疫苗研究

• 口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）在SD大鼠体内的长期毒性试验

  栾春芳;姜晓明;王晓欣;许书珍;赵振伯;樊艳明;王继东;田蕾;孟凡红;

  目的 评价口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）在SD大鼠体内的长期毒性，为口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）的临床应用提供试验依据。方法 选取150只SPF级健康大鼠，试验组每组30只，雌雄各半，随机分为高剂量[口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）2剂/只]、低剂量[口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）1剂/只]、阴性对照（0.9%氯化钠4 mL/只）和溶媒对照（溶媒对照品4 mL/只）组，分别灌胃给药，每2周给药1次，共给药4次，观察大鼠临床表征并进行体质量、体温、眼科检查、临床病理（血细胞计数、凝血功能、血液生化和尿液分析）、病毒吸收、组织分布、大体剖检、主要脏器称重、组织病理学检查；卫星组30只，雌雄各半，随机分为高剂量[口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）2剂/只]、低剂量[口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗（Vero细胞）1剂/只]、阴性对照（0.9%氯化钠4 mL/只）组，用于免疫学指标检测和病毒脱落研究。结果 各组大鼠临床表征、体质量、体温、眼科检查、血液学、凝血功能、血液生化、尿液分析等指标均未见具有毒理学意义的规律性改变；高低剂量组大鼠均可检测到轮状病毒（rotavirus,RV）各型特异性IgA抗体，最高抗体滴度可达1∶80；各组大鼠脏器重量和脏器系数均未见与给药相关改变，组织病理学检查也未见与给药相关的系统毒性病理改变。结论 本次重复给药毒性试验未见全身毒性反应，认为未见不良反应剂量（no observed adverse effect level,NOAEL）为2剂/只。

  2026年03期 v.39 257-263页 [查看摘要][在线阅读][下载 954K]
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• 表达森林脑炎病毒prM-E蛋白重组水疱性口炎病毒的构建及鉴定

  宁玉莹;张罗苗缘;杨晓静;崔云;张幼迪;叶伟;袁若栋;蔡欣雨;张惠;雷迎峰;董阳超;张欠欠;

  目的 以水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）为载体，构建表达森林脑炎病毒（tick-borne encephalitis virus,TBEV）prM-E蛋白的重组病毒，并进行鉴定，为基于VSV载体的TBEV疫苗的研究奠定基础。方法 将TBEV森张株prM-E基因插入至VSV载体G与L基因之间，与分别表达VSV核蛋白（nucleoprotein,N）、磷蛋白（phosphoprotein,P）、糖蛋白（glycoprotein,G）和大蛋白（large protein,L）的辅助质粒共转染含T7 RNA聚合酶的痘病毒感染的BHK-21细胞，收集上清，经多次传代后获得稳定表达prM-E的重组病毒rVSV-TBEVprM-E。经Western blot、免疫荧光（immunofluorescence assay,IFA）和RT-PCR法鉴定rVSV-TBEVprM-E中prM-E蛋白和基因在细胞中的表达情况；空斑形成试验检测rVSV-TBEVprM-E在不同时间点的滴度并绘制生长曲线。结果 重组病毒rVSV-TBEVprM-E基因组中成功插入了TBEV prM-E基因，可检测到prM-E蛋白在BHK-21细胞中的表达。rVSV-TBEVprM-E连续传代后，病毒滴度可达6.75×10~5PFU/mL。结论 成功构建了表达prM-E蛋白的重组病毒rVSV-TBEVprM-E，为TBEV的相关研究奠定了基础。

  2026年03期 v.39 264-269+276页 [查看摘要][在线阅读][下载 1089K]
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基础研究

• 干扰鞘氨醇-1-磷酸受体1表达慢病毒质粒及其稳转THP-1细胞株的建立

  谭佳佳;赵玲;苏秋源;周海琴;莫世恩;卢芳芳;周洋;韦依;况燕;

