中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 肺炎链球菌荚膜精制多糖及降解多糖的制备

    刘艳丽;曹欣;赵毅;高志鑫;张东旭;李旭阳;蔡悠扬;刘建凯;李跃龙;

    目的 制备高质量的肺炎链球菌荚膜精制多糖及降解多糖,以期用于肺炎链球菌多糖疫苗或多糖结合疫苗的制备。方法 取6A型肺炎链球菌灭活发酵液,采用酸沉淀法制备6A型精制多糖,并优化方法的CaCl_2终浓度(80、160、240、320 mmol/L)及pH(2.5、3.0、3.5、4.0)。采用优化方法制备3批6A型精制多糖,并验证该方法对5、7F、10A、19F型多糖的适用性。通过酸沉淀法去除6A型肺炎链球菌灭活发酵液杂质后,采用三氟乙酸法制备6A型降解多糖,并优化方法的反应温度(8、25和40℃)、三氟乙酸终浓度(0.25、0.50、1.00 mol/L)及反应时间(1、3、6 h)。采用优化方法制备3批降解多糖,并与高压均质法进行比较,再验证三氟乙酸法对5、10A、19F型降解多糖的适用性。精制多糖及降解多糖均按《中国药典》三部(2020版)规定的方法进行质量检测。结果 确定酸沉淀法最佳CaCl_2终浓度为160 mmol/L,最佳pH为3.0。制备的6A、5、7F、10A、19F型精制多糖质量均合格。确定三氟乙酸法最佳反应温度为25℃,反应时间为3 h,三氟乙酸终浓度为0.50 mol/L。制备的6A、5、10A、19F型降解多糖质量均合格。结论 制备的肺炎链球菌荚膜精制多糖和降解多糖均符合《中国药典》三部(2020版)要求,且制备工艺适用多种型别多糖的制备。

    2025年06期 v.38 641-646+651页 [查看摘要][在线阅读][下载 858K]
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基础研究

  • 人二倍体细胞2BS干细胞特性的鉴定

    王瑶;房吉庆;袁子维;李瑶玲;魏夏杰;孙云霞;杨英;饶春明;

    目的 鉴定人二倍体细胞2BS的干细胞特性,以评价其作为干细胞质量检测生物学功能阳性细胞的可行性。方法 通过流式细胞术检测2BS细胞中干细胞表面标志物的表达水平;茜素红S染色法检测2BS细胞成骨分化能力,阿利新蓝染色法检测成软骨分化能力,油红O染色法检测成脂分化能力;采用与淋巴细胞共培养的方法检测2BS细胞抑制淋巴细胞增殖的能力。结果 人二倍体细胞2BS可表达干细胞的表面标志物CD73、CD105、CD90,具有成骨分化及抑制淋巴细胞增殖的潜能。结论 人二倍体细胞2BS具有干细胞的部分特性,可作为干细胞流式细胞检测表面标志物的阳性对照。

    2025年06期 v.38 647-651页 [查看摘要][在线阅读][下载 1064K]
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  • 马赛分枝杆菌菌体蛋白的免疫原性分析

    谷宇杰;王瑞白;姜靖伟;赵秀芹;刘海灿;万康林;许达;

