- 秦海洋;李佳铱;修朋程;聂建辉;黄维金;张黎;
目的 制备昆虫细胞Sf9和HighFive~(TM)(Hi5)DNA残留检测国家标准品，用于相关生物制品DNA残留检测方法的标准化。方法 用Genomic-tip 500/G试剂盒提取Sf9和Hi5细胞基因组DNA，采用紫外分光光度和琼脂糖凝胶电泳法检测DNA含量及纯度。均一性和稳定性分析合格后，由4家单位进行协作标定，对标准品进行定量和赋值。对标准品在荧光定量PCR和荧光染色法中的适用性进行评价。结果 获得了大量高纯度的昆虫细胞Sf9和Hi5基因组DNA,A_(260)/A_(280)均在1.7～2.0范围内，琼脂糖凝胶电泳图谱条带单一，均一性和稳定性均符合国家标准品要求。由4家独立实验室对2种昆虫细胞基因组DNA标准品进行协作标定，其中Sf9细胞DNA残留检测国家标准品几何平均含量为97.95μg/mL，平均含量的95%置信区间为97.27～98.40μg/mL，单次测定的95%参考值范围为92.02～103.76μg/mL;Hi5细胞DNA残留检测国家标准品几何平均含量为97.05μg/mL，平均含量的95%置信区间为96.61～97.72μg/mL，单次测定的95%参考值范围为91.46～102.90μg/mL。结论 成功制备了昆虫细胞Sf9和Hi5 DNA残留检测国家标准品，满足荧光定量PCR法和荧光染色法检测要求，可用于相关制品的DNA残留检测。
2025年11期 v.38 1335-1344页 [查看摘要][在线阅读][下载 1038K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 田纳;邓力;马天聪;李静华;高文蕊;于守智;潘淑媛;
目的 建立在Vero细胞中检测Ⅰ型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus-1,HSV-1）抗病毒药物敏感性的CCK-8(cell counting kit-8)法，经验证后，应用该方法进行野毒株及改造毒株的敏感性检测。方法 优化筛选CCK-8试剂培养时间（3、4、5 h）、阿昔洛韦（acyclovir,ACV）稀释倍数（2、4倍）及样品培养时间（72、96、120 h）后，建立检测HSV-1抗病毒药物敏感性的CCK-8法。对建立的方法进行专属性、准确度、重复性、系统适用性验证后，用其检测野生型HSV-1及其改造毒株oHSV-GFP、oHSV-GM-CSF对ACV的敏感性，并与空斑法进行比较。结果 建立的CCK-8法为：将HSV-1与不同浓度（5、1.25、0.313、0.078 1、0.019 5、0.004 88μg/mL）ACV混合后接种Vero细胞，培养72 h后，加入CCK-8试剂，继续培养4 h后，采用酶标仪检测450 nm波长处的吸光度值，并计算ACV对HSV-1的半数抑制浓度（IC_(50)）。测得ACV对oHSV-1标准毒株的IC_(50)值为0.13μg/mL。方法专属性、系统适应性良好，准确度验证样品回收率在70%～130%范围内，重复性验证样品回收率在70%～130%范围内，相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）<20%。ACV对野生型HSV-1及其改造毒株oHSV-GFP、oHSV-GM-CSF的IC_(50)值分别为0.10、0.09、0.11μg/mL。空斑法测得的ACV对野生型HSV-1毒株的IC_(50)值为0.15μg/mL，与CCK-8法检测结果接近。结论 建立的检测HSV-1对抗病毒药物敏感性的CCK-8法是一种简单、实用、有效的方法，可用于各种野生型HSV-1及改造毒株对各种抗病毒药物的敏感性研究。
2025年11期 v.38 1345-1350页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K] [下载次数：65 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 吴凡;刘勤;杨欢;申雪;王思捷;和文志;非成瑞;