  目的 构建干扰鞘氨醇-1-磷酸受体1(sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1PR1)表达的慢病毒质粒，并建立THP-1细胞稳转株，以期在细胞水平上深入研究S1PR1对巨噬细胞功能的影响及其在肿瘤发生发展中的作用机制。方法 根据NCBI数据库中登录的S1PR1基因（1901）序列，设计3对针对该基因shRNA序列的扩增引物，PCR法扩增目的基因，插入至载体pLKO.1-puro中，构建相应慢病毒质粒，进行单酶切及测序鉴定。将鉴定正确的质粒命名为pLKO.1-S1PR1-shRNA1、pLKO.1-S1PR1-shRNA2、pLKO.1-S1PR1-shRNA3，以包含stuffer序列的载体pLKO.1-puro作为对照（命名为pLKO.1-S1PR1-shNC）。将慢病毒质粒与慢病毒包装质粒共转入293T细胞进行病毒包装，浓缩后测定病毒液滴度。确定THP-1细胞的嘌呤霉素筛选浓度（0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL）、培养时间（0、24、48、72 h）和MOI(10、20、30、40、50)后，将慢病毒按最佳条件感染THP-1细胞，并经嘌呤霉素筛选，采用RT-qPCR和Western blot法分别检测各组THP-1细胞中S1PR1基因mRNA相对转录和SIPR1蛋白相对表达水平。结果 经单酶切和测序鉴定证明，慢病毒质粒pLKO.1-S1PR1-shRNA1、pLKO.1-S1PR1-shRNA2、pLKO.1-S1PR1-shRNA3构建正确。shNC、shRNA1、shRNA2、shRNA3组慢病毒滴度分别为9.5×10~9、4.25×10~9、2×10~9、4.4×10~9TU/mL。按最佳MOI=50感染THP-1细胞72 h，经1.5μg/mL嘌呤霉素筛选后，与shNC组比较，shRNA1、shRNA2、shRNA3组THP-1细胞中S1PR1基因mRNA相对转录水平均明显降低（F=44.916,P<0.001）;shRNA1组S1PR1蛋白相对表达水平虽降低，但差异无统计学意义（t=1.921,P > 0.05）,shRNA2、shRNA3组中的S1PR1蛋白相对表达水平均显著降低（t分别为8.730和6.957,P均<0.05）。结论 成功构建了干扰S1PR1表达的慢病毒质粒及其THP-1细胞稳转株，可用于后续深入研究。

  2026年03期 v.39 270-276页 [查看摘要][在线阅读][下载 1089K]
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• GⅡ.5型诺如病毒衣壳蛋白糖受体结合特征分析

  丛鑫;李涵博;黄丽素;段招军;

  目的 分析GⅡ.5型诺如病毒（norovirus,NoV）衣壳蛋白糖受体的结合特征，以期为NoV抗病毒药物和疫苗研发奠定基础。方法 采用原核系统分别表达GⅡ.5 N490和GⅡ.5 12X P蛋白，经谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析纯化后，通过ELISA法检测P蛋白与唾液和寡糖的结合特征；再对其与流行株GⅡ.17 KW308的结构进行分子模拟，并分析其与糖分子之间可能存在的结合位点。结果 GⅡ.5 N490和GⅡ.5 12X P蛋白表达产物相对分子质量均为61 000，主要以可溶形式表达于上清中，纯化后浓度为0.2 mg/mL。2株GⅡ.5的P蛋白可与大部分A、B、O分泌型和非分泌型唾液发生结合；GⅡ.5 N490 P蛋白可与H双糖结合，GⅡ.5 12X P蛋白可与H双糖和B三糖结合。2株GⅡ.5与GⅡ.17 KW308具有相似的空间构象；6个与寡糖相互作用的氨基酸位点中，GⅡ.5 N490和GⅡ.5 12X的Arg349、Asp378、Gly443与GⅡ.17 KW308相同，Asn375、Glu380和Phe444与GⅡ.17 KW308不同。结论 2株GⅡ.5的P蛋白与唾液结合特征相似，均具有广泛的易感人群，但与寡糖的结合模式略有不同。

  2026年03期 v.39 277-281+288页 [查看摘要][在线阅读][下载 1022K]
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诊断制剂

• 炭疽芽孢杆菌噬菌体内溶素PlyL的表达、纯化及其在炭疽芽孢杆菌检测中的作用

  徐铭晗;卢葛锦;景洁;梁冰;郑林;王子贤;李健楠;祝令伟;郭学军;韩鹏;

  目的 原核表达、纯化炭疽原噬菌体LambdaBa02内溶素PlyL，并探讨其在炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）检测中的作用，为特异性快速检测炭疽芽孢杆菌提供新策略。方法 参照GenBank登录的炭疽芽孢杆菌疫苗株CVCC40205序列，利用plyL基因特异性引物PCR扩增plyL基因，插入原核表达载体pET28a（+），构建重组表达质粒pET28a（+）-His-plyL，转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达，并优化诱导表达条件以增加可溶性表达，经镍柱亲和层析纯化获得重组PlyL蛋白。通过测定吸光度值判断重组PlyL蛋白的裂解活性，建立ELISA法评估其检测炭疽芽孢杆菌的灵敏度与特异性。结果 重组表达质粒pET28a（+）-His-plyL经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切及测序证明构建正确。最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于16℃诱导16 h，表达的重组PlyL蛋白相对分子质量约28 600，纯化浓缩后蛋白终浓度为2.55 mg/mL，纯度达80.6%。纯化的重组PlyL蛋白可降低炭疽芽孢杆菌培养液A_(600)值。初步建立的ELISA法检测炭疽芽孢杆菌的灵敏度为1×10~3CFU/mL，且与蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌等近缘菌株无交叉反应（P<0.000 1）。结论 成功原核表达并纯化了重组PlyL蛋白，其兼具高效裂解活性和菌种特异性，可作为炭疽芽孢杆菌快速检测的新型工具。

  2026年03期 v.39 282-288页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K]
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治疗制剂

• 抗菌肽CM25-6在2种酵母中的表达及抑菌活性比较

  谷韩实;赵梓含;胡海燕;张爱忠;姜宁;

  目的 比较抗菌肽（antimicrobial peptide,AMP）CM25-6在毕赤酵母与酿酒酵母2种表达体系中的表达效果及抑菌活性，旨在为其高效异源表达体系的筛选提供依据。方法 将CM25-6基因分别亚克隆至毕赤酵母表达载体pGAPZαA和酿酒酵母表达载体pYES2/CT/α-factor中，构建重组质粒，并分别转化至毕赤酵母SMD1168和酿酒酵母INVSc1中，Western blot法鉴定重组蛋白的特异性；在YPD培养基中进行扩大培养，经SDS-PAGE及BCA法动态检测重组蛋白的表达情况，并采用牛津杯法测定发酵上清液的抑菌活性。重组蛋白经Ni~(2+)螯合亲和层析纯化后，通过微量肉汤稀释法测定纯化产物的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）。结果 经PCR法和测序鉴定，2种重组酵母构建成功。重组毕赤酵母及重组酿酒酵母分泌的重组蛋白均可与小鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合，在YPD培养基中扩大表达后的相对分子质量均约8 480，且表达量于发酵60 h时达最高，分别达2.13和1.02 g/L。重组蛋白纯化产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和无乳链球菌均具有显著抑菌活性，且来源于毕赤酵母的纯化产物抑菌活性更高，其MIC(7.85～15.7μmol/L)低于来源于酿酒酵母的纯化产物（15.05～30.2μmol/L）。结论 AMP CM25-6在毕赤酵母系统中的表达量及产物抗菌活性均优于酿酒酵母系统，表明毕赤酵母更适合用于该AMP的异源表达与生产开发。