    目的 初步探讨马赛分枝杆菌菌体蛋白的免疫原性,以期为以马赛分枝杆菌为基础的免疫学方面的应用拓展奠定基础。方法 经超声破碎方式提取马赛分枝杆菌菌体蛋白,将获得的菌体蛋白单独或与DP佐剂[二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA)与聚肌胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,PolyI:C)混合]混合后,分别经皮下免疫雌性BALB/c小鼠,阴性对照组小鼠注射等量无菌PBS,每组8只,共免疫3次,间隔14 d;末次免疫后14 d,采血并取小鼠脾脏,ELISA法检测小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平;Luminex技术检测小鼠致敏脾淋巴细胞分泌的IL-2、IFNγ、TNF-α、IL-12、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、IL-17A、IL-4、IL-6和IL-10水平;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中中央记忆T细胞(central memory T cells,TCM)/IFNγ~+细胞的比例变化;生长抑制试验检测菌体蛋白免疫对结核分枝杆菌H37Rv在小鼠脾淋巴细胞内增殖的影响。结果 菌体蛋白及其与混合佐剂免疫小鼠均能诱导产生IgG、IgG1、IgG2a血清抗体。与阴性对照组相比,菌体蛋白及其与混合佐剂免疫小鼠组小鼠脾淋巴细胞IL-12分泌水平均无显著变化(0.60≤t≤2.41,P均>0.05),菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞经菌体蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)刺激后分泌的IFNγ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、GM-CSF和IL-17水平均显著上升(3.77≤t≤23.46,P均<0.05);菌体蛋白免疫组小鼠脾淋巴细胞经菌体蛋白和PPD刺激后分泌的IL-2、IL-4水平均显著上升(5.36≤t≤13.26,P均<0.05),TNF-α水平仅在PPD刺激时显著增加(t=4.15,P<0.05),IL-10水平在刺激后显著下降(t分别为3.04、4.10,P均<0.05),IL-6水平仅在菌体蛋白刺激时显著增加(t=8.34,P<0.05)。与阴性对照组相比,菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞经PPD和菌体蛋白刺激时,CD4~+TCM/IFNγ~+和CD8~+TCM/IFNγ~+细胞比例均显著增加(2.63≤t≤5.96,P均<0.05)。与阴性对照组相比,结核分枝杆菌H37Rv在菌体蛋白免疫及菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞内的增殖差异无统计学意义(t分别为2.29、1.10,P均> 0.05)。结论 马赛分枝杆菌菌体蛋白具有良好的免疫原性,能诱导倾向Th2型的免疫反应,与增强细胞免疫反应的佐剂联用可提高其诱导细胞免疫反应的水平。

    2025年06期 v.38 652-658+663页 [查看摘要][在线阅读][下载 984K]
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诊断制剂

  • 肠道病毒71型核酸检测试剂国家标准品的建立

    郝晓甜;马宁;李曼郁;周海卫;

    目的 建立第1代肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)核酸检测试剂国家标准品,用于相关试剂的质量评价。方法 收集EV71分离培养物,经灭活后稀释及冻干,制备EV71核酸检测试剂国家标准品。选择11家实验室,采用数字PCR法对标准品进行协作定值,根据定值结果确定标准品的浓度,并进行均匀性、稳定性以及适用性分析。结果 经标定,EV71核酸检测试剂国家标准品的浓度为(6.7±0.3)log_(10)U/mL(k=2);该标准品均匀性符合要求;4℃放置7 d、室温(25℃)放置3 d均不影响稳定性;适用性研究结果证实标准品能够对检测试剂的检出限等性能进行精确评价。结论 建立了第1代EV71核酸检测试剂国家标准品,为相关试剂检出限等性能指标的质量控制和评价提供了实物标准和依据。

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治疗制剂

  • 靶向人癌胚抗原相关细胞黏附分子5抗体偶联药物的制备及其生物学活性

    陈湛昊;张坤明;章权;吴丽娜;陆瑾;梁红远;瞿爱东;

    目的 制备靶向人癌胚抗原相关细胞黏附分子5(carcinoembryonic antigen cell adhesion molecule 5,CEACAM5)单克隆抗体及其抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),并对其生物学活性进行初步评价。方法 用人CEACAM5与hFc融合蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,采用电融合技术制备杂交瘤,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过RACE PCR法获得鼠源抗体的可变区序列,并构建嵌合抗体,采用ELISA法和流式细胞术对嵌合抗体的特性进行评价,报告基因法对嵌合抗体的抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)活性进行检测。利用糖基偶联技术制备ADC,并对其活性进行评价。结果 利用杂交瘤技术筛选获得1株具有特异性结合活性的杂交瘤细胞株,命名为mAb186;成功获得抗体可变区序列,并构建了嵌合抗体ch186,其特异性结合人CEACAM5的B3结构域,未检测到对靶细胞的ADCC活性。成功制备了偶联甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E,MMAE)小分子的ADC,其对靶细胞具有杀伤作用,且具有一定的剂量效应。结论 成功制备了特异性结合人CEACAM5的单克隆抗体,并对嵌合抗体和ADC的结合活性及细胞杀伤活性进行了评价。

    2025年06期 v.38 664-673页 [查看摘要][在线阅读][下载 1042K]
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  • 生长分化因子5在大肠埃希菌中的表达、纯化及其对骨关节炎的作用

    王选;冯永君;陈宣烨;赖朝丽;田海山;

    目的 建立生长分化因子5(growth differentiation factor 5,GDF5)蛋白制备工艺,并通过体内外试验探讨其在软骨损伤中的作用。方法 将gdf5基因与pCZN1载体连接构建重组质粒pCZN1-hGDF5,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS中,挑取单菌落,筛选高表达菌株,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达形式;建立包涵体清洗、变性及稀释复性方法,通过Ni亲和柱层析和DEAE离子交换柱层析纯化蛋白;以小鼠成软骨细胞ATDC5为检测细胞株,MTT法测定rhGDF5蛋白促细胞增殖生物学活性。建立白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导细胞损伤模型,通过RT-qPCR、Western blot法检测软骨相关基因及蛋白表达情况,阿利新蓝染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活力测定分析rhGDF5蛋白对软骨细胞分化的影响。通过冷溶法制备泊洛沙姆407(P407)和188(P188)温敏凝胶,流变仪检测其流变性。建立内侧半月板切除手术(destabilization of medial meniscus,DMM)诱发雄性C57BL/6J小鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型,经关节腔注射给药,每周1次,连续给药4周,处死小鼠,取其膝关节组织,经脱钙、石蜡包埋、切片后,进行番红固绿染色和免疫组化检测,并进行OARSI评分。结果 pCZN1-hGDF5重组质粒经双酶切(NcoⅠ/Bam HⅠ)鉴定构建正确。筛选的rhGDF5高表达菌株蛋白表达量占菌体总蛋白的35%;表达的蛋白主要以包涵体形式存在,经变复性和柱层析获得相对分子质量约25 000、电泳纯度> 95%的rhGDF5同源二聚体蛋白;rhGDF5蛋白在25~800 ng/mL剂量范围内呈现良好的促ATDC5细胞增殖作用,且高剂量蛋白未导致细胞毒性的发生;rhGDF5蛋白可有效促进软骨细胞数目增加和蛋白聚糖的分泌,并显著抑制ATDC5细胞ALP表达;细胞试验的RT-qPCR和Western blot结果显示,与IL-1β组相比,给予rhGDF5蛋白可使Ⅱ型胶原蛋白(collagen type 2,COL-2)和Y染色体性别决定区-盒转录因子9(SRY-box transcription factor 9,SOX9)的抑制得到有效逆转(COL-2:t分别为4.899和9.799,P均<0.05;SOX9:t分别为4.950和10.73,P均<0.05),基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)的表达得到显著抑制(t分别为6.500和23.51,P均<0.05)。冷溶法制备的含22%P407和5%P188的包载rhGDF5蛋白的泊洛沙姆温敏凝胶温度为(30.06±0.16)℃,胶凝时间为92.67 s。DMM小鼠OA模型试验结果表明,与对照组(0 ng/mL)相比,关节腔注射包载rhGDF5蛋白的温敏凝胶后,小鼠关节受损程度得到有效修复,其中以高剂量组修复效果最好,OARSI评分为1分;其次为中剂量组,OARSI评分为1.67分;低剂量组则无明显作用,OARSI得分为5.33分;免疫组化结果也显示,与对照组相比,给予rhGDF5蛋白治疗后,COL-2的分布增多。结论 成功建立了简单高效的rhGDF5包涵体蛋白复性、促二聚化及纯化关键制备工艺,并通过体内外试验证明了其对软骨的有效作用,为进一步开展OA治疗产品的研制提供了技术支持。

    2025年06期 v.38 674-684+690页 [查看摘要][在线阅读][下载 1123K]
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临床研究

  • 2007—2023年上海市奉贤区水痘突破病例流行病学特征分析

    李瑞平;胡亚强;万宽;顾琴妹;吴政强;吴雪红;沈志英;

    目的 了解2007—2023年上海市奉贤区水痘突破病例的流行病学特征,为有效预防控制水痘疫情提供参考。方法 通过中国疾病预防控制信息系统收集2007—2023年上海市奉贤区水痘报告病例,上海市免疫规划信息系统收集水痘病例的免疫史信息,采用描述性流行病学方法进行分析。结果 2007—2023年奉贤区共报告水痘突破病例2 175例,各年间突破病例占比在0.64%~36.29%之间,差异有统计学意义(χ~2=1 144.60,P<0.01)。水痘突破病例年龄集中在3~11岁,原发病例年龄集中在5~11和15~20岁,突破病例年龄分布偏向低龄化。水痘突破病例发病人群以托幼儿童和低年级学生为主,原发病例则以低年级学生和大学生为主,二者差异有统计学意义(χ~2=242.89,P<0.01)。水痘发病呈现冬季高峰;水痘突破病例发病高峰在接种疫苗后的第3~7年;自2017年调整水痘免疫程序后,1~6岁儿童水痘发病率呈下降趋势(R=-0.009,P=0.000)。结论 2007—2023年上海市奉贤区水痘突破病例占比呈逐年上升趋势;建议加强对托幼机构和学校的监测,加大卫生宣教力度;在接种首剂次疫苗3年后进行加强免疫意义重大;水痘免疫程序调整成效显著。

    2025年06期 v.38 685-690页 [查看摘要][在线阅读][下载 872K]
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技术方法

  • 人血清中诺如病毒GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体定量ELISA检测方法的建立及验证

    韩子泊;雷泽华;袁润余;孙振璐;杨森森;唐芳;张浩;杜丽芳;张靖;李启明;梁宇;

    目的 建立诺如病毒(Norovirus,NoV)GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,并进行验证,为NoV疫苗的免疫原性评价和血清流行病学研究提供更准确的抗体检测手段。方法 将高滴度NoV GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体阳性人血清混合后分装冻干,制成实验室参考品,采用四参数拟合计算半数有效浓度(EC_(50))进行多次独立标定。以标定后的实验室参考品为工作标准品,建立基于四参数法的NoV GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,并进行线性、测定范围、精密度、准确度验证。以GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体阴阳性人血清为供试品,采用接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法,基于检测结果的特异性和灵敏度,确定检测方法中用于阳性结果判定的cut-off值。结果 实验室参考品GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体效价标定结果分别为434.2和456.5。基于实验室参考品,建立了四参数法NoV GⅠ.1和GⅡ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,9次重复试验标准曲线R~2值均大于0.99;GⅠ.1型IgG抗体效价测定范围为2.714~0.042,GⅡ.4型为5.706~0.045;重复性试验相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)≤10%,中间精密度RSD≤25%;加标试验回收率范围为75%~125%。确定GⅠ.1型cut-off值为6.705(特异性为96.6%,敏感性为96.3%),GⅡ.4型为12.70(特异性和敏感性均为100%)。结论 通过制备和标定实验室NoV GⅠ.1和GⅡ.4型IgG阳性人血清,建立了一种基于四参数拟合标准曲线的NoV人IgG抗体定量ELISA检测方法,并初步确定了GⅠ.1和GⅡ.4型血清IgG结果判定的cut-off值,该方法测定范围较大,线性、精密度、准确度、特异性和灵敏度均良好。

    2025年06期 v.38 691-698页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K]
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  • 伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中己二酰肼残留量反向高效液相色谱检测方法的建立及验证

    任珍芸;周海飞;李正宇;苏春阳;李慧清;任浩锋;刘月萍;谭小梅;

    目的 建立伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中己二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)残留量的反向高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测方法,并进行优化、验证及初步应用,以期用于伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液或其他结合疫苗中ADH残留量的检测。方法 采用RP-HPLC法检测伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中ADH残留量,并优化检测波长(全波长)、流动相[10 mmol/L PBS(pH 7.0)+10%乙腈、10 mmol/L PBS(pH 7.0)+0.8%氯化钠溶液+10%甲醇+5 mmol/L乙酸铵溶液]、流速(0.8及1.0 mL/min),验证方法的专属性、线性范围、准确性、精密性,确定检测限及定量限。采用建立的方法检测3批伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中的ADH残留量。结果 确定最佳检测波长为202 nm,流动相为10 mmol/L PBS(pH 7.0)+0.8%氯化钠溶液+10%甲醇+5 mmol/L乙酸铵溶液,流速为1.0 mL/min。该方法能特异性测定结合物原液中的ADH残留,结合疫苗原液中其他成分对ADH峰的检测无干扰;对照品溶液ADH浓度在2~10μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,线性回归方程y=30 617 x+1 296.5,相关系数(R~2)=0.999 7;伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液ADH的加标回收率为91.70%~106.00%;精密性验证RSD均<8%;检测限及定量限分别为0.2和0.5μg/mL。3批伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液均未检出ADH残留。结论 建立的方法具有良好的专属性、精密性、准确性,且方便快捷,可应用于伤寒Vi多糖-蛋白结合疫苗原液中AOH残留量的检测。

