球4×10~6 IU,可在体外缓释64 h。结论载药明胶微球缓释系统制备工艺稳定,操作简便,产品体外缓释效果良好,可在缓释剂型领域广泛应用。

    2018年09期 v.31 1019-1023页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 新生牛血清血红蛋白含量测定能力的验证

    赵晨燕;马建;黄维金;

    目的验证各实验室检测新生牛血清血红蛋白含量的能力。方法采用纤维蛋白原析出法制备验证样品,并采用单因素方差考察样品的均匀性,t检验考察稳定性。组织24家实验室采用《中国药典》三部(2015版)规定的方法对验证样品进行检测,以各实验室结果的中位值作为样品血红蛋白的指定值,标准化四分位距(normalised interquartile range,NIQR)作为变动性度量值(目标标准偏差),计算Z比分数(Z值)。结果验证样品具有良好的均匀性及稳定性。24家实验室中,2家退出,20家检测结果为"满意"(|z|≤2),2家为"不满意"(|z|≥3)。结论参加验证的实验室满意率总体达89.5%,未取得满意结果的实验室可通过分析问题,找出原因并采取相应的整改措施。

    2018年09期 v.31 1024-1028页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K]
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综述

  • 糖基化基因修饰对重组蛋白表达及活性的影响

    周小菊;纳涛;马宁宁;袁宝珠;

    蛋白质翻译后修饰是蛋白质结构及功能成熟过程中的重要组成部分,其中的一种重要的翻译后修饰为蛋白质糖基化。许多影响细胞、组织、器官乃至生命的内源性蛋白或外源性重组蛋白(如治疗性重组蛋白或单克隆抗体),在细胞内成熟过程中几乎均会发生蛋白质糖基化修饰,而糖基化修饰的质和量的差异,可能会影响相关蛋白的表达水平、结构及功能。随着治疗性重组蛋白的需求和应用的不断发展,已出现了以改造治疗性重组蛋白为目的的蛋白质糖基化工程技术。该技术主要通过改变用于表达重组蛋白的宿主细胞中参与糖基化修饰的关键酶蛋白(糖苷酶及糖基转移酶),来影响重组蛋白的糖基化,从而改变重组蛋白的表达水平、结构及功能。本文介绍了重组蛋白糖基化修饰的类型及其生物学作用,重组蛋白糖基化修饰改造的策略,其中重点介绍了改变糖基化相关酶蛋白基因的活性的策略,经证明目前该糖基化工程策略是影响重组蛋白的表达及活性十分有效的方式。

    2018年09期 v.31 1029-1035+1039页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K]
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  • 疫苗冷链供应的扩大策略受控温度链的研究进展

    张洁;贺鹏飞;梁争论;徐苗;

    疫苗必须在2~8℃下保存,以确保其在生产、储存、运输和使用过程中的质量,但对于边远地区来说,疫苗冷链供应存在较大困难。为扩大疫苗供应范围至冷链难以覆盖的地区,提高免疫接种覆盖率,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提出了疫苗"受控温度链(controlled temperature chain,CTC)"方案。本文通过汇总和分析国际上CTC应用于疫苗供应的相关资料,结合我国国情,探讨通过疫苗稳定性研究及分析,采用CTC作为疫苗冷链供应之外的补充供应策略的可行性和必要性。

    2018年09期 v.31 1036-1039页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K]
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  • 生物制品中常用灭活剂的研究进展

    李军英;张家友;杨晓明;

    灭活是指采用物理或化学方法杀死生物制品中的病原微生物,使病原微生物丧失感染能力,保留免疫原性,使用后可产生免疫保护作用。物理灭活方法主要包括热灭活、紫外线灭活和γ射线灭活等;化学灭活方法主要是采用灭活剂进行灭活,为目前生物制品生产工艺中主要灭活方法。疫苗常用灭活剂主要包括甲醛、β-丙内酯(β-propionolactone,BPL)、烷化剂[乙酰基乙烯亚胺(N-acetyl ethylenimine,AEI)、二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)及缩水甘油醛]和双氧水等;血液制品常用灭活剂主要有S/D灭活剂及辛酸盐;其他生物制品常用灭活剂包括结晶紫及苯酚等。本文主要对这些灭活剂的种类、化学性质、灭活原理、应用现状作一综述。

    2018年09期 v.31 1040-1043页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K]
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专题报道

  • 疫苗稳定性研究的考虑要点

    李克雷;吴星;张洁;徐苗;郑海发;梁争论;

    <正>疫苗为生物活性物质,其抗原活性及免疫原性等生物特性易受到保存温度等条件的影响,因此,疫苗的生产、运输和储存均要求冷链保护。实际应用中,在向非洲等国家和偏远地区分发疫苗的最后阶段,较难始终维持冷链,免疫计划的实

    2018年09期 v.31 1044-1046页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K]
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  • 关于完善生物制品批准文号格式的考虑

    刘志磊;张彦彦;高恩明;杨建红;

    <正>药品批准文号是国家药品监督管理局批准药品生产企业生产药品的文号,是药品生产合法性的重要标志。进口药品注册证号是境外企业获得药品进口,允许药品在中国大陆上市销售的合法标志。国外以及中国香港、中国澳门和中国台湾地区生产的药品进入国内上市销售的,必须经国家药品监督管

    2018年09期 v.31 1047-1048页 [查看摘要][在线阅读][下载 58K]
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