  2026年03期 v.39 289-295页 [查看摘要][在线阅读][下载 967K]
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• 结核分枝杆菌ESAT6-Fc融合蛋白的制备及其对小鼠过敏性鼻炎的疗效和安全性评价

  海买燕;王婧;杨茂胜;何海燕;张文轩;杨雨欣;杨媛;董子晗;张炜;万巧凤;

  目的 制备结核分枝杆菌ESAT6-Fc融合蛋白，并评价其对卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导小鼠过敏性鼻炎（allergic rhinitis,AR）的疗效及安全性，以期为新型AR免疫治疗剂的研发提供实验依据。方法 将重组质粒pcDNA3.1（+）-Rv3875-Fc转染至CHO-K1细胞，获得ESAT6-Fc融合蛋白，并经Protein G亲和层析柱纯化。将OVA致敏的雌性C57BL/6J小鼠AR模型随机分为5组：正常对照、OVA、CpG、ESAT6-Fc+CpG及地塞米松（dexamethasone,DEX）组，每组6只，经鼻腔给予相应制剂干预后，以OVA雾化激发。采用HE染色法评价小鼠鼻黏膜炎性浸润情况，ELISA法检测小鼠鼻腔灌洗液中组氨酸（histidine,HIS）、白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、IgE、IL-4、IL-13及IL-17A的含量；HE染色法观察心、肝、脾及肾脏组织结构变化情况，ELISA法检测小鼠心、肝、脾及肾脏中谷草转氨酶（glutamic oxaloacetic transaminase,AST）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）水平。结果 成功获得较高纯度（> 95%）的ESAT6-Fc融合蛋白。与正常对照组比较，OVA组小鼠鼻黏膜炎性细胞浸润显著加重（t=11.180,P<0.001），鼻腔灌洗液中HIS、LTB4、IgE、IL-4、IL-13和IL-17A水平均显著升高（t分别为3.843、4.237、5.996、3.561、4.544、5.773,P均<0.05）；与OVA组比较，ESAT6-Fc+CpG及DEX组小鼠鼻黏膜炎性细胞浸润显著减轻（t分别为4.472和5.582,P均<0.001），鼻腔灌洗液中HIS、IgE、LTB4、IL-4、IL-13及IL-17A的水平显著降低（t=0.000～1.061,P均<0.05）;ESAT6-Fc+CpG与DEX组的HIS、IgE、LTB4、IL-4、IL-13和IL-17A水平差异无统计学意义（t分别为0.048、0.000、0.968、1.061、0.375和0.638,P均> 0.05）。ESAT6-Fc鼻腔免疫未引起小鼠心、肝、脾、肾的病理损伤，且上述器官中AST及LDH水平与正常对照组比较，差异无统计学意义（t=0.001～1.036,P均> 0.05）。结论 制备的ESAT6-Fc融合蛋白具有较高纯度，经鼻腔免疫该融合蛋白能安全、有效地缓解OVA诱导的小鼠AR症状，抑制相关炎性因子表达，且未观察到明显器官毒性，表明ESAT6-Fc融合蛋白有望成为一种新型的AR免疫治疗剂。

  2026年03期 v.39 296-302+308页 [查看摘要][在线阅读][下载 1229K]
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临床研究

• 水痘减毒活疫苗在13岁及以上健康人群中的安全性及免疫原性

  李琼;双慧;钱小爱;肖劲松;李朝霞;柯昌显;李朝宏;杨北方;蔡岩;徐俊峰;

  目的 评价13岁及以上人群接种2剂水痘减毒活疫苗的安全性及免疫原性，以期为优化该人群的水痘疫苗接种策略提供科学依据。方法 于湖北省疾病预防控制中心下属2个分中心选择1 680名13～50岁健康青少年及成人，采用分层区组随机化方法分为13～16和17～50岁2个年龄层，各年龄层内，受试者按1∶1的比例随机分配至2种免疫程序组，分别于0、4及0、8周接种2剂水痘减毒活疫苗。收集每剂疫苗接种后30 min内的即时不良事件、0～14 d内的征集性不良事件、15～28 d内的所有不良事件，以及全程免疫后6个月内的严重不良事件（serious adverse event,SAE）。检测受试者免疫前，第2剂免疫前和全程免疫后28 d受试者血清中水痘病毒特异性抗体，并计算抗体阳性率（滴度≥1∶8）、阳转率（易感人群免后抗体滴度≥1∶8或非易感人群免后抗体滴度增长≥4倍）、几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）及几何增长倍数（geometric mean increase,GMI）。结果 1 680名受试者中，1 606名受试者完成本项研究，包括13～16岁年龄层807名和17～50岁年龄层799名。13～16和17～50岁年龄层分别发生288和340例次不良反应，均以1～2级为主，共发生4例3级不良事件（发热2例、接种部位瘙痒1例、接种部位肿胀1例）。接种后不良事件多发生于0～14 d内，全程免疫后6个月内未发生疫苗相关SAE。第2剂接种前和全免后28 d抗体阳性率均为100.00%(1 616/1 616)；抗体阳转率分别为55.32%及80.57%，后者显著高于前者（χ~2=235.325,P<0.000 1）;GMT分别为310.77和626.63，后者显著高于前者（t=-21.383,P<0.000 1）;GMI分别为3.68和7.42，后者显著高于前者（t=-4.387,P=0.012）。全程免疫后28 d,0、4与0、8周2种免疫程序的阳转率分别为80.52%和80.62%（χ~2分别为0.003和3.811,P分别为1.000和0.057）,GMT分别为628.57和624.67(t分别为-2.134和0.232,P分别为0.102和0.828),GMI分别为7.49和7.34(t=-0.366,P=0.733)。结论 水痘减毒活疫苗在13岁及以上健康人群中按2剂免疫程序接种具有良好的安全性和免疫原性，且0、4与0、8周2种免疫程序的免疫效果相当，可根据实际情况灵活选择接种间隔。

  2026年03期 v.39 303-308页 [查看摘要][在线阅读][下载 852K]
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• 马破伤风免疫球蛋白F(ab')₂的安全性、有效性和经济性评价

  吕慧;王瑞兰;雷鸣;周慧芳;管健;叶树培;任兆俊;黄仲义;

  目的 评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2的安全性、有效性和经济性，以期为其临床应用提供参考。方法 选取2021年11月23日—2022年10月31日因创伤就诊于6家研究中心，且需要注射破伤风免疫球蛋白制剂的患者为研究对象，观察马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2的皮肤过敏试验（简称皮试）阳性率和注射后不良事件（adverse event,AE）的发生率。抽取1家研究中心，评估该中心患者在接受马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2注射后破伤风的发生率。同时构建1个每万名患者的药物经济性模型，比较患者首选接种破伤风抗毒素（tetanus antitoxin,TAT）或马破伤风免疫球蛋白F(ab')_22种情景下因皮试阳性而改用人破伤风免疫球蛋白（tetanus immunoglobulin,TIG）后的药物成本差异。结果 共纳入422例患者，其中419例接受了马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2皮试，416例取得皮试结果，皮试阳性率为5.05%(21/416)。在395例皮试阴性且完成马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2注射的患者中，5例（1.27%）患者发生了与马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2相关的AE，主要包括皮疹和瘙痒；2例（0.51%）患者发生了与马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2相关的≥3级的AE，其中1例为速发严重过敏反应，1例为瘙痒；无患者发生与马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2相关的过敏性休克或死亡。抽取的研究中心的患者注射马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2后，均未发生破伤风。药物经济性评估模型显示，与TAT及TIG比较，马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2具有较高的药物经济性价值。结论 马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2在预防破伤风方面具有良好的真实世界疗效和安全性，且具有较高的药物经济学价值。

  2026年03期 v.39 309-313+325页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K]
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技术方法

• 基于质量源于设计理念优化柯萨奇病毒A6型的培养工艺

  万鑫;戴旱雨;肖奥;李伟;孟胜利;王泽鋆;郭靖;申硕;

  目的 基于质量源于设计（Quality by Design,QbD）理念，优化柯萨奇病毒A6型（Coxsackievirus A6,CV-A6）培养工艺，建立关键工艺参数设计空间，提高CV-A6产量。方法 结合石川图和失效模式效应分析（failure mode effects analysis,FMEA）进行工艺参数的风险评估，评估需进行试验研究的潜在重要或关键工艺参数。在确认的缩小模型中，应用完全析因试验设计研究潜在关键工艺参数对关键质量属性的影响，筛选有显著效应的关键工艺参数。使用中心复合表面设计对关键工艺参数进行优化，基于蒙特卡洛模拟确定关键工艺参数的设计空间，并在缩小和放大规模中对设计空间进行验证。结果 病毒培养规模、培养基种类、培养基碳酸氢钠（NaHCO_3）浓度、培养基血清浓度、接种感染复数（multiplicity of infection,MOI）、培养温度和培养时间风险优先值（risk priority number,RPN）> 27，为潜在重要或关键工艺参数。6孔细胞培养板和5层细胞工厂病毒增殖曲线保持一致，抗原含量和病毒滴度等价。完全析因试验设计结果显示，病毒培养温度、培养基DMEM占比、培养基NaHCO_3浓度对抗原含量和病毒滴度具有显著效应（P<0.05），病毒接种MOI和培养基血清浓度无显著效应（P > 0.05）。基于蒙特卡洛模拟确定的病毒培养温度、培养基DMEM占比和培养基NaHCO_3浓度设计空间分别为32.33～34.33℃、83%～100%、2～4 g/L。缩小和放大规模设计空间的抗原含量和病毒滴度验证值均满足规格限，且均落于拟合值的95%置信区间和95%预测区间内。工艺优化后，CV-A6培养时间为11～12 d，相比于工艺优化前，抗原含量提高约5倍，病毒滴度提高0.5～1.0 LgCCID_(50)/mL。结论 基于QbD理念，优化了CV-A6培养工艺，建立了关键工艺参数设计空间，且显著提高了CV-A6产量。

  2026年03期 v.39 314-325页 [查看摘要][在线阅读][下载 1080K]
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• 泊松分布法在Ⅱ型单纯疱疹病毒感染滴度测定中的应用

  王光裕;于雷;裴德宁;史新昌;魏长龙;周勇;梁成罡;

  目的 针对传统半数细胞培养感染剂量（CCID_(50)）法变异度高、操作繁琐的局限性，开发一种基于泊松分布原理的Ⅱ型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus 2,HSV2）溶瘤病毒（oncolytic viruses,OVs）感染滴度精准定量方法，以提高质量控制的准确性与稳定性。方法 通过优化Vero细胞培养条件（血清浓度和病毒感染后培养时间）建立稳定检测体系，分别采用传统CCID_(50)法和新型泊松分布法（基于高密度96孔微孔板，利用阴性孔数据进行最大似然估计）同步测定HSV2滴度。结果 传统CCID_(50)法测得病毒滴度均值为1.75×106 CCID_(50)/mL，相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为36.62%；而泊松分布法测得病毒滴度均值为7.94×10~5ifu/mL，变异度显著降低（RSD为12.59%）。结论 泊松分布法通过充分整合微孔板数据以减少随机误差，显著提升了病毒滴度测定的精确性和操作效率，为OVs质量评估提供了标准化、可靠性高的解决方案，具有广阔的临床应用前景。

  2026年03期 v.39 326-330页 [查看摘要][在线阅读][下载 799K]
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• 重组三价脊髓灰质炎疫苗抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及验证

  沙芳芳;隋秀文;晏巧玲;徐丽爽;段卓君;马腊腊;马卫;朱涛;

  目的 建立重组三价脊髓灰质炎（简称脊灰）疫苗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行方法优化、验证及初步应用，以期为疫苗的研发提供质控方法。方法 用Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型重组脊灰疫苗抗原免疫雄性新西兰大白兔，制备相应型别的多克隆抗体，以其作为包被抗体，经HRP标记后作为检测抗体，建立重组三价脊灰疫苗中3种型别抗原含量检测的双抗体夹心ELISA法。棋盘滴定法确定包被抗体浓度及检测抗体稀释度，单因素试验优化封闭液种类、抗体冻干时间、酶标抗体稀释液及显色液配方，并验证方法的线性范围、准确性、特异性、精密性、定量下限、耐用性及稳定性。采用建立的方法检测重组三价脊髓灰质炎疫苗中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型抗原含量。结果 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型抗原最佳包被抗体浓度为5μg/mL，最佳酶标抗体稀释度分别为4 000、9 000和5 000倍；最佳封闭液为1%BSA，冻干时间为2 h，酶标抗体稀释液为1%BSA+1%蔗糖+1%海藻糖+0.01%硫柳汞钠，显色液为配方2(A液：醋酸钠13.6 g，柠檬酸1.6 g,30%双氧水0.3 mL，蒸馏水加至500 mL;B液：乙二胺四乙酸二钠0.2 g，柠檬酸0.95 g，甘油50 mL,TMB 0.15 g，蒸馏水加至500 mL，其中TMB需先溶解于DMSO中，再缓慢加入蒸馏水中)。Ⅰ、Ⅱ型抗原浓度在0.78～25 DU/mL范围内，Ⅲ型抗原浓度在1.56～50 DU/mL范围内，与A_(450)均呈良好的线性关系，且R~2均> 0.99;3种型别抗原含量检测方法的高、中、低浓度加标样本回收率均在80%～120%之间；3种型别抗原检测方法均可检出相应的特异性抗原，与其他2种抗原无交叉反应；Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型抗原检测方法的定量下限分别为1.56、1.56、3.13 DU/mL；精密性和耐用性验证CV均<20%；抗体包被板、检测抗体工作液、显色液在4℃稳定储存6个月，3种型别抗原回收率均在80%～120%范围内。用建立的方法检测疫苗工艺过程中的收获液、澄清液、浓缩液、离子交换层析液、回收液和原液样品，CV均<15%。结论 建立的双抗体夹心ELISA定量检测法具有良好的特异性、准确性、精密性、耐用性及稳定性，可用于重组三价脊灰疫苗研发中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型抗原含量的检测。

  2026年03期 v.39 331-341+349页 [查看摘要][在线阅读][下载 969K]
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综述

• 黏膜疫苗及其有效性评价

  王宏宇;梁景辉;张媛;贺庆;

  黏膜是引发人类传染性疾病的主要部位。高传染性和致死率使传染性疾病严重危害人类健康，而黏膜疫苗通过诱发黏膜以及全身免疫反应成为预防或治疗传染性疾病的有效手段。本文对黏膜免疫系统的结构和应答机制以及疫苗设计中的佐剂和递送策略作一综述，并重点探讨了免疫保护效力的多维度评价体系，涵盖了抗体反应、中和能力、抗体亲和力及组织驻留记忆细胞等关键指标，为未来研发更加高效的黏膜疫苗提供参考。

  2026年03期 v.39 342-349页 [查看摘要][在线阅读][下载 958K]
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• T细胞衔接器药物的研究进展

  常东峰;孙召朋;

  T细胞衔接器（T-cell engager,TCE）可通过双靶向机制桥接T细胞与靶细胞，激活T细胞特异性杀伤功能，成为肿瘤及自身免疫疾病治疗的新策略。在血液肿瘤治疗领域中，TCE药物CD19/CD3双抗Blinatumomab可显著改善复发/难治性B细胞肿瘤疗效；由于实体瘤中抗原脱靶毒性及免疫抑制微环境（T细胞浸润不足、抑制因子富集等）受限，目前改良策略为优选高特异靶点[如δ样蛋白3(delta-like protein 3,DLL3)、紧密连接蛋白18.2(claudin 18.2,CLDN18.2)等]，相关药物如Tarlatamab已获批应用于小细胞肺癌；在自身免疫疾病治疗领域，TCE可精准清除病理细胞亚群[（如CD3/CD19耗竭B/前浆细胞、CD3/B细胞成熟抗原（B-cell maturation antigen,BCMA）靶向浆细胞等）]，突破传统疗法局限。本文就TCE药物的作用机制、CD3在TCE靶向治疗中的信号枢纽作用及TCE药物的研究进展作一综述，以期为优化TCE临床转化路径、开发新一代免疫重编程技术提供参考。

  2026年03期 v.39 350-359页 [查看摘要][在线阅读][下载 902K]
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• 表观遗传调控在肝细胞癌侵袭转移中作用的研究进展

  董文浩;王焕焕;刘芳;陈彻;

  肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的原发性肝癌类型，也是全球肿瘤死亡的主要原因之一。HCC的发病率和致死率均呈上升趋势，其侵袭性和转移性是影响患者预后的关键因素。近年，表观遗传学的研究为揭示HCC发生发展的分子机制提供了新视角，表观遗传改变（如组蛋白修饰、DNA甲基化）与HCC的各种侵袭和转移机制密切相关。本文就HCC侵袭和转移相关的表观遗传修饰及其分子机制作一综述，探索表观遗传修饰在HCC生物标志物中的应用，以期为HCC转移早期诊断及治疗提供依据。

  2026年03期 v.39 360-369页 [查看摘要][在线阅读][下载 967K]
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专题报道

• 近年来吉林省生物制品生产企业无菌保障问题探讨

  杨希凡;苑国辉;李娜;孙文;王晗;阎威文;王琳;

  在日常药品生产质量管理规范（Good Manufacturing Practice,GMP）符合性监管过程中，基于风险控制理念进行定期监督检查，发现吉林省生物制品生产企业在无菌产品生产的设备设施设计、气流流型控制、清洁消毒管理、环境监测、无菌工艺模拟和人员更衣管理等方面与国内外最新监管标准尚存差距，本文对上述问题进行了汇总分析，并结合生物制品成分易于滋生微生物的特点，基于近期国内外法规更新和吉林省生物制品生产企业GMP符合性检查中无菌生产缺陷的统计分析，探讨生物制品无菌保障水平发展方向，为日后监管和企业无菌保障能力提升提供理论支持。

  2026年03期 v.39 370-373+384页 [查看摘要][在线阅读][下载 802K]
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• 中国《药品生产质量管理规范》生物制品附录第59条的解析与应用

  康鹰;许秦;马岩松;

  中国《药品生产质量管理规范》（Good Manufacturing Practice,GMP）生物制品附录第59条要求疫苗生产企业采用信息化手段记录生产及检验数据，确保全过程符合法定要求，旨在解决传统纸质记录存在的易丢失、易篡改问题，提升数据完整性和可追溯性，本文对该条款进行了详细解析。通过构建制造执行系统（Manufacturing Execution System,MES）及实验室信息管理系统（Laboratory Information Management System,LIMS），疫苗生产企业可实现生产与检验数据的实时监控、自动存档及权限控制，强化疫苗生产关键工艺参数和关键质量属性的信息化管理。本文还探讨了MES、LIMS系统建设难点与解决策略，包括数据采集、完整性保障、业务流程重构等，并提出了现场检查关注重点，如数据完整性、系统验证等，以期为疫苗企业信息化建设提供指导。

  2026年03期 v.39 374-384页 [查看摘要][在线阅读][下载 1022K]
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