    2025年06期 v.38 699-704页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K]
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  • 肺炎链球菌疫苗免疫后人血清中溶血、乳糜血以及反复冻融对ELISA临床评价方法的影响

    石刚;卢旭;郭丽娜;刘文宾;毛琦琦;李红;

    目的 探讨肺炎链球菌疫苗免疫后人血清中溶血、乳糜血以及反复冻融对ELISA检测抗肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体的影响,以期促进肺炎链球菌疫苗临床血清IgG抗体含量评价方法的不断发展和完善。方法 将同批复溶后以不同体积分装的实验室内质控血清09CS反复冻融1~12次,与单次冻融血清分别进行24个型别的IgG抗体检测,执行检测肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体含量ELISA试验,对检测结果进行系统分析;用实验室内质控血清09CS分别与免疫后溶血、乳糜血血清按照不同体积分数进行配制,分别进行24个型别的IgG抗体检测,重复3次,计算回收率。结果 单次和反复冻融血清分别检测24个型别IgG抗体,检测结果 R~2> 0.99,线性关系良好;对检测结果进行林氏一致性相关系数(Lin's concordance correlation coefficient,r_c)分析,得到r_c为0.992 3(95%CI:0.990 2~0.993 9),单次和反复冻融血清检测结果高度一致。溶血血清准确度回收率为74.65%,乳糜血血清准确度回收率为70.48%,均符合准确度±40%范围。结论 肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体含量的ELISA检测过程中,溶血和乳糜血血清以及血清反复冻融12次均不影响检测,均可满足肺炎链球菌疫苗临床血清抗体评价检测的要求。

    2025年06期 v.38 705-712页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K]
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  • 细菌内毒素动态显色检测方法的建立及在生物制品中的应用

    郭依依;申瑷琳;李娟娟;贾静波;张娟;李思雨;潘俊杰;程小玲;金玉翠;罗敏;段凯;马环;

    目的 建立细菌内毒素动态显色检测方法,探讨其在不同生物制品中应用的可行性。方法 使用动态显色法鲎试剂,进行标准曲线可靠性试验,通过干扰预试验确定稀释倍数,再进行正式干扰试验,同时对5种不同生物制品进行测定,并与凝胶法检测结果进行比较。结果 标准曲线的线性范围为0.005~0.5 EU/mL,标准曲线的相关系数(r)为0.999,肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)无干扰稀释倍数至少为800倍,Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)无干扰稀释倍数至少为400倍,乙型脑炎减毒活疫苗无干扰稀释倍数至少为500倍,吸附无细胞百白破联合疫苗无干扰稀释倍数至少为1 000倍,A群脑膜炎球菌多糖疫苗无干扰稀释倍数至少为10 000倍,各制品在无干扰稀释倍数下加标回收率均在50%~200%之间,符合药典要求,检测结果与凝胶限度法一致性较好,并符合企业限定标准。结论 动态显色法可用于定量检测生物制品中细菌内毒素的含量。

    2025年06期 v.38 713-718+724页 [查看摘要][在线阅读][下载 818K]
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  • 等效性检验法在胰高血糖素样肽-1受体激动剂药物生物学活性测定法相似性评价中的应用

    王鸣人;吴利红;田清雅;段徐华;邵泓;

    目的 探讨等效性检验法应用于胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)受体激动剂药物生物学活性测定中标准品与样品相似性评价的可行性,以期提高各类产品生物学活性的测定标准。方法 采集25批历史产品放行生物学活性检测数据,获得四参数拟合模型的各参数估计值及其标准误,以样品与标准品的斜率比值和动态范围比值(样品上下渐近线差值与标准品上下渐近线差值的比值)作为相似性评价指标,利用容忍区间法设定各指标的等效性界值。另采集86批GLP-1受体激动剂药物的生物学活性测定数据(57份标准品与样品生物学行为相似,29份标准品与样品生物学行为不相似),分别采用等效性检验法及F检验进行相似性判定,比较两种方法的真阳性率(通过率)和真阴性率(未通过率),并通过Kappa检验评价一致性。结果 样品与标准品斜率比值的等效性区间为0.64~1.56,动态范围比值的等效性区间为0.87~1.15。等效性检验的真阳性率为95%(54/57),真阴性率为86%(25/29);F检验的真阳性率为88%(50/57),真阴性率为72%(21/29)。两种方法一致性一般(Kappa=0.417)。结论 等效性检验法适用于GLP-1受体激动剂药物生物学活性测定法的相似性评价,且优于F检验。