目的 建立高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）-电喷雾检测器（charged aerosol detection,CAD）法测定新型冠状病毒mRNA疫苗中的蔗糖含量，并对方法进行验证及初步应用，以期为更多mRNA疫苗中的蔗糖含量测定提供新的检测方法。方法 色谱柱：Zorbax NH_2(Agilent,4.6 mm×250 mm,5.0μm)；色谱条件：以乙腈溶于水（乙腈50%）为流动相，流速0.8 mL/min，雾化温度70℃，检测器采集频率10 Hz，滤波3.6 s，柱温20℃。对方法的线性、定量限与检出限、专属性、重复性、准确性进行验证，并采用建立的方法检测3批新型冠状病毒mRNA疫苗中的蔗糖含量。结果 蔗糖标准品浓度在0.25～6 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好，相关系数（R）为0.998 6；该方法检出限和定量限分别为0.031 25和0.125 mg/mL；乳糖和蔗糖在本试验条件下能够完全分开，分离度为1.65;6份供试品峰面积的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为2.4%;3个不同浓度的加标溶液回收率为101.3%～102.2%。采用建立的方法检测3批新型冠状病毒mRNA疫苗样品的蔗糖含量分别为81.377 4、80.339 0和74.157 3 mg/mL。结论 建立的HPLC-CAD方法测定范围宽，线性和重复性好，准确性高，能够对新型冠状病毒mRNA疫苗中的蔗糖进行准确定量。
2025年11期 v.38 1351-1357页 [查看摘要][在线阅读][下载 916K] [下载次数：40 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ] - 杨雅岚;刘冰;崔永霏;李萌;武刚;于传飞;
目的 根据ICH Q2(R2)分析方法验证指导原则的相关要求，对拟收录《中国药典》三部（2025版）的单克隆抗体（简称单抗）分子大小变异体分析方法分子排阻高效液相色谱（size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC）法进行方法验证。方法 首先制定SEC-HPLC分析方法验证方案、可接受标准以及分析线性和仪器线性样品，再对方法进行专属性、范围、准确度和精密度验证；最后对试验结果进行分析统计，得到单抗SEC-HPLC分析方法验证报告。结果 该SEC-HPLC方法专属性较好，聚体的可报告范围为0.21%～8.33%，片段的可报告范围为0.06%～2.58%，单体的可报告范围≥89.09%；该方法的工作范围为5～300μg；聚体定量限为0.21%，片段定量限为0.06%；线性R~2> 0.99；平均回收率在80%～110%之间；重复性和中间精密度RSD<8%。结论 基于SECHPLC的单抗分子大小变异体分析方法专属性、范围、准确度和精密度均符合可接受标准。
2025年11期 v.38 1358-1365页 [查看摘要][在线阅读][下载 959K] [下载次数：78 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：49 ] - 申瑷琳;唐微;颜家驰;何红武;罗敏;俞娟;程尧;胡粉粉;朱琳;田瑶;陈才;潘婷;施金荣;
目的 采用BALB/c小鼠免疫结合ELISA法，建立新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）体内效力检验方法，探讨其影响因素后，进行方法验证。方法 新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）免疫小鼠14 d后，摘眼球采血并分离血清及灭活，采用ELISA法检测小鼠血清中特异性新型冠状病毒抗体效价。对小鼠2种动物来源和3种周龄以及检测试剂盒内关键试剂（包被板、酶稀释液、酶标抗体）各3批进行结果比对分析，并按照《中国药典》四部（2020版）9401生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则，对建立的方法进行精密度、专属性、相对准确度验证；采用建立的方法对10批新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）半成品的体内效力进行检测。结果 3批样品免疫不同来源小鼠检测结果的几何变异系数（geometric coefficient of variation,GCV）为17.1%～30.3%,2种来源小鼠检测结果在95%置信区间内差异无统计学意义（t=0.25,P > 0.05）；同一批样品免疫不同周龄小鼠检测结果 GCV为10.9%。