    2025年06期 v.38 719-724页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K]
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  • 含血小板裂解液的新生牛血清替代胎牛血清培养BHK-21、Vero、HEK293T细胞的促生长效果评价

    王丽梅;王鑫;胡伟;詹建萍;吕淑敏;张永明;

    目的 比较含血小板裂解液(platelet lysate,PL)的新生牛血清(newborn calf serum,NBCS)与胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养BHK-21、Vero、HEK293T细胞的促生长效果,为探究PL-NBCS替代FBS培养细胞的可行性提供实验依据。方法 分别用PL-NBCS和FBS培养BHK-21、Vero和HEK293T细胞,通过对连续传代培养细胞的形态观察、细胞平均增殖密度、活率、倍增时间等动力学分析检测PL-NBCS对细胞的促生长作用。结果 PL-NBCS培养的3种细胞形态特征与FBS培养的细胞无显著差异。在两种培养条件下,细胞生长均呈“S”型。PL-NBCS与FBS培养的BHK-21细胞平均增殖密度、活率、倍增时间差异均无统计学意义(t分别为0.734、0.432和0.029,P分别为0.472、0.671和0.977);PL-NBCS培养的Vero细胞平均增殖密度和活率均高于FBS组,且平均倍增时间显著高于FBS组(t=2.228,P=0.042);PL-NBCS培养的HEK293T细胞平均增殖密度、活率及倍增时间均显著高于FBS组(t分别为2.309、2.848和2.682,P分别为0.033、0.011和0.015)。结论 PL-NBCS培养细胞促生长效果较好,可替代FBS传代培养细胞。

    2025年06期 v.38 725-730页 [查看摘要][在线阅读][下载 984K]
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  • 水痘-带状疱疹病毒-ORF7蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

    王梦涵;侯安奇;谭仕明;董翔;李爽;张夫坤;

    目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7原核蛋白,经Ni~(2+)亲和层析柱进行纯化;以ORF7原核蛋白为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选单抗杂交瘤细胞株,制备单抗,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性;叠加ELISA试验分析单抗抗原表位,经抗体配对筛选建立VZV-ORF7抗原的双抗体夹心ELISA检测方法,对方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证;用建立的方法检测3批VZV Oka-7S株收获物。结果 共获得4株稳定分泌抗VZVORF7的杂交瘤细胞株,分别命名为M2B5、M2G5、8C2和1C4,细胞培养上清效价均为10~4~10~5,腹水效价均为10~6~10~7;纯化的单抗在还原和非还原状态纯度均约为97%。4株单抗均可与VZV全病毒蛋白和纯化的ORF7原核蛋白发生特异性结合;确定M2G5为捕获抗体,M2B5-HRP为酶标抗体,二者最佳工作浓度分别为4μg/mL和1∶8 000;确定临界值为A_(450)=0.111,A_(450)≥0.111判定为阳性,<0.111判定为阴性。本方法标准曲线范围为3.9~250 ng/mL,拟合方式为四参数,标准曲线方程y=(0.049 5-2.24)/(1+x/97.8)~(1.27)+2.24,相关系数(R~2)为0.999,最低检测限为2.2 ng/mL;与四价流感病毒裂解疫苗、腮腺炎病毒、麻疹病毒均无交叉反应;批间及批内CV均<10%。3批VZV Oka-7S株检测结果均为阴性,符合率为100%。结论 建立的VZV-ORF7双抗体夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,重复性高,适用于VZV-ORF7蛋白以及VZV Oka和Oka-7S株的快速检测。

    2025年06期 v.38 731-737+745页 [查看摘要][在线阅读][下载 877K]
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综述

  • 人源诺如病毒候选疫苗的研究进展

    缪水娣;张菊梅;吴清平;薛亮;

    人源诺如病毒(human Norovirus,HuNoV)是全球急性胃肠炎的主要致病原,具有较高传染性,对儿童、老年人及免疫缺陷人群危害尤为突出。HuNoV为一种RNA病毒,极易变异,且具有丰富的遗传多样性,使HuNoV疫苗的研发具有较大困难,目前,尚无获批上市的相关产品。随着对HuNoV进化机制的深入认识、多种抗原表达系统的建立、不同免疫佐剂的开发等,HuNoV疫苗研发工作取得了较大进展。目前,已有多款HuNoV候选疫苗进行入临床试验阶段,获得了有效性、安全性、稳定性及免疫持续性等临床评价数据。本文就HuNoV候选疫苗抗原表达系统、免疫佐剂及临床试验等作一综述,以期为后续HuNoV疫苗研发提供参考。

    2025年06期 v.38 738-745页 [查看摘要][在线阅读][下载 880K]
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  • CpG ODN佐剂的最新研究进展与挑战

    张琳宇;董春艳;谭德讲;贺庆;

    佐剂是疫苗的重要组成部分,为了突破传统佐剂的弱点,开发新型佐剂至关重要。目前CpG ODN作为疫苗佐剂,在预防性抗病毒类、抗寄生虫类以及治疗性肿瘤疫苗的临床前和临床研究中均有应用,以CpG ODN 1018为佐剂的乙肝疫苗和新冠疫苗已获批上市;除CpG ODN与疫苗混合应用外,开发以CpG ODN为佐剂成分的抗肿瘤疫苗新型递送系统(如纳米颗粒、脂质体)是最主要的研究方向之一,同时CpG ODN的递送效率和靶向性还有待提高;除传统的皮下、肌内注射免疫途径外,CpG ODN也已应用于鼻内黏膜免疫佐剂的开发,其作为黏膜免疫佐剂的效用和机制尚未完全阐明;CpG ODN是Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂,能够激活天然免疫并进一步介导适应性免疫反应,其特点在于能够引起强大的Th1型免疫反应,尽管很多临床研究表明,CpG ODN佐剂仅引起轻微且短暂的不良反应,但也有研究表明,CpG ODN可能会由于促进Th1型反应而引发或加重自身免疫病和炎症综合征,如何克服CpG ODN佐剂这一缺点或许是未来该佐剂开发面临的一项挑战。本文就CpG ODN佐剂的最新研究进展与挑战作一综述。

    2025年06期 v.38 746-752页 [查看摘要][在线阅读][下载 873K]
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  • mRNA流感疫苗的研究进展

    杜婧妮;李状;吴业红;

    流感病毒具有高度变异性,是导致流感疫苗保护率较低的主要原因,保护率仅在20%~60%之间,因此需开发新型疫苗,以应对流感病毒的变异。mRNA流感疫苗的生产基于体外转录(in vitro transcription,IVT)技术的无细胞制造体系,可大幅降低生物安全风险,且具有免疫原性高,生产周期短等优点,使该疫苗可快速响应流感病毒的变异,已成为新型流感疫苗的研发热点之一。本文就mRNA疫苗历史及现状、mRNA流感疫苗的研究进展作一综述,以期为流感疫苗的迭代升级与广谱保护策略提供科学依据。

    2025年06期 v.38 753-757页 [查看摘要][在线阅读][下载 819K]
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  • CGRP/CGRPR靶向单克隆抗体及其在偏头痛治疗中的研究进展

    杜加亮;王兰;

    随着对偏头痛发生机制研究的不断深入,三叉神经血管系统中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在偏头痛发病机制中的作用备受关注,已成为治疗和预防偏头痛最有前途的靶点。截至2020年,已有4种CGRP/CGRP受体(CGRP receptor,CGRPR)靶向单克隆抗体药物获得美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)和/或欧洲药品管理局(European Medicines Agency,EMA)批准。本文就CGRP/CGRPR靶向单克隆抗体在偏头痛治疗中的研究进展作一综述。

    2025年06期 v.38 758-763页 [查看摘要][在线阅读][下载 841K]
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专题报道

  • WHO生物标准物质稳定性研究指南文件和研究实例对我国国家生物标准物质的启示

    王一平;张旋旋;毛群颖;梁争论;

    稳定性是标准物质的关键质量属性。为保障生物标准物质的稳定性,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)不断完善和细化国际(一级)和国家(二级)生物标准物质指南文件的相关规定,以提升稳定性研究和监测的科学性和可操作性。本文在归纳WHO生物标准物质稳定性研究相关指南文件及文献报道的国际生物标准物质研究实例的基础上,提出对我国国家生物标准物质稳定性研究和稳定性监测的思考及建议。

    2025年06期 v.38 764-768页 [查看摘要][在线阅读][下载 848K]
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