同一批试剂盒、同一批抗体及不同批酶稀释液检测的A_(450-630)值GCV为4.8%，同一批试剂盒、同一批酶稀释液及不同批抗体检测的A_(450-630)值GCV为9.9%，同一批抗体、同一批酶稀释液及不同批酶标板检测的A_(450-630)值GCV为6.3%；同一实验人员对同一批半成品重复检测6次，GCV为9.1%～23.8%，不同实验人员在不同时间、不同地点检测的GCV为24.9%；氢氧化铝佐剂和阴性对照组抗体效价几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）的GCV为8.4%；同一样品在4个不同稀释度的相对偏倚（relative bias,RB）为-25.0%～21.7%。10批疫苗参考品效价为1 131～2 263,GCV为13.0%。结论 建立的小鼠免疫结合ELISA法具有较高的准确度、精密度，较好的专属性，可用于新型冠状病毒灭活疫苗（Vero细胞）体内效力检测，可作为产品有效性评价指标。
2025年11期 v.38 1366-1372+1380页 [查看摘要][在线阅读][下载 877K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 吕新阳;郭德乾;仇鹏;雷永红;林纪胜;廉晓娟;王见冬;胡雅灵;
目的 建立检测肺炎球菌多糖结合疫苗各产物中O-乙酰基和丙酮酸相对含量的核磁共振氢谱（~1H nuclear magnetic resonance,~1H NMR）法，并进行验证，为肺炎球菌多糖结合疫苗的研制及生产提供可靠的质量控制方法。方法 建立~1H NMR法，以荚膜多糖的甲基信号作为特征峰，计算多糖原液及各产物中O-乙酰基和丙酮酸的相对含量。对建立的方法进行线性及范围、专属性、准确度验证。用建立的方法检测采用还原胺化或氰酸酯法制备的肺炎球菌血清型1、4、7F、17F、18C和22F的降解多糖、活化多糖以及结合原液中O-乙酰基和丙酮酸的相对含量。结果 供试品浓度在2.5～20.0 mg/mL范围内，多糖特征峰积分面积之比相对稳定，该区间被确定为有效定量范围；内标物和重水无干扰，各血清型的定量峰无重叠，降解处理后的化学位移变化不影响峰识别；~1H NMR法检测的O-乙酰基和丙酮酸含量与吸光光度法结果基本一致。对于血清型1、7F、17F、18C和22F降解多糖、活化多糖、结合原液以及作为起始物料的多糖原液，O-乙酰基含量的RSD均不超过6.03%；而对于血清型4的多糖原液、降解多糖、活化多糖、结合原液以及起始物料的多糖原液，丙酮酸含量的RSD均不超过4.51%。结论~1H NMR法在测定O-乙酰基和丙酮酸含量方面表现出良好的重复性和普适性，适用于定量检测肺炎球菌多糖结合疫苗各产物中的O-乙酰基和丙酮酸含量。
2025年11期 v.38 1373-1380页 [查看摘要][在线阅读][下载 933K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：16 ] - 赵宇豪;赵沁;周勤;蔡敏;张幼捷;段徐华;邵泓;
目的 筛选免疫电泳法中可替代巴比妥缓冲液（barbiturate solution,BBTS）的缓冲液，并进行验证，以期获得更安全、环保，且与BBTS电泳效果相当的缓冲液。方法 配制三羟基氨基甲烷-乙二胺四乙酸二钠-醋酸（trihydroxy aminomethane-acetic acid-disodium ethylenediamine tetraacetate,TAE）、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（glycine-sodium hydroxide,Gly-NaOH）、三羟基氨基甲烷盐酸缓冲液（trihydroxy aminomethane-hydrochloric acid,Tris-HCl）、硼酸盐缓冲液（borate buffer solution,BBS）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution,PBS）共5种待考察的缓冲液，通过免疫电泳试验，以人血白蛋白和人免疫球蛋白为供试品，以沉淀弧清晰度和迁移距离为指标进行初筛与确认。并验证方法的专属性、耐用性、稳定性及适用性。结果 5种缓冲液中，TAE和PBS的电泳效果较好，人血白蛋白和人免疫球蛋白迁移距离适中，可形成清晰的沉淀弧，与BBTS电泳效果相当，且具有良好的专属性、耐用性、稳定性及适用性。结论 制备PBS所需的试剂更易获得、成本更低且使用更安全，最终选择PBS缓冲液作为免疫电泳法中BBTS的替代缓冲液。
2025年11期 v.38 1381-1386页 [查看摘要][在线阅读][下载 1015K] [下载次数：35 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ]